基因甲基化在宮頸癌中的研究進(jìn)展

李桐，張燦，宋芳，王建東#

1首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院婦瘤科，北京 100006

2安徽同科生物科技有限公司，安徽 六安 237300

宮頸癌是最常見的三大婦科腫瘤之一，也是女性第二大常見的惡性腫瘤[1]。目前普遍認(rèn)為，高危型人乳頭瘤病毒（high-risk human papilloma virus，HR-HPV）持續(xù)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelialneoplasia，CIN）發(fā)展為惡性腫瘤的直接原因。乳頭瘤病毒（papilloma virus，PV）是一種可以感染爬行類、鳥類和哺乳類等脊椎動(dòng)物的小型雙鏈DNA病毒[2-3]。人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）主要是通過感染皮膚和黏膜鱗狀上皮的基底細(xì)胞先引起微小磨損而后產(chǎn)生損傷。大部分HPV可被宿主免疫系統(tǒng)清除，患者并無癥狀或僅有較小損傷，只有某些特定的HPV產(chǎn)生持續(xù)性感染，開始是以環(huán)狀DNA方式自我復(fù)制，隨著病情進(jìn)展，有些HPV整合到宿主細(xì)胞DNA中，造成宿主細(xì)胞異常分化并導(dǎo)致癌變[4]。HPV基因組是一個(gè)8000 bp左右的雙鏈環(huán)狀DNA，包含3個(gè)功能區(qū)域：早期蛋白編碼區(qū)（E1～E7）、晚期蛋白編碼區(qū)（L1和L2）和長(zhǎng)控制區(qū)（long control region，LCR）[5]。早期蛋白編碼區(qū)E1～E2參與HPV基因組的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，晚期蛋白編碼區(qū)L1和L2及其包裹的病毒DNA為基因轉(zhuǎn)錄復(fù)制調(diào)控區(qū)，晚期蛋白編碼區(qū)編碼組成病毒衣殼的結(jié)構(gòu)蛋白，L1、L2蛋白分別是病毒的主要和次要衣殼蛋白[6]。LCR作為調(diào)控區(qū)域，與E2蛋白結(jié)合調(diào)控E6和E7基因的表達(dá)[7]。根據(jù)感染能力，可將HPV分為HR-HPV和低危型HPV（low-risk HPV，LR-HPV），HR-HPV的主要致癌基因是E6和E7[8]。E6和E7蛋白參與眾多致癌過程，例如維持細(xì)胞增殖、逃避細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、造成基因組不穩(wěn)定和突變、阻止細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲、誘導(dǎo)血管生成等過程[9]。

表觀遺傳學(xué)是指非基因序列改變導(dǎo)致的基因表達(dá)水平的變化。常見的表觀遺傳學(xué)改變有DNA甲基化、組蛋白乙?；?去乙酰化、染色體重塑、染色體失活、基因組印記、非編碼RNA的調(diào)控等。研究表明，表觀遺傳學(xué)修飾將會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、轉(zhuǎn)化等與腫瘤相關(guān)的生物學(xué)過程[10]。DNA甲基化是目前研究最清楚、最重要的表觀遺傳修飾形式。在哺乳動(dòng)物體細(xì)胞中，DNA甲基化是在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸聚集的DNA區(qū)域稱為CpG島，該區(qū)域平均長(zhǎng)度為10 000個(gè)堿基對(duì)，G+C堿基的含量至少占50%，通常位于基因的5'調(diào)控區(qū)。大約60%的人類基因啟動(dòng)子與CpG島相關(guān)，并且呈非甲基化狀態(tài)，約6%人類基因啟動(dòng)子區(qū)域的CpG島在早期發(fā)育和分化的細(xì)胞中以組織特異性方式甲基化，介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄沉默[11-12]。已有研究揭示了DNA甲基化可通過不同機(jī)制調(diào)控基因表達(dá)：①可促進(jìn)與甲基化CpG結(jié)合蛋白的結(jié)合能力，募集組蛋白修飾和染色體重塑復(fù)合物至甲基化的CpG位點(diǎn)，從而介導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄抑制[13]；②胞嘧啶甲基化也可以通過阻斷轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)合到相關(guān)DNA序列上，直接抑制轉(zhuǎn)錄[14]；③在哺乳動(dòng)物DNA中大多數(shù)5-甲基胞嘧啶在重復(fù)序列中被發(fā)現(xiàn)，這種DNA甲基化在防止基因易位、保護(hù)染色體完整性中發(fā)揮著重要作用[15]。在腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)很多基因的CpG島發(fā)生甲基化，主要包括腫瘤抑制基因和細(xì)胞周期相關(guān)基因。由病毒誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了DNA甲基化改變，腫瘤相關(guān)病毒可以編碼影響DNA甲基化的致癌蛋白，從而改變宿主和病毒基因的表達(dá)。本文就近年來宮頸癌中DNA甲基化改變及其致癌機(jī)制的研究進(jìn)展作一綜述，以期更好地了解宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程，進(jìn)一步推進(jìn)宮頸癌的防治。

1 宮頸癌變中宿主DNA甲基化

在宮頸癌中，異常DNA甲基化包括低甲基化和高甲基化兩種模式。低甲基化一般發(fā)生在基因的啟動(dòng)子區(qū)域，已發(fā)現(xiàn)主要有STK31、COL17A1和核糖體DNA三個(gè)基因。研究表明，在HPV16/18感染的宮頸癌細(xì)胞系中STK31基因啟動(dòng)子區(qū)域出現(xiàn)低甲基化，并誘導(dǎo)了HPV16 E6/E7的整合[16]。另有研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌細(xì)胞中COL17A1基因的啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生低甲基化，增加了宮頸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力，提示COL17A1基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)可用于預(yù)測(cè)患者預(yù)后，改變COL17A1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)可能是預(yù)防宮頸癌轉(zhuǎn)移的一種新策略[17]。

在CIN和宮頸癌組織中，DNA高甲基化較為常見，且宮頸癌組織中DNA甲基化水平高于CIN和正常宮頸組織，表明甲基化水平升高與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[16]。研究發(fā)現(xiàn)，CDKN2A轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)下游區(qū)域的DNA甲基化可導(dǎo)致p16（INK4a）/p14（ARF）表達(dá)水平增加，這在宮頸早期病變中具有重要作用[18]。SALL3是一種腫瘤抑制基因，HPV感染可介導(dǎo)SALL3基因啟動(dòng)子區(qū)域高甲基化，誘導(dǎo)SALL3的抑癌功能失活，從而促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生[19]。研究表明，γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）基因甲基化在宮頸癌、CINⅠ級(jí)、CINⅡ～Ⅲ級(jí)及正常宮頸組織中的發(fā)生率分別為34.9%、13.0%、15.4%及4.7%。另外，在發(fā)生甲基化的宮頸癌組織中，IFN-γmRNA的表達(dá)水平低于未發(fā)生甲基化的宮頸癌組織；在發(fā)生甲基化的CINⅡ～Ⅲ級(jí)組織中，IFN-γmRNA的表達(dá)水平明顯低于未發(fā)生甲基化的CINⅡ～Ⅲ級(jí)組織[20]。宮頸活檢發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞黏附分子1（cell adhesion molecule 1，CADM 1）/T淋巴細(xì)胞成熟相關(guān)蛋白（T-lymphocyte maturation-associated protein，MAL）基因甲基化程度隨著病變嚴(yán)重程度的增加而增加，尤其在CINⅢ級(jí)和宮頸癌中CADM 1/MAL的甲基化程度最高[21]。研究表明，宮頸癌、CINⅢ級(jí)及CINⅡ級(jí)組織中LINE1、HS3ST2、CCNA1、EPB41L3、EDNRB、LMX1、DPYS、PAX1基因的甲基化水平均高于正常宮頸組織和CINⅠ級(jí)組織[22-24]。研究發(fā)現(xiàn)，死亡相關(guān)蛋白激酶1（death associated protein kinase 1，DAPK1）啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與宮頸病變的分級(jí)呈正相關(guān)（P＜0.05），DAPK1聯(lián)合O-6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（O-6-methylguanine-DNAmethyltransferase，MGMT）基因、MGMT聯(lián)合維甲酸受體β（retinoic acid receptor beta，RARB）基因、DAPK1聯(lián)合RARB基因等甲基化均與宮頸病變的分級(jí)呈正相關(guān)（P＜0.05）[25]。宮頸癌組織中Keap1基因啟動(dòng)子CpG島發(fā)生高甲基化可導(dǎo)致kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（kelchlike ECH-associated protein 1，KEAP1）的表達(dá)水平降低，核轉(zhuǎn)錄因子紅細(xì)胞系相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，NRF2）的表達(dá)水平升高，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[26]。腫瘤抑制基因LDOC1在宮頸癌細(xì)胞系中表達(dá)沉默，對(duì)啟動(dòng)子的甲基化情況進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LDOC1啟動(dòng)子發(fā)生高甲基化導(dǎo)致LDOC1表達(dá)沉默，而這一現(xiàn)象可以通過DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑得到恢復(fù)，表明LDOC1可能成為宮頸癌的潛在分子標(biāo)志物[27]。TSLC1是一種腫瘤抑制基因，研究發(fā)現(xiàn)TSLC1基因啟動(dòng)子甲基化可能是宮頸癌發(fā)生的早期事件，TSLC1可作為宮頸癌早期的敏感標(biāo)志物，為其預(yù)防提供依據(jù)[28]。Kabekkodu等[29]研究表明，在宮頸癌發(fā)生過程中，DOC2B基因啟動(dòng)子高甲基化和基因表達(dá)沉默是一個(gè)早期且高頻事件，DNA啟動(dòng)子甲基化可導(dǎo)致其表達(dá)水平降低，促進(jìn)克隆形成和細(xì)胞增殖，同時(shí)發(fā)現(xiàn)DOC2B基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化抑制了蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）和胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）1/2信號(hào)通路。由此可見，這些基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)于宮頸癌的臨床分期和腫瘤分級(jí)具有重要意義。

2 宮頸癌變中HPV基因甲基化

HPV基因組發(fā)生甲基化能夠阻止其被清除，從而維持持久的感染狀態(tài)。HPV基因組甲基化在宮頸癌的發(fā)生過程中具有重要作用。目前，有關(guān)HPV中L1、L2、LCR區(qū)域CpG位點(diǎn)甲基化的研究最多，這些區(qū)域的甲基化與宮頸癌和CIN的發(fā)生具有密切關(guān)系。HPVL1基因甲基化是宮頸組織發(fā)生惡變的危險(xiǎn)因素。研究表明，HPV16L1基因甲基化與惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，利用甲基化敏感性高分辨率熔解（methylation-sensitive high resolution melting，MS-HRM）曲線檢測(cè)HPV16L1基因甲基化可能成為檢測(cè)HPV16陽性的一種有效方法，可以識(shí)別出具有侵襲性惡性腫瘤的高風(fēng)險(xiǎn)患者，同時(shí)發(fā)現(xiàn)HPV16L1基因甲基化可影響E6、E7mRNA的表達(dá)[30-31]。HPV16L1、L2和E5基因CpG位點(diǎn)甲基化可成為診斷HPV16陽性的CINⅡ級(jí)病變的生物 標(biāo) 志 物[32]。 HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52、HPV51和HPV58的L1和L2基因的CpG位點(diǎn)異常甲基化與CIN發(fā)生的早期階段有關(guān)，可成為宮頸惡性瘤變的生物標(biāo)志物[33-34]。另有研究發(fā)現(xiàn)，年輕女性中HPV16L1、L2甲基化與宮頸病變的分級(jí)具有弱相關(guān)性，提示HPV甲基化作為生物標(biāo)志物需要考慮年齡因素[35]。

在宮頸癌中，甲基化改變不僅發(fā)生在DNA水平，還發(fā)生在RNA和蛋白質(zhì)水平。N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）是一種普遍存在且保守的RNA修飾，通過影響mRNA的剪接、運(yùn)輸、定位、傳導(dǎo)和翻譯參與細(xì)胞分化、代謝、免疫耐受和神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)等生物學(xué)過程[36]。目前有關(guān)m6A在宮頸癌中作用的研究較少，然而非編碼RNA的甲基化調(diào)控在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用也是不可忽視的。研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌中微小RNA（m icroRNA，m iRNA）-9前體啟動(dòng)子的高甲基化導(dǎo)致miRNA-9表達(dá)水平下調(diào)，從而削弱了對(duì)白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）/Janus激酶（Janus kinase，JAK）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）信號(hào)通路的抑制作用[37]。HPV16E6參與miRNA-23b啟動(dòng)子甲基化調(diào)控，通過下調(diào)miRNA-23b的表達(dá)水平，從而增強(qiáng)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（hepatocyte grow th factor receptor，HGFR，也稱 c-met）的活性，誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡[38]。研究表明，過表達(dá)的漿細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)化遷移基 因 1（plasmacytoma variant translocatin 1 gene，PVT1）可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖和遷移，其作用機(jī)制為PVT1結(jié)合并募集果蠅zeste 2多梳抑制復(fù)合物2亞基增強(qiáng)子（enhancer of zeste 2 polycomb repressive repressive complex 2 subunit，EZH2）到miRNA-200b的啟動(dòng)子區(qū)，增加了組蛋白H3K27在miRNA-200b啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平，從而抑制miRNA-200b的表達(dá)[39]。

3 HPV與宿主DNA 甲基化的關(guān)系

HPV和宿主DNA甲基化對(duì)CIN和宮頸癌的發(fā)生具有重要作用，同時(shí)HPV和宿主DNA甲基化可互相調(diào)控，這種調(diào)控作用在宮頸癌的發(fā)生過程中也發(fā)揮重要作用。甲基化基因可成為預(yù)防和治療宮頸癌的有效靶點(diǎn)。HS3ST2和CCNA1基因的高甲基化與HPV16和HPV18感染的宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變和宮頸癌的發(fā)生率呈正相關(guān)（P＜0.05），甲基化陽性的宮頸組織中HS3ST2和CCNA1基因的表達(dá)水平均低于甲基化陰性的宮頸組織，表明HS3ST2和CCNA1基因可能在HPV誘導(dǎo)的宮頸癌中發(fā)揮重要作用，具有特異性高甲基化基因的患者更有可能發(fā)展為侵襲性宮頸癌[40]。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，HPV16感染的宮頸鱗狀細(xì)胞癌中表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal grow th factor receptor，EGFR）啟動(dòng)子發(fā)生高甲基化，感染HPV16的宮頸鱗狀細(xì)胞癌中EGFR啟動(dòng)子的甲基化率明顯高于感染其他HPV基因型的宮頸鱗狀細(xì)胞癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）[41]。研究表明，宮頸癌中CpG島高甲基化可抑制脆性組氨酸三聯(lián)體（fragile histidine triad，F(xiàn)HIT）的表達(dá)，F(xiàn)HIT基因甲基化與HPV16感染具有相關(guān)性，提示FHIT可能是宮頸癌預(yù)防和治療的有效靶點(diǎn)[42]。另有研究表明，DLX4和SIM 1基因啟動(dòng)子高甲基化與HPV感染具有相關(guān)性，這些基因可能成為宮頸癌HPV感染的重要標(biāo)志物[43]。PRDM 14、FAM19A4、EPB41L3基因甲基化作為HRHPV感染的陽性標(biāo)志物，可為HPV感染的宮頸癌的防治提供重要靶標(biāo)，其中FAM19A4、EPB41L3能夠較為準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)宮頸癌和CINⅡ～Ⅲ級(jí)病變[44-46]。

基因甲基化可影響HPV感染，HPV感染也能夠引起基因的異常甲基化。人類端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）啟動(dòng)子和近端外顯子序列的甲基化程度與HPV感染的宮頸癌中hTERT的異常表達(dá)有關(guān)，這些區(qū)域的DNA甲基化檢測(cè)可能為宮頸癌的早期診斷提供依據(jù)[47]。Steenbergen等[48]在人原代角質(zhì)形成細(xì)胞中模擬HPV誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化的不同階段，通過甲基化特異性數(shù)字染色體組型（methylation specific digital karyotyping，MSDK）分析發(fā)現(xiàn)了新的DNA甲基化，包括FAM 19A4、LHX1、NKX2-8、PHACTR3和PRDM 14基因，這些基因可能作為分子標(biāo)志物評(píng)估HR-HPV陽性感染患者是否存在宮頸病變。HPV癌蛋白在腫瘤細(xì)胞中可以誘導(dǎo)特異的啟動(dòng)子發(fā)生甲基化，例如HPV E7蛋白可驅(qū)使CCNA1基因發(fā)生甲基化。CCNA1基因是一種抑癌基因，參與細(xì)胞周期調(diào)控，是細(xì)胞順利通過S期和G2/M期所必須的調(diào)節(jié)因子。研究表明，在HPV感染的上皮細(xì)胞中可發(fā)現(xiàn)CCNA1啟動(dòng)子高甲基化，當(dāng)HPV整合到宿主基因組中，CCNA1啟動(dòng)子甲基化程度進(jìn)一步加深，HPV E7蛋白通過其鋅指結(jié)構(gòu)域CR3與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）結(jié)合，從而在CCNA1啟動(dòng)子區(qū)域形成蛋白復(fù)合物，誘導(dǎo)CCNA1啟動(dòng)子區(qū)域發(fā)生高甲基化，造成CCNA1表達(dá)下調(diào)，CCNA1的異常表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖和腫瘤形成[49]。在HPV16陽性的人宮頸癌SiHa和CaSki細(xì)胞中，敲低E6的表達(dá)后，p53基因表達(dá)水平升高，抑制了DNMT1蛋白表達(dá)和啟動(dòng)子活性；而敲低p53的表達(dá)后可促進(jìn)DNMT1蛋白表達(dá)和啟動(dòng)子活性；E6敲低后導(dǎo)致SiHa細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，而DNMT1過表達(dá)可部分逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象，提示HPV16E6通過抑制p53的表達(dá)促進(jìn)DNMT1蛋白表達(dá)并增加啟動(dòng)子活性[50]。

4 HPV和宿主DNA甲基化與HPV免疫逃逸的關(guān)系

某些腫瘤病毒可通過調(diào)控宿主DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的活性影響宿主細(xì)胞中免疫相關(guān)基因的表達(dá)，或者通過誘導(dǎo)基因啟動(dòng)子甲基化修飾抑制免疫相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致這些基因的免疫功能受到抑制，從而破壞宿主免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的攻擊，實(shí)現(xiàn)病毒在宿主內(nèi)的免疫逃逸，當(dāng)病毒發(fā)生免疫逃逸后會(huì)進(jìn)行持續(xù)感染，病毒引起的免疫系統(tǒng)的損傷導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃逸抗腫瘤免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[51]。干擾素-κ（interferon-kappa，IFN-κ）介導(dǎo)的HPV DNA甲基化修飾對(duì)免疫基因的表達(dá)具有調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)HPV16E6而非E7誘導(dǎo)IFN-κ啟動(dòng)子甲基化，從而導(dǎo)致IFN-κ的表達(dá)水平降低[52-53]。在HPV16陽性的CIN和宮頸癌中IFN-κ幾乎不表達(dá)，在HPV16陰性的正常宮頸組織中IFN-κ呈高表達(dá)，表明HPV16干擾了IFN-κ的表達(dá)，促進(jìn)了HPV在宿主細(xì)胞中的持續(xù)感染[52]。CXC趨化因子配體14（C-X-C motif chemokine ligand 14，CXCL14）可以抑制血管生成，直接募集免疫細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和T細(xì)胞等，在多種腫瘤中具有抗腫瘤活性[54-57]。研究報(bào)道，HPV16E7通過誘導(dǎo)CXCL14啟動(dòng)子甲基化顯著下調(diào)其表達(dá)，從而達(dá)到逃逸宿主免疫監(jiān)視的作用，CXCL14表達(dá)水平升高后能夠增加自然殺傷細(xì)胞、CD4+T和CD8+T細(xì)胞對(duì)腫瘤引流淋巴結(jié)的浸潤(rùn)能力，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的趨化性[55-56]。還有研究發(fā)現(xiàn)，HR-HPVE7通過誘導(dǎo)人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）-E啟動(dòng)子甲基化下調(diào)其表達(dá)，HLA-E是HLA中非經(jīng)典的HLA-Ⅰ類分子，HLA-E呈遞的病毒抗原可促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的殺傷活性[57]。研究表明，HR-HPVE7可誘導(dǎo)HLA-E啟動(dòng)子甲基化導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)，抑制其將病毒抗原呈遞給CD8+T細(xì)胞，從而使病毒逃逸宿主的免疫監(jiān)視，得以持續(xù)感染，繼而導(dǎo)致HPV感染相關(guān)腫瘤的發(fā)生[58]。

5 HPV和宿主DNA 甲基化在宮頸癌防治中的應(yīng)用

目前HPV檢測(cè)是篩查宮頸癌和CIN的重要手段。研究表明，基因的甲基化狀態(tài)檢測(cè)可為診斷CINⅡ級(jí)及以上的宮頸病變提供證據(jù)[59-60]。在CINⅡ級(jí)及以上宮頸病變的診斷中，PCDHA4和PCDHA13甲基化檢測(cè)與HPV基因檢測(cè)具有相似的靈敏度，但前者的特異度更高[59]。PAX1基因甲基化對(duì)亞洲人群宮頸癌具有潛在的診斷價(jià)值，在宮頸刮片中對(duì)PAX1甲基化和HPV基因進(jìn)行平行檢測(cè)較單獨(dú)HPV基因檢測(cè)的準(zhǔn)確度更高[61]。焦磷酸測(cè)序結(jié)果證實(shí)，DAPK1、RARB、WIF1和SLIT2基因是宮頸癌患者中甲基化異常的常見靶點(diǎn)，相較于單獨(dú)應(yīng)用HPV篩查宮頸癌，HPV聯(lián)合上述4種基因甲基化水平的檢測(cè)能有效提高篩查宮頸癌的特異度，同時(shí)甲基化改變可能發(fā)生在宮頸癌早期，可為宮頸癌的早期篩查提供重要證據(jù)[62]。研究顯示HPV16L1/L2區(qū)域中DNA甲基化程度與宮頸病變的分級(jí)有關(guān)，HPVE2區(qū)域和L1/L2區(qū)域中DNA甲基化程度在核分裂患者中顯著增加，對(duì)L1/L2區(qū)域CpG的第5600和5609位核苷酸進(jìn)行甲基化評(píng)估，可獲得正常樣品和異常核分裂樣品的最佳分離[63]。上述基因的甲基化有望成為宮頸癌篩查的輔助生物標(biāo)志物。

研究表明，順鉑和5-氮雜胞苷可通過對(duì)腫瘤相關(guān)基因ESR1、BRCA1、RASSF1A、MLH1和MYOD1啟動(dòng)子去甲基化而引發(fā)細(xì)胞毒性、抑制細(xì)胞生長(zhǎng)[64]。在宮頸癌患者中，TNFRSF10C和TNFRSF10D啟動(dòng)子高甲基化，在癌前病變中也可檢測(cè)到TNFRSF10C甲基化，提示這種變化是宮頸癌發(fā)生的早期事件。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）及其受體誘導(dǎo)的凋亡作用與宮頸癌細(xì)胞系中TNFRSF10C和（或）TNFRSF10D的下調(diào)有關(guān)，TNFRSF10C和（或）TNFRSF10D的下調(diào)可與化療藥物協(xié)同發(fā)揮作用，提示這些基因失活在體外凋亡通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用[65]。上述研究表明甲基化調(diào)控為研究新的治療靶點(diǎn)提供了新思路。

6 小結(jié)與展望

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，HRHPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素。雖然近年來宮頸細(xì)胞學(xué)篩查和HPV疫苗的應(yīng)用使宮頸癌和癌前病變得以早期被發(fā)現(xiàn)和治療，但目前仍缺乏有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)且其分子機(jī)制尚未完全清楚。HPV基因組甲基化和HPV對(duì)宿主DNA甲基化的調(diào)節(jié)作用可為HPV致癌機(jī)制和免疫逃逸機(jī)制提供更深入的理論依據(jù)。甲基化修飾基因不僅可作為宮頸癌早期診斷、疾病進(jìn)展和預(yù)后的潛在標(biāo)志物，還可以通過調(diào)控甲基化狀態(tài)制訂有效的治療策略，對(duì)治療宮頸癌具有深遠(yuǎn)的指導(dǎo)意義。