FH/Wjd大鼠和SD大鼠攝酒行為的比較觀察

趙福坤，吳 芹，李 勃，張明輝，陳 晶，徐云燕，石京山

(遵義醫(yī)科大學基礎藥理教育部重點實驗室暨特色民族藥教育部國際合作聯(lián)合實驗室，貴州 遵義 563006)

酒精系精神活性物質(zhì)，可以影響人類情緒、思維、行為及意識狀態(tài)。長期嗜酒者可出現(xiàn)酒精依賴綜合征，即耐受性、沖動性覓酒行為和戒斷癥狀[1]。在中國傳統(tǒng)酒文化的影響下，酒在人類社交活動中被廣泛使用，使得我國不論是酒的產(chǎn)量或消耗量，近年來都不斷增加，酒產(chǎn)業(yè)作為一些國家的支柱產(chǎn)業(yè)，產(chǎn)生了很大效益[2-3]。然而，由于酒產(chǎn)量或消耗量的增加，酒相關的問題也相應呈上升趨勢，并對人體健康產(chǎn)生重要影響[4-7]，其中以酒精成癮的精神依賴和人體肝臟受損最為嚴重[8-11]。據(jù)2018年世界衛(wèi)生組織調(diào)查結(jié)果顯示，2016年全世界因過度飲用酒精飲品造成了300萬例死亡。酒精消費不僅能夠?qū)е乱蕾?，還可增加人們罹患200多種疾病的危險，包括肝硬化和某些癌癥[12]。

由于國內(nèi)缺乏自身飲酒的動物模型，在過去的40年里，酒精給人類帶來的疾病的治療方法依舊沒有明顯的進展[13]。因此，在維持我國酒產(chǎn)量不減和保持中國傳統(tǒng)酒文化不變的情況下，尋找一種與人類飲酒行為相似的動物模型，以研究恰當?shù)娘嬀品绞剑蛘咦非笠环N對身體健康損害較小的酒具有重要意義。FH/Wjd大鼠是遠交系Wistar大鼠近親繁殖了19代得到的品系[14]，這個品系的大鼠具有遺傳性5羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)功能低下和大量自主飲酒的特點[1,15]。本實驗室于2014年從北京大學藥物研究所梁建輝教授實驗室引進該先天性嗜酒大鼠，并成功繁殖。本研究通過觀察FH/Wjd大鼠和SD大鼠對不同酒的偏好、飲酒行為的晝夜差異性以及剝奪效應，為其在國內(nèi)乙醇研究領域的應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試劑與儀器A酒(醬香型，53度)產(chǎn)自貴州仁懷某酒廠；B酒(濃香型，52度)產(chǎn)自四川宜賓某酒廠；分析純無水乙醇，購自成都市科龍化工試劑廠，批號：0071218，使用時用自來水配制成所需濃度。酒、乙醇、水分別裝于定制的50 mL和200 mL大鼠飼養(yǎng)水瓶(蘇州君圣實驗動物設備有限公司)，不銹鋼吸管內(nèi)徑分別為1.0 mm(酒、乙醇)和2.0 mm(水)。

1.2實驗動物及分組FH/Wjd大鼠和SD大鼠各30只，體質(zhì)量150～250 g，SPF級，♀♂不拘。FH/Wjd大鼠2014年由北京大學藥物依賴研究所梁建輝教授饋贈，并引進繁殖；SD大鼠由重慶第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(渝)2012-0005。隨機分為3組：A酒組(Liquor A)、B酒組(Liquor B)、53%乙醇組(Alcohol)，每組10只。單籠飼養(yǎng)，自由飲食，光照每天12 h，明暗交替(光照時間8 ∶00～20 ∶00)，相對濕度為60%～65%，溫度(21～23) ℃。

1.3雙瓶自由選擇飲酒實驗[16]各組大鼠采用雙瓶(A酒、B酒、53%乙醇和雙蒸水)自由選擇的方法喂養(yǎng)4個月，每日于20 ∶00定時稱水瓶和酒瓶的重量，并于稱量水瓶和酒瓶后，交換水瓶和酒瓶位置，防止形成位置偏愛，連續(xù)觀察2個月。計算每天FH/Wjd大鼠和SD大鼠的飲酒量、飲水量以及對各酒的偏愛率。并于d 8的8 ∶00和20 ∶00定時稱水瓶和酒瓶的重量，分別計算白天和夜間各大鼠的飲酒量、飲水量以及對各酒的偏愛率，比較大鼠對不同酒的飲酒量、飲水量及偏愛率在白天和夜間的差異性。偏愛率/%=mE/(mE+mw)×100%；其中mE為飲酒量，mw為飲水量。

1.4乙醇剝奪實驗[16]各組大鼠采用雙瓶(A酒、B酒、53%乙醇和雙蒸水)自由選擇的方法喂養(yǎng)4個月，每日于20 ∶00定時稱水瓶和酒瓶的重量，并于稱量水瓶和酒瓶后，交換水瓶和酒瓶位置，防止形成位置偏愛。待FH/Wjd大鼠和SD大鼠的飲酒行為穩(wěn)定后，取出酒瓶24 h，保留水瓶，待24 h后放上酒瓶，再次給予雙瓶自由選擇。并于放上酒瓶24 h后，稱量各酒瓶和水瓶的重量。觀察再次給酒24 h后與剝奪前24 h FH/Wjd大鼠和SD大鼠的飲酒量、飲水量及偏愛率的變化。

2 結(jié)果

2.1FH/Wjd大鼠對不同酒的飲酒量、飲水量及偏愛率當酒水和飲水開始同時出現(xiàn)時，F(xiàn)H/Wjd大鼠立即主動攝取酒水。通過統(tǒng)計4個月FH/Wjd大鼠對不同酒的飲酒量、飲水量以及偏愛率發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)H/Wjd大鼠對A酒的攝入量明顯高于53%乙醇(P<0.01)，對A酒的偏愛率明顯高于B酒和53%乙醇(P<0.05)，各酒中FH/Wjd大鼠更偏愛A酒，見Tab 1。

Tab 1 The average ethanol and water intake and ethanol preference in FH/Wjd rats for each liquor in four months

#P<0.05,##P<0.01vsalcohol;*P<0.05vsliquor B

通過對第1個月和第2個月FH/Wjd大鼠對不同酒的飲酒量、飲水量以及偏愛率的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)(Fig 1)，F(xiàn)H/Wjd大鼠對不同酒的飲酒量和偏愛率隨著飲酒時間延長而增加，且第2個月對A酒的飲用量明顯高于第1個月(P<0.05)，偏愛率也高于第1個月，但差異無統(tǒng)計學意義，飲水量變化不明顯。第1個月對A酒的飲用量明顯高于53%乙醇(P<0.05)，第2個月對A酒的飲用量及偏愛率明顯高于B酒和53%乙醇(P<0.05)。

2.2SD大鼠不同酒的飲酒量、飲水量及偏愛率當酒水和飲水開始同時出現(xiàn)時，SD大鼠并未主動攝取酒水，但當撤出飲水而只留酒水時，SD大鼠被迫開始攝取酒水，24 h后，當酒水和飲水同時存在時，SD大鼠開始主動攝取酒水。通過統(tǒng)計4個月SD大鼠對不同酒的飲酒量、飲水量以及偏愛率發(fā)現(xiàn)，SD大鼠對A酒和B酒的攝入量明顯高于53%乙醇(P<0.01)，對B酒的偏愛率明顯高于A酒和53%乙醇(P<0.01)，對A酒的偏愛率明顯高于53%乙醇(P<0.05)，各酒中SD大鼠更偏愛B酒，見Tab 2。

Tab 2 The average ethanol and water intake and ethanol preference in SD rats for each liquor in four months n=10)

#P<0.05,##P<0.01vsalcohol;**P<0.01vsliquor A

Fig 1 Difference of each liquor in ethanol and water intake and ethanol preference of FH/Wjd rats n=10)

*P<0.05vsfirst month;#P<0.05,##P<0.01vsalcohol;△P<0.05vsliquor A

Fig 2 Difference of each liquor in ethanol and water intake and ethanol preference of SD rats n=10)

*P<0.05,**P<0.01vsfirst month;##P<0.01vsalcohol;▲P<0.05,▲▲P<0.01vsliquor B

通過對第1個月和第2個月SD大鼠對不同酒的飲酒量、飲水量以及偏愛率的統(tǒng)計還發(fā)現(xiàn)(Fig 2)，SD大鼠對不同酒的飲酒量和偏愛率也隨著飲酒時間延長而增加，且第2個月對A酒和53%乙醇的飲用量明顯高于第1個月(P<0.01)，對各酒的偏愛率明顯高于第1個月(P<0.01)，飲水量變化不大。第1個月對A酒和B酒的飲用量及偏愛率明顯高于53%乙醇(P<0.01)，第2個月對B酒的飲用量明顯高于53%乙醇(P<0.01)，對B酒的偏愛率明顯高于A酒和53%乙醇(P<0.01)。

2.3FH/Wjd大鼠和SD大鼠對不同酒飲酒行為的晝夜差異Fig 3、4結(jié)果顯示，給予A酒、B酒和53%乙醇后，F(xiàn)H/Wjd大鼠和SD大鼠夜間飲酒量和飲水量均明顯高于白天飲酒量(P<0.01)。FH/Wjd大鼠和SD大鼠對不同酒的飲酒行為均存在明顯的晝夜差異，飲酒行為主要發(fā)生在夜間(活動期間)。SD大鼠白天對B酒和53%乙醇的飲酒量明顯高于A酒(P<0.01)。

Fig 3 Difference in drinking behavior of FH/Wjd rats between day and night n=10)

**P<0.01vsday

Fig 4 Difference in drinking behavior of SD rats between

**P<0.01vsday;△△P<0.01vsliquor A

2.4不同酒剝奪24h對FH/Wjd大鼠飲酒行為的影響Fig 5結(jié)果顯示，F(xiàn)H/Wjd大鼠各酒剝奪24 h后，再次給A酒，F(xiàn)H/Wjd大鼠再次給A酒后24 h的飲酒量和偏愛率均比剝奪前一天24 h的飲酒量和偏愛率高，而飲水量則降低，但差異無顯著性。再次給B酒和53%乙醇后24 h的偏愛率比剝奪前一天24 h的偏愛率明顯增加(P<0.05)，飲酒量也增加，但差異無統(tǒng)計學意義，而飲用53%乙醇的飲水量明顯降低(P<0.05)。FH/Wjd大鼠對不同酒的飲酒行為存在剝奪效應。

2.5不同酒剝奪24h對SD大鼠飲酒行為的影響Fig 6結(jié)果顯示，SD大鼠各酒剝奪24 h后，再次給予相應酒后24 h的飲酒量和偏愛率均比剝奪前一天24 h的飲酒量和偏愛率升高，但差異無統(tǒng)計學意義，而飲水量則降低，其中飲用B酒的飲水量明顯降低(P<0.05)。SD大鼠對不同酒的飲酒行為也存在剝奪效應。

3 討論

本研究結(jié)果表明，F(xiàn)H/Wjd大鼠對酒類飲品具有天然的嗜好，在實驗開始酒水和飲水同時存在時，便主動攝取酒水，的確可以稱之為“酒鬼鼠”。然而，SD大鼠則不同，當酒水和飲水開始同時出現(xiàn)時，并未主動攝取酒水，但當撤出飲水而只留酒水時，SD大鼠被迫開始攝取酒水，24 h后，當酒水和飲水同時存在時，產(chǎn)生主動攝取酒水的行為。表明不同動物品系對酒類的攝取行為和人類有相似之處，有的天生能(好)喝酒，而有的則不喜歡喝酒。人類不同個體的飲酒量和對品牌的偏好也有差異，本實驗觀察到，F(xiàn)H/Wjd大鼠對A酒的飲用量及偏愛率最高，其次是B酒，最后是53%乙醇。而SD大鼠則對B酒的飲用量及偏愛率最高，其次是A酒，最后是53%乙醇。該現(xiàn)象提示，不同大鼠品系可能偏好不同品牌的酒。偏愛率實則是反映了飲酒的不良反應表現(xiàn)，在人們的飲酒過程中會產(chǎn)生嚴重的口渴，因此會大量喝水，表現(xiàn)為偏愛率低。本實驗也發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)H/Wjd大鼠和SD大鼠也有這種現(xiàn)象。另外，通過對各組大鼠第1個月和第2個月對不同酒的飲酒量、飲水量以及偏愛率的觀察發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)H/Wjd大鼠和SD大鼠對不同酒的飲用量及偏愛率均隨飲酒時間延長而增加，飲水量變化不大。到后期，甚至有個別大鼠的飲酒量大于飲水量，偏愛率大于50%。其中FH/Wjd大鼠第2個月對A酒的飲用量明顯高于第1個月，SD大鼠第2個月對A酒和53%乙醇的飲用量和偏愛率明顯高于第1個月。該現(xiàn)象說明FH/Wjd大鼠長期自發(fā)飲酒已對酒精產(chǎn)生耐受和依賴，與文獻報道一致[17]。而SD大鼠通過短期強制飲酒訓練后，與FH/Wjd大鼠一樣具有飲酒量大的特點，且長期自發(fā)飲酒也會對酒精產(chǎn)生耐受和依賴。FH/Wjd大鼠和SD大鼠這種飲酒行為與人類的飲酒行為相似。

Fig 5 Effect of liquors deprived on ethanol-drinking behavior of FH/Wjd rats n=10)*P<0.05 vs pre-deprivation; △P<0.05 vs liquor A

Fig 6 Effect of liquors deprived on drinking behavior of SD rats n=10)

*P<0.05vspre-deprivation;#P<0.05vsalcohol

觀察還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)H/Wjd大鼠的飲酒行為主要出現(xiàn)在夜間，各酒夜間的飲酒量為白天的2.7～3.6倍，飲水量是白天的5.5～7.1倍。SD大鼠的飲酒行為也主要出現(xiàn)在夜間，各酒夜間的飲酒量為白天的2.8～7.8倍，飲水量是白天的5.0～6.7倍。FH/Wjd大鼠SD大鼠對不同酒的飲酒行為均存在明顯的晝夜差異，與人類飲酒主要發(fā)生在活動期間的行為相似。而這種飲酒行為的晝夜節(jié)律性對于動物給藥時間的選擇具有重要意義，如對于一些半衰期較短的藥物，應選擇在飲酒高峰前(熄燈前)給藥。

剝奪效應是不同酒剝奪一段時間后，自發(fā)對酒的飲用量和偏愛率的暫時性升高。FH/Wjd大鼠各酒剝奪24 h，再次給酒后24 h的飲酒量和偏愛率均較剝奪前24 h升高，與報道一致[16]。與FH/Wjd大鼠相似，SD大鼠各酒剝奪24 h，再次給酒后24 h的飲酒量和偏愛率也均比剝奪前24 h的高，該現(xiàn)象與嗜酒者戒酒復發(fā)后飲酒量的增加相似。因此，SD大鼠也可考慮作為一種嗜酒動物模型，用于戒酒藥物的藥效評價。