血液感染非O1群和非O139群霍亂弧菌1例的報告

單勁紅 張雨超 高 艷 尹美玲 黃 穎

2018年6月27日我院感染科收入1例上消化道出血且有2年肝硬化病史，并發(fā)敗血癥患者，從患者血液中分離出1株霍亂弧菌疑似菌株，通過細菌鑒定，質(zhì)譜分析及血清學鑒定，最后被確定為非O1群和非O139群霍亂弧菌（NOVC)。這在目前國內(nèi)肝硬化患者中較少報道，國外有文獻是從血液中分離出非O1群和非O139群霍亂弧菌[1]。現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 患者，男，55歲，有肝硬化病史2年，長期口服中藥。黑便5天，每日1～2次，無特殊處理，因入院前5 h無明顯誘因發(fā)熱體溫達40℃，伴惡心嘔吐嘔血，門診擬診：上消化道出血肝硬化失代償，收住感染科。①體征：慢肝面容，肝區(qū)壓痛（+），中度黃染，無蜘蛛痣無肝掌無包塊無反跳痛。腹部平軟，肝肋下未及，脾肋下約2 cm，雙肺呼吸清晰無干濕性啰音，無水腫。②入院后實驗室檢查：血常規(guī)：白細胞3.95×109/L，血小板10×109/L，谷丙轉(zhuǎn)氨酶:100 U/L，谷草轉(zhuǎn)氨酶:196 U/L，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶:90 U/L，白球比0.74.總膽紅素108.44 μmol/L，直接膽紅素63.90 μmol/L，二氧化碳17 mmol/L，總鈣1.76 mmol/L，乙肝表面抗原定量38.73 IU/mL，乙肝e抗原定量9.84 PEIU/mL，乙肝核心抗體定量112.16 PEIU/mL，凝血項目PT：25.90 S；APTT：72S；FIB:0.97 g/L；D-二聚體：＞4 μg/mL。

1.2 儀器及試劑 O1群和O139群霍亂弧菌診斷血清由鄭州萬泰生物科技有限公司提供，細菌鑒定由法國生物梅里埃ATB-NEW細菌鑒定儀及梅里埃生產(chǎn)的生化反應板條，質(zhì)譜儀由梅里埃VITEK?MS提供，質(zhì)控菌株大腸埃希菌（ATCC25922);銅綠假單胞菌（ATCC27853）購自杭州天和微生物試劑公司，K-B法藥敏實驗紙片由英國OXID提供。

1.3 方法 ①細菌分離:患者入院時體溫為40℃，取成人血培養(yǎng)瓶靜脈單瓶雙側(cè)各取血5 mL，在患者使用抗生素前，抽取患者雙側(cè)單瓶靜脈血注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)將血培養(yǎng)瓶置于梅里埃BacT/ALert120中培養(yǎng)，3 h后雙瓶報陽，取出培養(yǎng)瓶涂片鏡檢，鏡下見G-桿菌并給臨床醫(yī)生發(fā)布血培養(yǎng)一級報告，并轉(zhuǎn)種血平板，巧克力平板及麥康凱平板，各放入35℃需氧溫箱和CO2培養(yǎng)箱中，16 h后取單個菌落做鑒定試驗。②質(zhì)譜分析：用梅里埃VITEK-MS質(zhì)譜儀檢測該菌株，取單個菌落，用1 μL校準接種環(huán)涂靶板，加基質(zhì)液CHCA1μL干燥形成結晶體，自動獲取質(zhì)譜。③藥物敏感試驗：根據(jù)《臨床微生物實驗室操作規(guī)程》所示K-B紙片法進行藥敏試驗，結果判斷依據(jù)2015年美國臨床實驗室標準化委員會藥敏試驗標準執(zhí)行。

2 結 果

2.1 細菌菌落形態(tài)及不染色標本檢查 血平板菌落較大濕潤，有β溶血環(huán)，且有綠色光澤。轉(zhuǎn)種4號瓊脂平板長出黑色光滑整齊的菌落，染色鏡下見革蘭陰性細小，微彎，直的桿菌，取單個菌落制成懸滴液鏡下見細菌呈穿梭樣運動，符合霍亂弧菌鏡下形態(tài)特點。

2.2 細菌生化和鑒定 取單個菌落配置0.5麥氏濁度的混懸液，使用梅里埃ATB-NEW半自動細菌鑒定分析儀，GN卡鑒定為霍亂弧菌，鑒定編碼為016052鑒定率為97.9% ID值1.0，手工生化實驗該菌株靛基質(zhì)陰性，氧化酶試驗陽性，該菌株不分解乳糖，發(fā)酵葡萄糖蔗糖麥芽糖，動力陽性，在堿性蛋白胨水中生長。符合霍亂弧菌生化特征。梅里埃VITEK-MS質(zhì)譜儀檢測完整蛋白電離并用TOF檢測，與數(shù)據(jù)庫比較計算結果并獲得鑒定結果在Myla顯示鑒定結果：Vibrio cholerae 置信度99.9，該菌株質(zhì)譜峰結果見圖1。

圖1 該菌株的質(zhì)譜峰

2.3 血清凝集試驗 取該菌株單個菌落，與O1群及O139群霍亂弧菌標準血清做玻片凝集試驗，用生理鹽水做陰性對照，結果均不凝集，確證為非O1群和非O139群霍亂弧菌。

2.4 藥敏結果分析 該菌株對臨床常用抗生素均敏感，見表1。

表1 菌株對臨床常用抗生素的藥敏結果

2.5 治療 根據(jù)該患者血培養(yǎng)的藥敏報告，臨床醫(yī)生及時調(diào)整抗菌藥物，使用頭孢他啶和左氧氟沙星抗感染治療，患者退熱2 d后再做血培養(yǎng)，7 d血培養(yǎng)陰性并報告臨床醫(yī)生。該患者是以高熱及上消化道出血和肝硬化失代償入院，沒有取糞便培養(yǎng)，血培養(yǎng)檢出非O1群和非O139群霍亂弧菌后，因臨床醫(yī)生用藥及時，后來的糞便培養(yǎng)一直陰性，應是抗感染治療有效的原因。

3 討 論

霍亂弧菌是人類在自然情況下唯一易感者，主要通過污染的水源或食物經(jīng)口感染，也可以通過腸道外感染如傷口和血流感染，霍亂弧菌包括O1群霍亂弧菌和O139群霍亂弧菌，引起強烈腸道傳染病霍亂，為我國的甲類法定傳染病，不與O1群和O139群霍亂弧菌診斷學清凝集的但生化反應符合霍亂弧菌特性的稱為非O1群和非O139群霍亂弧菌（NOVC），據(jù)國內(nèi)外有關文獻顯示NOVC多引起的敗血癥而非腸道感染，病死率為20%～62%，多見于肝癌,肝硬化患者及其他多種疾病引起的機體免疫力低下者[2～5]，易伴發(fā)各種機會性感染。非O1群和非O139群霍亂弧菌多存在于海鮮及海水中，接觸或未經(jīng)煮熟的海產(chǎn)品容易導致感染，但多數(shù)感染者輕度癥狀也有部分患者引起敗血癥,膽囊炎等，這與宿主抵抗力有密切關系。

本次我院檢出的非O1群和非O139群霍亂弧菌菌株引起的菌血癥也應與此有關。該患者患有肝硬化病史2年，且上消化道出血。肝硬化患者肝臟的過濾功能減退腸道菌群失調(diào)導致細菌容易進入血流引起感染。非O1群和非O139群霍亂弧菌引起的敗血癥多發(fā)生于免疫力低下的患者中（尤其是肝病患者），病死率較高。因此病原菌的及時檢出和給予患者精準的治療顯得極為重要，我們在此將本案做詳細報道，希望引起同道們的關注。