• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    廣東省肇慶市肺炎克雷伯菌臨床分離株的耐藥性與MLST分型研究

    2019-03-13 07:07:52蘇樂斌李柏生譚海芳朱穎梅林鳳黎碧堅(jiān)
    中國抗生素雜志 2019年2期
    關(guān)鍵詞:菌素克雷伯檢出率

    蘇樂斌 李柏生 譚海芳 朱穎梅 林鳳 黎碧堅(jiān)

    (1 肇慶市疾病預(yù)防控制中心,肇慶 526060;2 廣東省疾病預(yù)防控制中心,廣州 511400)

    肺炎克雷伯菌(K. pneumoniae, KP)屬于腸桿菌科克雷伯菌屬,革蘭陰性菌,是臨床上最常見的條件致病菌之一,可引起肺炎、尿路感染、血流感染等一系列感染性疾病。近20年來發(fā)現(xiàn),肺炎克雷伯菌對(duì)抗生素的耐藥性日趨嚴(yán)重,產(chǎn)超廣譜 β-內(nèi)酰胺酶(ESBLsKP)及耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌(CRKP)的陸續(xù)出現(xiàn),使得肺炎克雷伯菌成為院內(nèi)感染的主要致病菌[1]。同時(shí),由高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)引起的社區(qū)性獲得性肺炎克雷伯菌感染也層出不窮[2-3],。近年來,甚至發(fā)現(xiàn)一些產(chǎn)ESBLs的hvKP和其他類型的多重耐藥hvKP患者[4-5]。高毒力同時(shí)攜帶多重耐藥性的肺炎克雷伯菌將給公共衛(wèi)生的防控和臨床患者的治療帶來極大的挑戰(zhàn)。本次研究通過對(duì)廣東省肇慶市2家醫(yī)院收集的63株肺炎克雷伯菌臨床分離株開展體外抗生素敏感性試驗(yàn)與MLST,及時(shí)掌握本地區(qū)肺炎克雷伯菌的耐藥譜和菌群群落分布特征,有助于本地區(qū)醫(yī)院加強(qiáng)和改進(jìn)院內(nèi)感染監(jiān)測(cè)和控制措施,合理使用抗生素,同時(shí)也為公共衛(wèi)生的防控提供技術(shù)依據(jù)。

    1 材料

    1.1 菌株來源

    收集2017年11月—2018年4月廣東省肇慶市2家醫(yī)院所有從住院患者分離到的肺炎克雷伯菌,共63株,所分離菌株均來源于痰、血、中段尿等患者標(biāo)本。經(jīng)VITEK2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀對(duì)分離菌株進(jìn)行鑒定,其中分析儀器由法國Bio-Mérieux公司生產(chǎn)。質(zhì)控菌株分別為:大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603。

    1.2 主要儀器與試劑

    VITEK2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析(法國Bio-Mérieux公司),PCR儀(德國Senso Quest Labcycler公司),革蘭陰性菌藥敏檢測(cè)板(上海星百醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),貨號(hào)為A-3009XS、A-4009XS),PrimeSTAR?Max DNA Polymerase試劑(大連寶生物科技公司,貨號(hào)為R045A),血瓊脂平板(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司,貨號(hào)為024070),質(zhì)控菌株分別為:大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603。

    1.3 MLST管家基因引物

    7個(gè)管家基因(rpoB、gapA、mdh、pgi、phoE、infB、tonB)引物序列參照MLST數(shù)據(jù)庫(http://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html)。引物序列由上海生物工程有限公司合成。

    2 方法

    2.1 黏液拉絲試驗(yàn)

    用接種環(huán)輕觸血瓊脂平板上過夜培養(yǎng)的新鮮菌落向外牽拉,重復(fù)牽拉兩次。若兩次均有黏液絲形成并且長度大于5mm,為黏液拉絲試驗(yàn)陽性菌株,即為hvKP。

    2.2 藥物敏感性試驗(yàn)

    藥敏試驗(yàn)使用商品化革蘭陰性菌藥敏檢測(cè)板,嚴(yán)格按廠家說明書進(jìn)行操作,并使用上海星百醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司的配套軟件判讀最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration, MIC)。

    2.3 多位點(diǎn)序列分型(MLST)

    采用水煮法粗提DNA,PCR反應(yīng)體系為12.5μL PremixTaq,引物各1μL,模板1μL,無菌水10.5μL,總體積為25μL。PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性5min,一個(gè)循環(huán);94℃變性30s,相應(yīng)溫度(7個(gè)位點(diǎn)的退火溫度除了gapA為60℃、tonB為45℃外,其余5個(gè)位點(diǎn)均為50℃)退火45s,72℃延伸45s,共35個(gè)循環(huán);72℃延伸5min,一個(gè)循環(huán)[10]。取5μL PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳,PCR產(chǎn)物陽性的,送測(cè)序公司測(cè)序后,將序列提交到MLST官網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(http://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html)進(jìn)行比對(duì),確定每株菌株的序列型(ST)。

    2.4 測(cè)序數(shù)據(jù)分析與建樹

    通過在MLST官網(wǎng)數(shù)據(jù)庫比較后,確定每株菌株的ST型,運(yùn)用Bio Numerics 7.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,生產(chǎn)最小生成樹(MST)和耐藥譜圖。最小生成樹(MST)圖中每個(gè)圓的大小代表相同ST型的數(shù)量,黑實(shí)線代表2個(gè)ST型間管家基因有3個(gè)或3個(gè)以下的差異,黑實(shí)線越粗,2個(gè)ST型間的管家基因差異越小。虛線代表示有2個(gè)ST型間管家基因有4個(gè)或4個(gè)以上的差異,虛線點(diǎn)越密,2個(gè)ST型間的管家基因差異越大。在種群內(nèi)部可通過比較的等位基因圖譜之間的聯(lián)系,即緊密的相關(guān)的菌株, 其等位基因圖譜是相同或相近的,可被鑒定為一個(gè)序列組(STs),無相關(guān)性的菌株的圖譜是沒有關(guān)聯(lián)的[6]。耐藥譜圖中黑色方格代表對(duì)該種抗生素耐藥,灰色方格代表對(duì)該種抗生素中度敏感,白色方格代表對(duì)該種抗生素敏感。

    3 結(jié)果

    3.1 菌株情況

    本次研究收集的63株KP全部來源于患者,年齡以50歲以上的患者占了69.84%(44/63),檢出菌株的科室以重癥監(jiān)護(hù)室(各類ICU)為主,占55.30%(35/63)。臨床標(biāo)本類型最多為痰占54.00%(34/63),其次為血占22.20%(14/63),中段尿占14.30%(9/63),傷口分泌物占4.70%(3/63),穿刺液占3.20%(2/63),腹水占1.60%(1/63)。通過黏液拉絲試驗(yàn)分類,拉絲實(shí)驗(yàn)陽性菌株(hvKP)20株,分別來源重癥監(jiān)護(hù)室(各類ICU)8株占40.00%(8/20)、泌尿外科2株占10.00%(2/20)、消化內(nèi)科2株占10.00%(2/20)、心內(nèi)科2株占10.00%(2/20)、婦科2株占10.00%(2/20)、呼吸內(nèi)科1株占5.00%(1/20)、腦病科1株占5.00%(1/20)、普外科1株占5.00%(1/20)、燒傷外科1株占5.00%(1/20)。

    3.2 菌株藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

    63株肺KP菌株耐藥譜見圖1。由于KP對(duì)氨芐西林天然耐藥,20株hvKP對(duì)29種抗生素類藥物絕大部分是敏感的,檢出率為31.74%(20/63),其中耐藥譜為全敏感的有18株hvKP,1株hvKP(KP49)對(duì)四環(huán)素耐藥,1株hvKP(KP25)對(duì)四環(huán)素、氯霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑耐藥為多重耐藥菌,該株菌株分離自PICU患者;23株KP為ESBLsKP,檢出率為36.51%(23/63),且23株ESBLsKP中大部分分離自重癥監(jiān)護(hù)室(各類ICU)的患者,檢出率為47.83%(11/23),其中有4株(KP09、KP10、KP22、KP13)對(duì)多黏菌素E耐藥,對(duì)多黏菌素B中度敏感,且KP09、KP10、KP22均分離自同一醫(yī)院,而KP13則分離自另一醫(yī)院;8株KP為CRKP,耐藥譜主要表現(xiàn)為對(duì)亞胺培南和美羅培南耐藥,檢出率為12.70%(8/63),且8株CRKP中有7株分離重癥監(jiān)護(hù)室(各類ICU)的患者,檢出率為87.50%(7/8);剩余12株KP為多重耐藥菌MDRKP,耐藥譜表現(xiàn)為對(duì)3種或3種以上抗生素耐藥,檢出率為19.05%(12/63),重癥監(jiān)護(hù)室(各類ICU)檢出率為75.00%(9/12)。

    3.3 多位點(diǎn)序列分型(MLST)結(jié)果

    63株肺炎克雷伯菌MLST分型共發(fā)現(xiàn)41個(gè)ST型,其中ST37型有9株,ST11型5株,ST65型5株,ST23型3株,ST661型2株,ST1087型2株,ST1530型2株,ST2890型2株,其余ST型各1株。Bio Numerics軟件用于分析最小生成樹(MST)結(jié)果(圖2), STs分布比較分散,普遍存在3個(gè)或3個(gè)以上的管家基因差異,而其中較大的STs有4個(gè),分別是STs1(由ST37單獨(dú)組成)含9株產(chǎn)ESBLsKP,STs2(ST65、ST25、ST1135組成)含6株hvKP和1株MDRKP,STs3(由ST11和ST690組成)含6株CRKP,STs4(由ST23和ST218組成)含4株hvKP。菌株耐藥譜結(jié)合MLST發(fā)現(xiàn),根據(jù)耐藥譜分類的4類KP都有主要的分子流行特性(圖3):hvPK以ST23和ST65為主要流行型;ESBLsKP以ST37為主要流行型;CRKP以ST11為主要流行型;其他MDRKP的ST型呈多型別分散狀流行。

    4 討論

    肺炎克雷伯菌是臨床上常見的條件致病菌,在機(jī)體免疫力低下或長期大量使用抗生素導(dǎo)致菌群失調(diào)時(shí),容易引起機(jī)會(huì)性感染。重癥監(jiān)護(hù)室、新生兒病房和老年病房是感染KP的高發(fā)區(qū)。hvKP除了引起肝膿腫,極易播散引起其他重要部位的轉(zhuǎn)移性感染且預(yù)后較差[7],而多重耐藥KP引起院內(nèi)感染暴發(fā)流行后果更嚴(yán)重,死亡率高達(dá)40%[1]。本次研究對(duì)廣東省肇慶市兩家醫(yī)院的63株KP臨床分離株進(jìn)行了抗生素敏感性試驗(yàn)和MLST分型,分離株主要來源于ICU病房,以痰和血標(biāo)本為主,感染人群集中在50以上的中老年人,這與其他地區(qū)KP醫(yī)院感染特點(diǎn)類似[1]。

    藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示(圖1),63株肺炎克雷伯菌臨床分離株中除了19株hvPK對(duì)常用抗生素仍是敏感外,其余44株分離株對(duì)大部分抗生素耐藥比較嚴(yán)重,都是表現(xiàn)為ESBLsKP或CRKP或其他類型MDRKP,這提示本地區(qū)主要醫(yī)療機(jī)構(gòu)中流行的都是具有強(qiáng)耐藥能力的肺炎克雷伯菌,需要加強(qiáng)醫(yī)院肺炎克雷伯菌院內(nèi)感染的監(jiān)測(cè)和防控。耐藥譜結(jié)合MLST分析發(fā)現(xiàn)(圖1),9株ST37型的ESBLsKP其耐藥譜存在差別,值得注意的是紅色方框內(nèi)的3株菌株(KP09、KP10和KP22)對(duì)多黏菌素E耐藥和多黏菌素B中度敏感,而紅色圓框內(nèi)的6株菌株(KP20、KP27、KP29、KP43、KP51、KP62)對(duì)多黏菌素E和多黏菌素B均敏感,KP09與KP43更是分離自同一醫(yī)院的同一個(gè)科室,多黏菌素作為目前臨床治療革蘭陰性菌感染的最后一道屏障,在多重耐藥革蘭陰性菌感染的治療中耐藥率低、治療效果好,特別是對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌效果顯著[8],而本研究這一發(fā)現(xiàn),提示我市大型綜合醫(yī)院里已開始流行耐多黏菌素E的ESBLsKP,值得防控部門高度關(guān)注。而對(duì)MLST的最小生成樹(MST)分析發(fā)現(xiàn)(圖2),不同耐藥特征的KP有不同的菌落分布特性,hvPK以ST23和ST65為主要流行型,STs分布的比較集中,這與國內(nèi)其他地區(qū)的報(bào)道一致[9],值得注意的ST25與ST65、ST1135分別都只有1個(gè)管家基因差異,親源關(guān)系非常密切,但耐藥譜分析顯示ST65與ST1135都是對(duì)抗生素全敏感的,ST25對(duì)7種抗生素耐藥,而KP14(ST25)與產(chǎn)ESBLs的KP52(ST17)間也只有2個(gè)管家基因差異,親源關(guān)系密切,而這8株菌株都分離自同一間醫(yī)院,KP14與KP52更是分離自同一間ICU病房,這提示該醫(yī)院可能存在優(yōu)勢(shì)的菌型,耐藥基因元件不僅在同ST型菌株間存在傳遞的風(fēng)險(xiǎn),并且在不同ST型菌株間也同樣存在該風(fēng)險(xiǎn);CRKP主要以ST11為主要流行型,ST型分布比較集中,主要在ST690周圍,彼此間的親緣關(guān)系比較近,與我國目前的主要流行型一致[10],CRKP的耐藥譜顯示除了對(duì)碳青霉烯藥物耐藥外,至少還對(duì)14種藥物耐藥;ESBLs KP主要以ST37為主要流行型,分布同樣也相對(duì)集中,主要圍繞在KP05(ST35)周圍,而耐藥譜分布也顯示不同ST型間耐藥情況差別也不大,這提示該醫(yī)院存在這個(gè)菌型的優(yōu)勢(shì)克隆群;其他類型MDRKP的ST型呈多態(tài)性分布。

    圖1 63株肺炎克雷伯菌菌株耐藥譜表Fig. 1 Drug-resistant spectrum of 63 strains of Klebsiella pneumoniae

    圖2 63株肺炎克雷伯菌最小生成樹(MST)Fig. 2 63 strains of Klebsiella pneumoniae MST

    根據(jù)本文的研究結(jié)果,可見本地區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)KP臨床分離株的耐藥譜與菌落分布情況都各具特征,高毒力但抗生素敏感型的hvPK與多重耐藥的KP間呈現(xiàn)不同的菌落特征,同時(shí)不同菌落特征的菌株間存在耐藥元件相互傳遞的情況,而耐多黏菌素E的ESBLsKP出現(xiàn)尤其值得防控部門的高度關(guān)注,因此應(yīng)加強(qiáng)院內(nèi)肺炎克雷伯菌監(jiān)測(cè),防止出現(xiàn)高毒力菌株獲得多耐藥基因元件后出現(xiàn)高毒力強(qiáng)耐藥的肺炎克雷伯菌。

    圖3 4類肺炎克雷伯菌分子流行特性圖Fig. 3 Molecular epidemic characteristics of 4 types of Klebsiella pneumoniae

    猜你喜歡
    菌素克雷伯檢出率
    變棲克雷伯菌感染患者的臨床特征
    QCT與DXA對(duì)絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥檢出率的對(duì)比
    安寧市老年人高血壓檢出率及其影響因素
    侵襲性和非侵襲性肺炎克雷伯菌肝膿腫CT特征對(duì)比
    長程動(dòng)態(tài)心電圖對(duì)心律失常的檢出率分析
    伊維菌素對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    硫酸黏菌素促生長作用將被禁
    廣東飼料(2016年6期)2016-12-01 03:43:24
    山東產(chǎn)品抽查:文胸嬰幼兒服裝不合格率居前
    中國纖檢(2015年8期)2015-05-08 09:31:55
    連翹等中草藥對(duì)肺炎克雷伯菌抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究及臨床應(yīng)用
    多黏菌素E和多黏菌素B:一模一樣,還是截然不同?
    av播播在线观看一区| 午夜日本视频在线| 国产极品天堂在线| 国产av在哪里看| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲av福利一区| 床上黄色一级片| 精品一区在线观看国产| 精品一区在线观看国产| av在线播放精品| 嫩草影院入口| 久久久久网色| 少妇人妻精品综合一区二区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美日韩亚洲高清精品| 91av网一区二区| 久久久午夜欧美精品| 国产亚洲5aaaaa淫片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲精品亚洲一区二区| 神马国产精品三级电影在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 伦理电影大哥的女人| av在线蜜桃| 国产精品一区二区性色av| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品日韩av在线免费观看| 99久久精品国产国产毛片| 日日啪夜夜爽| 色综合色国产| 精品一区二区免费观看| 欧美激情在线99| 欧美3d第一页| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日日啪夜夜撸| 一级二级三级毛片免费看| 一本一本综合久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 热99在线观看视频| 日韩av在线大香蕉| 晚上一个人看的免费电影| 国产又色又爽无遮挡免| 免费看a级黄色片| 国产精品三级大全| 久久精品夜色国产| 亚洲无线观看免费| av播播在线观看一区| 国产精品精品国产色婷婷| 最近的中文字幕免费完整| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产色片| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品国产三级专区第一集| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品无大码| 听说在线观看完整版免费高清| 成人午夜高清在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 久久久久久伊人网av| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品久久视频播放| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 插逼视频在线观看| 国产成人精品婷婷| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久久久久中文| 久久久亚洲精品成人影院| 一边亲一边摸免费视频| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美潮喷喷水| 久久99精品国语久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美3d第一页| 波野结衣二区三区在线| 亚洲精品色激情综合| 亚洲av免费高清在线观看| 国产高清三级在线| 22中文网久久字幕| 色哟哟·www| 能在线免费观看的黄片| 国产伦理片在线播放av一区| 在线观看一区二区三区| 国产在视频线精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产乱人视频| 一个人免费在线观看电影| 超碰97精品在线观看| 欧美人与善性xxx| 国产精品无大码| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久久久久久丰满| 免费av不卡在线播放| 草草在线视频免费看| 精品久久久精品久久久| 日韩欧美一区视频在线观看 | 天堂俺去俺来也www色官网 | 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产 一区精品| 一夜夜www| 午夜福利成人在线免费观看| 波野结衣二区三区在线| 男女边吃奶边做爰视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产成人精品福利久久| 午夜激情久久久久久久| 久久99热6这里只有精品| 欧美人与善性xxx| 欧美bdsm另类| 成年人午夜在线观看视频 | 亚洲av男天堂| 国产精品一区www在线观看| 18+在线观看网站| 男人舔奶头视频| 欧美性感艳星| 国产精品伦人一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产成人一区二区在线| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 午夜福利在线观看吧| 观看免费一级毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 六月丁香七月| 成人美女网站在线观看视频| 只有这里有精品99| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品久久久久久久久久久久久| 国产熟女欧美一区二区| 欧美性感艳星| av黄色大香蕉| 国产综合精华液| 一级av片app| 日韩视频在线欧美| 久久久久久九九精品二区国产| 色综合亚洲欧美另类图片| 综合色av麻豆| 九九爱精品视频在线观看| 色网站视频免费| 在线免费观看的www视频| 精品一区二区三区视频在线| 国产淫语在线视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品国产露脸久久av麻豆 | 床上黄色一级片| 久久久久久久午夜电影| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产黄色小视频在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 欧美+日韩+精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲精品乱久久久久久| 一个人免费在线观看电影| 国产视频内射| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产黄色免费在线视频| 精品午夜福利在线看| 亚洲高清免费不卡视频| 麻豆乱淫一区二区| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产免费视频播放在线视频 | 日韩一本色道免费dvd| 成人国产麻豆网| 男女视频在线观看网站免费| 免费看av在线观看网站| 久久这里有精品视频免费| av.在线天堂| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美激情在线99| 男人狂女人下面高潮的视频| kizo精华| 国产黄色免费在线视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 好男人在线观看高清免费视频| 国产精品一区www在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 日本一本二区三区精品| 精品酒店卫生间| 男人舔女人下体高潮全视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久久久久久午夜电影| 一边亲一边摸免费视频| 日韩欧美精品v在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 日韩av不卡免费在线播放| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久久久久黄片| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久久伊人网av| 少妇丰满av| 中文字幕av成人在线电影| 欧美xxⅹ黑人| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久久久久久久久久免费av| 欧美激情久久久久久爽电影| 日韩成人伦理影院| 黄色配什么色好看| 国产 一区精品| 欧美另类一区| 亚洲精品国产av成人精品| av线在线观看网站| 全区人妻精品视频| 综合色丁香网| 日韩电影二区| 草草在线视频免费看| 三级毛片av免费| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲精品色激情综合| 亚洲成人一二三区av| 精品不卡国产一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 免费少妇av软件| 黄片无遮挡物在线观看| av女优亚洲男人天堂| 不卡视频在线观看欧美| 97在线视频观看| 又爽又黄无遮挡网站| 可以在线观看毛片的网站| 免费大片黄手机在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久97久久精品| 免费看日本二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲欧美精品专区久久| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲国产精品国产精品| 欧美97在线视频| 黄色一级大片看看| 22中文网久久字幕| 久久99热这里只有精品18| or卡值多少钱| 国内精品宾馆在线| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 51国产日韩欧美| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美区成人在线视频| 少妇的逼好多水| 成人鲁丝片一二三区免费| 插逼视频在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 成年女人在线观看亚洲视频 | 国产黄色免费在线视频| 好男人在线观看高清免费视频| 特级一级黄色大片| 高清日韩中文字幕在线| 在线免费观看不下载黄p国产| 免费无遮挡裸体视频| 97在线视频观看| 欧美高清性xxxxhd video| 欧美xxⅹ黑人| 男女视频在线观看网站免费| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲av免费在线观看| 一级黄片播放器| 一个人看的www免费观看视频| 高清av免费在线| 国产精品伦人一区二区| 日韩av不卡免费在线播放| 性插视频无遮挡在线免费观看| 一级爰片在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 97热精品久久久久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲一区高清亚洲精品| 边亲边吃奶的免费视频| 精品久久久久久久末码| 色5月婷婷丁香| 99久久中文字幕三级久久日本| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 一本久久精品| 日韩国内少妇激情av| 国产av不卡久久| 99久国产av精品| 欧美精品一区二区大全| 亚洲综合精品二区| 亚洲欧美日韩东京热| 国产黄a三级三级三级人| 免费黄网站久久成人精品| 中文天堂在线官网| 男插女下体视频免费在线播放| 在线观看人妻少妇| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久性生活片| 国产精品综合久久久久久久免费| 午夜福利在线观看吧| 久久久久免费精品人妻一区二区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品久久久久久成人av| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 99久久九九国产精品国产免费| 偷拍熟女少妇极品色| 秋霞伦理黄片| 亚洲av成人av| 精品国内亚洲2022精品成人| 一级片'在线观看视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产不卡一卡二| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产高潮美女av| 精品久久久精品久久久| 啦啦啦韩国在线观看视频| 97热精品久久久久久| 青春草国产在线视频| 尾随美女入室| 亚洲av中文av极速乱| 久久午夜福利片| 日韩一区二区视频免费看| 男人舔女人下体高潮全视频| 一级黄片播放器| 身体一侧抽搐| 综合色av麻豆| 日韩欧美国产在线观看| av网站免费在线观看视频 | 婷婷色综合www| 午夜视频国产福利| eeuss影院久久| 成人性生交大片免费视频hd| 少妇高潮的动态图| 97在线视频观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 2021天堂中文幕一二区在线观| 婷婷色综合www| 黄色配什么色好看| 日韩强制内射视频| 久久久久久久久久久丰满| 婷婷色麻豆天堂久久| 丰满少妇做爰视频| 久久久久久久久久成人| 亚洲精品色激情综合| 99热这里只有是精品在线观看| 中文资源天堂在线| 亚州av有码| 嘟嘟电影网在线观看| 欧美精品一区二区大全| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 最近2019中文字幕mv第一页| www.av在线官网国产| 黑人高潮一二区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 美女黄网站色视频| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲av免费在线观看| 能在线免费观看的黄片| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 性色avwww在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美xxⅹ黑人| 我要看日韩黄色一级片| 久热久热在线精品观看| 精品国产露脸久久av麻豆 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产免费福利视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 我的老师免费观看完整版| 欧美一区二区亚洲| 国产日韩欧美在线精品| 精品人妻视频免费看| 一二三四中文在线观看免费高清| 中文字幕久久专区| 国产不卡一卡二| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲经典国产精华液单| 精品久久国产蜜桃| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲自拍偷在线| 在现免费观看毛片| 国产一区二区三区综合在线观看 | 99久国产av精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 成人亚洲精品av一区二区| 国产午夜福利久久久久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产欧美日韩精品一区二区| 五月伊人婷婷丁香| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲色图av天堂| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲色图av天堂| 日韩欧美精品免费久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产高清三级在线| 亚洲欧洲日产国产| 免费看不卡的av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲欧美日韩东京热| 久久韩国三级中文字幕| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久精品夜色国产| 国产 一区精品| 精品久久久久久成人av| 亚洲精品乱久久久久久| a级一级毛片免费在线观看| 舔av片在线| 亚洲欧美日韩东京热| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩一本色道免费dvd| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 欧美 日韩 精品 国产| 日韩中字成人| 午夜久久久久精精品| 美女黄网站色视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 视频中文字幕在线观看| 国产精品一区二区在线观看99 | 网址你懂的国产日韩在线| 美女内射精品一级片tv| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久精品夜色国产| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久精品国产亚洲av天美| 97超视频在线观看视频| 看黄色毛片网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产精品99久久久久久久久| 色播亚洲综合网| 欧美最新免费一区二区三区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 97热精品久久久久久| 寂寞人妻少妇视频99o| 51国产日韩欧美| 国产一区二区三区av在线| 精品久久久久久成人av| xxx大片免费视频| 看黄色毛片网站| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲av二区三区四区| 性色avwww在线观看| 欧美精品一区二区大全| 免费大片黄手机在线观看| 国精品久久久久久国模美| 大陆偷拍与自拍| 精品一区二区三区视频在线| 久久99蜜桃精品久久| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品色激情综合| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品女同一区二区软件| 免费无遮挡裸体视频| 大香蕉97超碰在线| 亚洲精品视频女| 婷婷色av中文字幕| 精品一区二区免费观看| 亚洲av成人精品一区久久| av一本久久久久| 久久久久国产网址| 亚洲四区av| 亚洲真实伦在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 国产成年人精品一区二区| 18+在线观看网站| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 在线天堂最新版资源| 能在线免费观看的黄片| 欧美日韩精品成人综合77777| 观看免费一级毛片| 嫩草影院精品99| www.av在线官网国产| 毛片女人毛片| 男人舔奶头视频| 久久久久久久国产电影| 久久人人爽人人爽人人片va| av在线亚洲专区| 午夜福利在线观看吧| 久久热精品热| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 五月玫瑰六月丁香| 久久久久久久久久成人| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩精品青青久久久久久| 99久国产av精品| 黑人高潮一二区| 尾随美女入室| 亚洲国产精品成人综合色| 人妻一区二区av| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产男女超爽视频在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲欧美精品自产自拍| 精品欧美国产一区二区三| 简卡轻食公司| 国产色爽女视频免费观看| 国产不卡一卡二| 好男人在线观看高清免费视频| 国产成人freesex在线| av在线天堂中文字幕| 久久久久久久大尺度免费视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美3d第一页| 美女大奶头视频| 如何舔出高潮| 久久精品国产自在天天线| 熟女人妻精品中文字幕| 国产黄色免费在线视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| av播播在线观看一区| 中文字幕制服av| 婷婷六月久久综合丁香| 高清在线视频一区二区三区| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产色爽女视频免费观看| 高清av免费在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丰满乱子伦码专区| 色5月婷婷丁香| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品酒店卫生间| 亚洲精品国产av成人精品| 91久久精品电影网| 麻豆乱淫一区二区| 精品人妻视频免费看| 中文字幕亚洲精品专区| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 三级国产精品片| 日韩欧美精品v在线| 亚洲人成网站在线播| 国内揄拍国产精品人妻在线| 又爽又黄a免费视频| 国产男人的电影天堂91| 婷婷六月久久综合丁香| 别揉我奶头 嗯啊视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 淫秽高清视频在线观看| a级一级毛片免费在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 麻豆成人av视频| 久久综合国产亚洲精品| 伦精品一区二区三区| 欧美zozozo另类| 成人亚洲欧美一区二区av| 性色avwww在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产乱来视频区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 韩国av在线不卡| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美成人午夜免费资源| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲av在线观看美女高潮| 日本午夜av视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 五月玫瑰六月丁香| 日韩电影二区| 激情五月婷婷亚洲| 国产午夜精品一二区理论片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 免费人成在线观看视频色| 一级毛片 在线播放| 国产一区有黄有色的免费视频 | 久久久久久国产a免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 97精品久久久久久久久久精品| 免费观看a级毛片全部| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲自偷自拍三级| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 天美传媒精品一区二区| 国产精品一区二区在线观看99 | 十八禁国产超污无遮挡网站| 精品久久久久久久久av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲va在线va天堂va国产| 男女边摸边吃奶| 欧美极品一区二区三区四区| 日韩大片免费观看网站| 一级毛片aaaaaa免费看小| 一夜夜www| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 国产乱人视频| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲国产欧美人成| 亚洲无线观看免费|