胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化檢測對胸腔積液的價(jià)值分析

李清苗

（河南省南陽市腫瘤醫(yī)院 病理科，河南 南陽 473000）

胸腔積液是臨床上較為常見的呼吸系統(tǒng)病癥，其主要的臨床特征為胸膜腔內(nèi)病理性液體積聚，胸腔膜處于臟層與壁層胸膜之間，正常人體的胸膜腔內(nèi)包含5～15 ml液體，主要在人體呼吸時(shí)起到潤滑作用，胸膜腔內(nèi)每天形成與吸收約500～1 000 ml的液體，多種因素均可導(dǎo)致胸膜腔內(nèi)液體發(fā)生變化，即引發(fā)胸腔積液[1-2]。目前，臨床上常采取細(xì)胞學(xué)涂片、蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining, HE）、肺穿刺活檢、支氣管鏡活檢及活體組織活檢等方式對胸腔積液進(jìn)行檢查，但因存在較多的限制條件，無法廣泛普及[3-4]。本研究主要分析胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化檢測對胸腔積液的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月-2018年2月本院收治的84例胸腔積液待查患者作為研究對象，其中 男43 例，女41例；年 齡22～81歲，平 均（51.26±6.48） 歲。所有患者均行細(xì)胞學(xué)涂片、HE染色及細(xì)胞塊免疫組化檢測。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批同意。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均需接受胸腔積液檢查的患者；②年齡＞18歲；③患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重的心、肝及腎等功能不全者；②精神障礙者；③依從性較差者。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞涂片制備 將取出的胸腔積液標(biāo)本置于室溫下30 min，利用吸管吸取50 ml容器接近底部處的胸水，并將其置于尖底離心管內(nèi)，以2 500 r/min的速度離心5 min，離心后將上清液倒掉，保留沉淀物，利用醫(yī)用棉簽吸取沉淀物中多余的水分，隨后直接進(jìn)行涂片，并將濕片置于濃度為90%的乙醇溶液中固定，置于通風(fēng)柜中晾干，最終進(jìn)行常規(guī)HE染色及閱片。

1.3.2 細(xì)胞塊制備 將取出的胸腔積液標(biāo)本置于室溫下30 min，利用吸管吸取50 ml容器接近底部處的胸水，并將其置于尖底離心管內(nèi)，以2 500 r/ min的速度離心5 min，離心后將上清液倒掉，保留沉淀物。在試管中加入5～10 m濃度為4%的中性甲醛，與沉淀物充分混合，置于室溫下固定1 h，離心后將上清液倒掉，再加入5～10 ml濃度為4%的中性甲醛，混合均勻后，固定1 h，再次將上清液倒掉，利用濾紙將沉淀物包好。利用全自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水處理及包埋，完成細(xì)胞塊制作，最終進(jìn)行切片、常規(guī)HE染色及閱片。

1.3.3 免疫組化染色 利用細(xì)胞塊制作切片，厚度約為3 μm，采用EnVision兩步法進(jìn)行測定，染色流程均嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，抗體及工作液均由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供。一抗使用廣譜免疫組化指標(biāo)包括CK5/6（D5/16B4）、CK7（OV-TL12/30）、MOC-31、CD15（Carb-3）、Epithelial Antigen（Ber-EP4）、TTF-1（SPT24）、CEA（ZC23）、Calretinin（SP13）、WT-1（WT49） 及Desmin（D33），染色體均以磷酸緩沖鹽（phosphate buffer saline, PBS）代替一抗作為陰性對照，用已知的陽性切面作為陽性對照。一抗使用廣譜中支持間皮細(xì)胞的免疫組化指標(biāo)包括CK5/6、Calretinin、WT-1及Desmin；支持肺腺癌的免疫 組 化指標(biāo) 包 括CK7、MOC-31、CD15、Ber-EP4、TTF-1及CEA。

1.3.4 結(jié)果判定 ①HE染色觀察及敏感性分析：所有病例的HE染色情況均由兩名專業(yè)的病理醫(yī)師進(jìn)行觀察，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、黏附性及核不典型性將其分為良性、惡性及無法確定。其中良性主要指細(xì)胞彌散，形態(tài)溫和，且無不典型性，即為反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞；惡性主要指細(xì)胞成團(tuán)，細(xì)胞形態(tài)及核均為不典型性，均較嚴(yán)重，即轉(zhuǎn)移性腺癌與惡性間皮瘤細(xì)胞；無法確定主要指細(xì)胞彌散，細(xì)胞核的不典型性處于中重度，或形成細(xì)胞團(tuán)，但細(xì)胞核的不典型性僅處于輕中度。②免疫組 化 陽 性 分 析：CK5/6、CK7、MOC-31、Ber-EP4、CEA及Desmin呈現(xiàn)黃色細(xì)胞質(zhì)染色時(shí)則為陽性；TTF-1及WT-1細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色染色時(shí)則為陽性；CD15細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)均著色時(shí)則為陽性；Calretinin細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均出現(xiàn)著色時(shí)則為陽性。

1.4 觀察指標(biāo)

①對比單純細(xì)胞涂片HE染色及細(xì)胞塊免疫組化染色的結(jié)果；②分析轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞、惡性間皮瘤及反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞各抗體的陽性染色情況，并計(jì)算陽性率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 單純細(xì)胞涂片染色與細(xì)胞塊免疫組化的診斷結(jié)果對比

單純細(xì)胞涂片HE染色及細(xì)胞塊免疫組化染色的結(jié)果對比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；最終確診為惡性類型的39例患者中，經(jīng)細(xì)胞塊免疫組化檢測明確為惡性的有38例，誤診1例，診斷符合率為97.44%（38/39）。經(jīng)肺和胸膜穿刺活檢證實(shí)肺腺癌30例，肺鱗癌3例，惡性間皮瘤3例；2例淋巴瘤經(jīng)手術(shù)或活檢確診為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤及Burkitt淋巴瘤伴胸腔播散各1例；剩余1例誤診屬于轉(zhuǎn)移腺瘤，經(jīng)組織學(xué)診斷為足跟部惡性黑色素瘤胸腔轉(zhuǎn)移。見表1。

表1 HE染色與細(xì)胞塊免疫組化的診斷結(jié)果對比 例（%）

2.2 細(xì)胞涂片與細(xì)胞塊免疫組化染色結(jié)果對比

肺腺癌細(xì)胞對CK7、MOC-31、CD15、Ber-EP4、TTF-1及CEA的陽性表達(dá)率較高；間皮病變細(xì)胞對CK5/6、Calretinin、WT-1及Desmin的陽性表達(dá)率較高；上述抗體組合在肺腺癌與間皮病變（包括間皮腫瘤與反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞）的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。涂片免疫組化結(jié)果比較：轉(zhuǎn)移性肺腺癌涂片與間皮病變（包括間皮腫瘤與反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=62.07、44.40、48.70、62.22、55.15、51.85、41.85、70.00、54.92、43.01，均P=0.000）；細(xì)胞塊免疫組化結(jié)果比較：轉(zhuǎn)移性肺腺癌與間皮病變（包括間皮腫瘤與反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=78.00、78.00、69.78、78.00、78.00、55.47、73.86、78.00、78.00、70.08，均P=0.000）。見表2。

表2 84例胸腔積液細(xì)胞涂片與細(xì)胞塊免疫組化染色結(jié)果對比 例（%）

3 討論

胸腔積液的檢查方式較多，且容易獲取所需標(biāo)本，但傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)涂片易出現(xiàn)細(xì)胞成堆、成團(tuán)、細(xì)胞角質(zhì)化及細(xì)胞內(nèi)黏液不明顯等問題，且胸腔積液中的細(xì)胞成分較為復(fù)雜，各類細(xì)胞的形態(tài)較為類似，尤其是增生的間皮細(xì)胞與腺癌細(xì)胞，無法進(jìn)行有效鑒別。同時(shí)，細(xì)胞學(xué)涂片中的癌細(xì)胞較為分散，導(dǎo)致免疫組織化學(xué)染色陽性率偏低，且其無法反復(fù)操作，難以提供有價(jià)值的信息[5-7]。本研究結(jié)果顯示，單純細(xì)胞涂片染色檢測良性率為44.05%，惡性率為36.90%，無法確定率為19.05%。由于胸腔積液不僅發(fā)生于肺腺癌，腺癌、肺鱗癌及淋巴瘤等也可能形成胸腔積液，使鑒別難度大大增加[8]。因此，臨床中應(yīng)進(jìn)一步探討更加有效的診斷胸腔積液的方法。

細(xì)胞塊免疫組化檢測是目前最常用的檢測胸腔積液方法，收集胸腔積液中的癌細(xì)胞，并將其制成細(xì)胞塊，可獲取更多的腫瘤細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞結(jié)構(gòu)更加清晰，且其可保持一定的組織學(xué)結(jié)構(gòu)及排列方式，對病理學(xué)診斷更加有利，可有效提升腫瘤細(xì)胞的檢出率及準(zhǔn)確率，為臨床治療提供依據(jù)[9-11]。本研究結(jié)果顯示，細(xì)胞塊免疫組化檢測良性率為53.57%，惡性率為46.43%，無無法確定病例，且最終確診的39例惡性患者中，經(jīng)細(xì)胞塊免疫組化檢測明確為惡性的有38例，誤診1例，診斷符合率為97.44%，表明胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化檢測可有效判斷胸腔積液細(xì)胞的類型及性質(zhì)，提升胸腔積液的診斷符合率，降低漏診率及誤診率，可作為細(xì)胞病理診斷的理想方法；此外，細(xì)胞塊的制作具有操作過程簡單、易于保存及易于檢測等優(yōu)勢，可在基層醫(yī)院推廣使用[12-13]。本研究結(jié)果顯示，肺腺癌細(xì)胞對CK7、MOC-31、CD15、Ber-EP4、TTF-1及CEA的陽性表達(dá)率較高；反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞及惡性間皮瘤對CK5/6、Calretinin、WT-1及Desmin的陽性表達(dá)率較高，上述抗體組合在肺腺癌與間皮病變間的表達(dá)存在差異性，表明上述抗體聯(lián)合應(yīng)用可有效鑒別肺腺癌與間皮病變，且其特異性較強(qiáng)，與章文華[14]等研究結(jié)果基本一致，分析其原因在于多種抗體綜合可有效消除各抗體的表達(dá)差異，避免發(fā)生交叉反應(yīng)，進(jìn)而提升診斷陽性率及鑒別能力[15]。

綜上所述，胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化檢測在胸腔積液檢測中具有較高應(yīng)用價(jià)值，為臨床治療提供重要依據(jù)。