8種生物藥劑對水稻稻曲病菌的室內(nèi)毒力測定與田間藥效試驗

伏榮桃，劉 斌，陳 誠，王 劍，龔學(xué)書，盧代華*，廖 洋

(1.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所，四川 成都 610066；2.農(nóng)業(yè)部西南作物有害生物綜合治理重點實驗室，四川 成都 610066；3.平武縣農(nóng)業(yè)局，四川 平武 622550)

【研究意義】水稻稻曲病是由麥角菌科稻曲病菌Ustilaginoideavirens引起的真菌病害[1]，病原菌主要侵染水稻的稻穗，感病的稻穗形成大于谷粒數(shù)倍的稻曲球[2-3]。稻曲球不但對水稻的產(chǎn)量和質(zhì)量造成重大的損失，而且還產(chǎn)生對人和牲畜有劇毒作用的真菌毒素[4-5]。近年來，由于雜交稻的大面積推廣和稻田過量施用氮肥，以及氣候變化、耕作制度的改變等導(dǎo)致稻曲病發(fā)生日趨嚴(yán)重，已成為我國水稻主要的真菌病害之一[6-7]?！厩叭搜芯窟M展】目前，生產(chǎn)上的水稻品種對稻曲病抗性較弱，大多為感病品種，至今尚未見通過審定的抗稻曲病品種釋放。因此，對稻曲病的防治主要還是采用藥劑進行預(yù)防。汪愛娟等[8]在大田開展了防治稻曲病藥劑篩選試驗，結(jié)果篩選出藥劑NFX2014-12對稻曲病有較好的防治效果。王連芬等[9]在水稻破口前7 d和齊穗期，噴施37.0 %紋曲必凈可濕性粉劑和50.0 %多·酮可濕性粉劑對稻曲病的防治效果能到58.0 %左右。柯漢云等[10]于水稻破口前9 d進行田間藥劑試驗，發(fā)現(xiàn)藥劑325.00 g/L 苯甲·嘧菌酯懸浮劑和18.7 %丙環(huán)·嘧菌酯懸浮劑對稻曲病的防效較好，病穗的防治效果分別能達89.80 %、88.96 %。胡賢鋒等[11]進行稻曲病菌室內(nèi)毒力測定，試驗表明戊唑醇和嘧菌酯對稻曲病菌的菌絲生長抑制作用最強，其EC50值分別為0.1091、0.1585 mg/L。楊皓等[12]田間水稻稻曲病防治試驗顯示，在水稻破口前2～5 d內(nèi)噴施三苯醋錫和紋曲凈對水稻稻曲病防治效果較好。前人對稻曲病的防治大多選用化學(xué)藥劑，此外，沒有統(tǒng)一的稻曲病防治適期，因此，可能造成稻曲病的頻繁防治和化學(xué)藥劑的過多使用，產(chǎn)生藥劑殘留給環(huán)境造成污染?！颈狙芯壳腥朦c】本試驗通過室內(nèi)毒力測定和田間試驗研究，篩選防治稻曲病的生物藥劑和最佳防治時期?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以期篩選出高效的防治生物藥劑和最佳防治時間，為在生產(chǎn)上推廣優(yōu)化的防治模式提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試藥劑 20 %井崗霉素水溶粉劑(浙江錢江生物化學(xué)股份有限公司)，15 %多抗霉素可濕性粉劑(青島海納生物科技有限公司)，68 %寧南·嘧肽水劑(上海聯(lián)邦化工有限責(zé)任公司)，2.5 %井岡·100億活芽孢/mL枯芽菌(紋曲寧)(江蘇省蘇科農(nóng)化有限公司)，80 %乙蒜素乳油(河南科邦化工有限公司)，7.5 %氨基寡糖素可濕性粉劑(江蘇明德立達作物科技有限公司)，3 %中生菌素可濕性粉劑(福建凱立生物制品有限公司)，1 %蛇床子素水乳劑(江蘇省農(nóng)化有限責(zé)任公司)。

1.1.2 供試水稻品種 選用感稻曲病的岡優(yōu)188。

1.1.3 供試菌株與培養(yǎng) 稻曲病菌菌株為本實驗室分離提供，采用馬鈴薯蔗糖固體培養(yǎng)基(PSA：馬鈴薯300 g、蔗糖20 g、瓊脂15 g，蒸餾水加水至體積1000 mL)進行培養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測定 采用菌絲生長速率抑制法[13]對稻曲病菌進行室內(nèi)毒力測定。將各種供試藥劑用無菌水按1︰10的比例稀釋成藥液；在無菌條件下，用細菌過濾器過濾制成無菌的母液；然后按照一定比例加入到熔化并冷卻至55 ℃左右的PSA培養(yǎng)基中，配制成不同濃度的含毒培養(yǎng)基平板(共設(shè)置7個濃度梯度)，以無菌水為對照。用5 mm打孔器打取稻曲病菌邊緣菌絲塊，接種于含藥PSA平板中央，每個處理重復(fù)5次，28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別10、15、20 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算藥劑對菌絲生長的抑制率。用DPS 9.01軟件進行差異顯著性分析。采用15 d的菌絲生長抑制率作為計算有效濃度EC50的數(shù)據(jù)。以濃度對數(shù)為自變量(x),以抑制率幾率值為因變量(y)計算出各藥劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)(r)和EC50。

1.2.2 田間藥效試驗 試驗地概況。試驗設(shè)在雅安中里鎮(zhèn)農(nóng)民田實施，試驗點氣候在水稻生育期多雨、溫度適宜，稻曲病常年流行。

試驗設(shè)計。選取室內(nèi)篩選有效的藥劑進行田間藥效試驗。試驗小區(qū)18～24 m2，隨機區(qū)組排列，每個藥劑3次重復(fù)。每個小區(qū)間均筑埂，每個小埂用塑料薄膜覆蓋，單獨排灌，以防止藥劑串灌影響試驗效果。常規(guī)栽培管理，在水稻整個生育期不噴撒殺菌劑。

施藥時間。施藥時間設(shè)4個處理：①水稻破口前12～15 d，②水稻破口前6～9 d，③水稻破口前3～5 d，④水稻齊穗期。每個處理按45 L/667m2兌水噴霧，以噴施等量的清水作為對照。

調(diào)查與統(tǒng)計分析。施藥3 和7 d后觀察水稻安全性，于水稻黃熟期按照表1分級標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查稻曲病的發(fā)生情況。每個小區(qū)采取5點取樣，每點調(diào)查20穴，共調(diào)查100穴。根據(jù)調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計各小區(qū)的病穴率、病穗率及防治效果。采用DPS9.01軟件，對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

病穗率( %)=(發(fā)病穗數(shù)/調(diào)查總穗數(shù))×100

病穗防效( %)=[(清水對照區(qū)病穗率-藥劑處理區(qū)病穗率)/清水對照區(qū)病穗率]×100

表1 水稻稻曲病分級調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Classification criteria of rice false smut

表2 8種生物藥劑對水稻稻曲病菌菌絲生長的毒力測定Table 2 The toxicity of 8 biological fungicides to the growth of mycelium of U. virens

注：*同行數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著 (P<0.05)。
Note: *Different lowercase letters in the same column represented significant difference(P<0.05).

病情指數(shù)=[∑(各級發(fā)病穗數(shù)×各級代表值)/(調(diào)查總穗數(shù)×最高級代值)]×100

病指防效( %)=[(清水對照區(qū)病情指數(shù)-藥劑處理區(qū)病情指數(shù))/清水對照區(qū)病情指數(shù)]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生物藥劑對稻曲病菌菌絲生長的毒力測定

從表2可看出，稻曲病菌對8種供試生物藥劑的敏感性存在差異。其中，稻曲病菌菌絲生長對蛇床子素和乙蒜素的敏感性最高，其EC50值分別為2.00、2.12 mg/L；對紋曲寧敏感性次之，EC50為19.15 mg/L；對氨基寡糖素、多抗霉素和中生菌素的敏感性較低，EC50值分別為30.80、43.28和51.60 mg/L；對井岡霉素的敏感性較差，EC50值為372.78 mg/L；對寧南·嘧肽的敏感性最差，EC50值為734.16 mg/L。室內(nèi)藥劑毒力測定為下一步田間藥效試驗提供數(shù)據(jù)依據(jù)。

2.2 田間藥效試驗

2.2.1 不同生物藥劑對稻曲病的田間防效 從表3可以看出，8種生物藥劑對稻曲病的防效差異顯著。其中，2.5 %紋曲寧和15 %多抗霉素可濕性粉劑防效較好，病穗防效和病指防效都在80.00 %以上；其次為 20 %井岡霉素水溶粉劑和1 %蛇床子素水乳劑，病穗防效和病指防效分別為79.29 %、77.58 %和73.53 %、71.40 %；防效較差的是7.5 %氨基寡糖素可濕性粉劑和80 %乙蒜素乳油，病穗防效和病指防效分別為67.65 %、66.67 %和66.88 %、66.05 %；防效最差的是68 %寧南·嘧肽水劑，病穗防效和病指防效分別為33.48 %、31.37 %。

2.2.2 不同施藥時期對稻曲病的防效影響 從表4可以看出，2種藥劑在不同時期施藥對稻曲病的防效情況趨勢相似，破口前12～15 d施藥處理的病穗率和病情指數(shù)均較高；破口前6～9 d藥劑處理區(qū)的病穗率和病情指數(shù)最低；破口前2～3 d施藥處理的藥劑防病效果均下降；齊穗期時施藥處理時，2藥劑的防病效果均最差，病穗率和病情指數(shù)最高。因此，破口前6～9 d進行稻曲病藥劑防治是最佳防治時期。

3 討 論

近年來，由于雜交稻的大面積推廣、稻田過量施用氮肥、氣候變化、耕作制度的改變等導(dǎo)致稻曲病發(fā)生日趨嚴(yán)重，已成為我國水稻主要的真菌病害之一。目前尚未見高抗稻曲病水稻品種的推廣，因此對稻曲病防治主要采用化學(xué)藥劑防治。稻曲病的防治主要以預(yù)防為主，當(dāng)?shù)厩“Y狀已出現(xiàn)再施藥時，幾乎沒的任何防治效果。因此，對稻曲病的防治最關(guān)鍵的是要選擇好藥劑、把握好施藥時間等。

表3 供試藥劑田間稻曲病防治效果Table 3 The control effect of biological fungicides in field

表4 不同時期單次施藥對稻曲病病穗率和病情指數(shù)的影響Table 4 The effect of the different spraying periods on disease rate and disease index

迄今為止，對稻曲病的防治藥劑篩選主要是化學(xué)藥劑，尚未見生物藥劑對稻曲病菌的室內(nèi)毒力測定和田間藥效試驗的報道。本研究選用8種生物藥劑對稻曲病菌進行室內(nèi)毒力測定，結(jié)果表明，8種生物藥劑對稻曲病菌的菌絲生長均有一定的抑制作用，稻曲病菌對這8種生物藥劑的敏感性大小為：蛇床子素>乙酸素>紋曲寧>多抗霉素>氨基寡糖素>中生菌素>井岡霉素>寧南·嘧肽，其中蛇床子素和乙蒜素對稻曲病菌的菌絲生長抑制作用最強，EC50分別為2.00、2.12 mg/L；紋曲寧、氨基寡糖素、多抗霉素較好；井岡霉素的敏感性較差，EC50值為372.78 mg/L，這與胡賢鋒等[11]報道的井岡霉素對稻曲病菌的抑制效果相似，但是EC50不一樣；EC50最大的為寧南·嘧肽，高達734.16 mg/L，表明其對稻曲病菌菌絲生長的抑制作用極小。

從田間藥效試驗中可以看出，2.5 %紋曲寧和15 %多抗霉素可濕性粉劑防效較好，病穗防效和病指防效都在80.00 %以上；防效較差的是7.5 %氨基寡糖素可濕性粉劑和80 %乙蒜素乳油，病穗防效和病指防效分別為67.65 %、66.67 %和66.88 %、66.05 %；防效最差的是68 %寧南·嘧肽水劑，病穗防效和病指防效都在40.00 %以下。

對比分析毒力測定和田間藥效試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這8種生物農(nóng)藥的抑菌能力與田間防效差別較大。室內(nèi)毒力測定抑菌作用較強的80 %乙蒜素乳油，但在田間的病穗防效較差，只有66.67 %；而15 %多抗霉素可濕性粉劑室內(nèi)毒力測定EC50值為30.80 mg/L，但是田間的病穗防效卻高達82.57 %。一些生物殺菌劑出現(xiàn)這種室內(nèi)毒力測定與田間實際防效存在一定差異的現(xiàn)象，其原因可能是殺菌劑本身特性、環(huán)境條件、病菌、田間藥效受作物等多種因素制約[14]，如乙蒜素是一種強揮發(fā)性生物藥劑，在室內(nèi)密閉的培養(yǎng)皿條件下，揮發(fā)出的刺激性物質(zhì)對病原菌的氣生菌絲有強烈的抑制作用，而在田間開放性條件下就失去了這種作用，導(dǎo)致田間防效下降。因此，在分析藥劑室內(nèi)毒力與田間藥效試驗結(jié)果時，要綜合考慮各種因素的影響。

水稻稻曲病的防治要抓住施藥時期，當(dāng)?shù)厩“Y狀已出現(xiàn)再施藥時，幾乎沒的任何防治效果[10,15]。目前，大多文獻報道的是化學(xué)藥劑對稻曲病防治時期的探討[15-16]，但尚未見生物藥劑對稻曲病防治適期的研究。本試驗研究了生物藥劑對稻曲病防治適期，結(jié)果表明，破口前12～15 d施藥處理的病穗率和病情指數(shù)均較高；推遲施藥時間到破口前6～9 d時，藥劑的藥效得到了好的發(fā)揮；但再推遲用藥時間時，則藥劑減害作用下降；到齊穗期用時，藥劑防治效果最差。因此，本試驗推定水稻破口前6～9 d，噴施2.5 %紋曲寧或15 %多抗霉素可濕性粉劑，對稻曲病的綜合防治效果較好。

4 結(jié) 論

選用的8種生物藥劑，對稻曲病菌的菌絲生長均有一定的抑制作用，但在水稻破口前6～9 d內(nèi)噴施2.5 %紋曲寧或15 %多抗霉素可濕性粉劑對水稻稻曲病有較好的防治。這些研究結(jié)果為在生產(chǎn)上推廣優(yōu)化水稻稻曲病防治模式提供依據(jù)。