凝膠色譜法測(cè)定頭孢菌素類藥物中高分子雜質(zhì)的應(yīng)用心得

申賀

摘 要：在物質(zhì)鑒定技術(shù)體系當(dāng)中。凝膠色譜法一直以來都是一種非常常用的技術(shù)，尤其在頭孢菌素藥物的高分子雜志測(cè)定當(dāng)中的應(yīng)用尤其廣泛。和其他成分測(cè)定技術(shù)相比起來，該技術(shù)分離效果出色，同時(shí)操作簡(jiǎn)單，易于使用，設(shè)備操作也并不復(fù)雜，所以在長(zhǎng)期實(shí)踐當(dāng)中得到了人們的喜愛。本文對(duì)于凝膠色譜法測(cè)定頭孢菌素類藥物當(dāng)中高分子雜質(zhì)的一些應(yīng)用要點(diǎn)進(jìn)行了總結(jié)和分析，希望可以給相關(guān)工作的開展提供一些參考。

關(guān)鍵詞：頭孢菌素類藥物；凝膠色譜技術(shù)；高分子雜質(zhì)

由于藥物藥理以及具體的制備工藝的原因，很多抗生素藥物當(dāng)中有很多高分子雜質(zhì)的存在，其對(duì)于抗生素藥物效果的正常發(fā)揮而言起到了很大的影響，在嚴(yán)重時(shí)，甚至?xí)a(chǎn)生一些副作用，所以不難看出高分子雜質(zhì)測(cè)定的重要性，在其投入市場(chǎng)開始大規(guī)模銷售之前，首先需要保證高分子雜質(zhì)數(shù)量符合于相關(guān)規(guī)定?，F(xiàn)在在頭孢菌素類藥物的高分子雜質(zhì)測(cè)定當(dāng)中，凝膠色譜法的應(yīng)用較為廣泛，本文針對(duì)其中的測(cè)定要點(diǎn)進(jìn)行了分析。

1 儀器準(zhǔn)備和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

對(duì)于這種物質(zhì)分析類的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)而言，準(zhǔn)備工作是非常重要的，頭孢菌素類的藥物高分子雜質(zhì)測(cè)定實(shí)驗(yàn)也是如此。總結(jié)起來，作為實(shí)驗(yàn)人員來說，首先需要做好各項(xiàng)準(zhǔn)備工作，保證各項(xiàng)參數(shù)完全符合說明書的要求，讓實(shí)驗(yàn)可以取得一個(gè)更好的結(jié)果。

1.1 儀器準(zhǔn)備

對(duì)于儀器準(zhǔn)備而言，實(shí)驗(yàn)人員首先需要將輸液設(shè)備、檢測(cè)設(shè)備以及數(shù)據(jù)處理設(shè)施準(zhǔn)備好，對(duì)于輸液設(shè)備而言，首先需要保證設(shè)別在運(yùn)行過程中輸液流動(dòng)速度的均勻性，讓其符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范，同時(shí)監(jiān)測(cè)設(shè)備準(zhǔn)備工作也要著重考慮紫外檢測(cè)能力，確保該項(xiàng)能力達(dá)到飾演的需要。設(shè)備準(zhǔn)備過程中，工作人員也要及時(shí)和色譜工作站的人員取得聯(lián)絡(luò)，保證數(shù)據(jù)記錄的準(zhǔn)確無誤，同時(shí)工作人員也可以將數(shù)據(jù)發(fā)送到積分記錄儀器當(dāng)中。儀器準(zhǔn)備工作最關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié)就是設(shè)置合理的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，及時(shí)檢測(cè)自行配置的儀器設(shè)備。實(shí)驗(yàn)人員為了可以保證試驗(yàn)的重現(xiàn)性，在工作中也要隨時(shí)對(duì)設(shè)備進(jìn)行復(fù)檢。

1.2 凝膠色譜柱的準(zhǔn)備

在本實(shí)驗(yàn)當(dāng)中凝膠色譜柱起到的作用是非常關(guān)鍵的，工作人員你首先需要足夠了解儀器設(shè)備，尤其是要明確儀器的最大容量，這樣實(shí)驗(yàn)人員才能夠依據(jù)藥品的溶解能力來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以此保證實(shí)驗(yàn)成功。一般而言，凝膠色譜柱體積不能超過柱床體積，由于此類藥物中存在的高分子雜質(zhì)比較特殊，尤其是柱床體積更為特別，所以在準(zhǔn)備過程中可以直接確定柱床體積在50ml左右，在此基礎(chǔ)上就可以確定凝膠色譜柱體積。

1.3 分段玻璃柱管以及提取凝膠介質(zhì)

對(duì)于玻璃柱管而言，首先需要檢視其外觀，如果出現(xiàn)開口，則應(yīng)采用玻璃棉和開口橡膠塞來封端，也可以使用可調(diào)節(jié)玻璃柱管來開展實(shí)驗(yàn)。對(duì)抗生素藥物而言，高分子測(cè)定過程中需要采用葡聚糖凝膠來充當(dāng)試驗(yàn)介質(zhì)，在實(shí)驗(yàn)開始之前也要加水，保證溶脹度，結(jié)合實(shí)驗(yàn)器材的相關(guān)需要來進(jìn)行測(cè)算。其中的浸泡介質(zhì)如果是蒸餾水，則需要首先將其置于4℃的環(huán)境中40小時(shí)，或者將水煮沸，將氣泡排除到水外，在條件允許時(shí)，也可以采用真空脫氣的方法來溶脹，這樣可以起到更好的實(shí)驗(yàn)效果。

1.4 裝柱

將溶脹好的凝膠介質(zhì)用蒸餾水懸浮靜置后，每次傾去上層液，以去除凝膠碎屑和雜質(zhì)。按照這種方法進(jìn)行多次洗滌，直到上層的精置液澄清為止。實(shí)踐中可將凝膠介質(zhì)用水制成懸漿，然后一次性的倒入垂直放置的玻璃柱管中，待凝膠顆粒沉降完畢后即完成裝柱。也可在垂直放置的玻璃柱管和漏斗上放開柱管下口，保持液流順暢，用滴灌逐管從漏斗中加入凝膠懸漿，讓凝膠顆粒在蒸餾水中緩慢沉降，注意讓漏斗中隨時(shí)保持一定的凝膠懸漿。

1.5 維護(hù)以及恢復(fù)凝膠柱

對(duì)于凝膠柱而言，維護(hù)要點(diǎn)主要在于保證柱床的平衡性和連續(xù)性，如果凝膠出現(xiàn)了收縮問題或者氣泡變形問題，都需要將凝膠導(dǎo)出，重新進(jìn)行裝柱。如果僅僅柱頭部位出現(xiàn)了污損，則可以直接將該部分去除，之后加水，用玻璃棒攪拌，靜置之后，凝膠顆粒重新沉降，之后將柱頭重新封閉。如果色譜柱出現(xiàn)嚴(yán)重的非特異性吸附問題，那么在后續(xù)使用當(dāng)中就很可能改變凝膠色譜柱分離機(jī)制，在嚴(yán)重時(shí)，直接由于堵塞從而升高柱壓，在這種情況下則需要回復(fù)凝膠，進(jìn)行相關(guān)處理。

2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)對(duì)溶液的制備更加注重方便性和可操作性，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液的配制方法為用主成分對(duì)照品與雜質(zhì)對(duì)照品混合配制，但還是會(huì)使得有些雜質(zhì)對(duì)照品不能得到，如性質(zhì)不穩(wěn)定或分離提取技術(shù)要求太高等，但這些雜質(zhì)峰恰恰又是與主成分峰最難分離的色譜峰。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)?zāi)壳鞍ê芏鄡?nèi)容，主要考察對(duì)照品測(cè)定系統(tǒng)與高分子雜質(zhì)測(cè)定系統(tǒng)中藍(lán)色葡聚糖2000溶液峰的保留時(shí)間的比值，以及理論板數(shù)和拖尾因子，以此來控制對(duì)照品測(cè)定與高分子雜質(zhì)測(cè)定時(shí)儀器狀態(tài)的同一性。在以藍(lán)色葡聚糖2000的保留時(shí)間來表示高分子雜質(zhì)的保留特征時(shí)，對(duì)照品色譜峰及高分子雜質(zhì)色譜峰與藍(lán)色葡聚糖2000溶液色譜峰保留時(shí)間的比值都應(yīng)控制在一定的限度內(nèi)，由此才能實(shí)現(xiàn)對(duì)色譜柱狀態(tài)的正常控制。

3 操作方法上的注意事項(xiàng)

3.1 樣品溶液及對(duì)照溶液的制備

具體操作中必須要按規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)來配制樣品溶液，由于某些高濃度抗生素溶液具有一定的不穩(wěn)定性，所以通常對(duì)樣品溶液采取即溶即進(jìn)的形式。對(duì)照溶液的制備上，要注意頭孢菌高分子雜質(zhì)的含量測(cè)定，通常以樣品自身在SDS水溶液或純水中的締合物作為對(duì)照進(jìn)行定量。在制備締合物時(shí)特別要注意對(duì)濃度及水的純度的控制，以此來保證締合完全。

3.2 進(jìn)樣及進(jìn)樣方式

由于頭孢菌素高分子雜質(zhì)的含量測(cè)定，需要對(duì)照溶液分別在不同流動(dòng)相狀態(tài)下進(jìn)樣，所以更換流動(dòng)相后凝膠色譜柱應(yīng)充分平衡后才能進(jìn)樣。進(jìn)樣方式可以采用色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣，也可以選取手動(dòng)的方式，但是兩種進(jìn)樣方式都必須要做到色譜柱端沒有死體積，這樣才能避免樣品的擴(kuò)散造成峰展寬甚至影響分離。在自動(dòng)進(jìn)樣操作時(shí)可以參照有關(guān)液相色譜操作規(guī)程進(jìn)行，手動(dòng)進(jìn)樣方式主要用于開口柱。

4 結(jié)束語

經(jīng)過前文總結(jié)，我們已經(jīng)知道，在臨床當(dāng)中，頭孢菌素是一種較為常用的抗生素，而高分子雜質(zhì)含量直覺決定其自身的質(zhì)量，所以需要我們及時(shí)對(duì)其中的高分子雜質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，讓其可以發(fā)揮預(yù)期的藥效，避免產(chǎn)生副作用。在長(zhǎng)時(shí)間貯存的過程當(dāng)中，頭孢菌素類藥物會(huì)導(dǎo)致各種雜質(zhì)的產(chǎn)生，以聚合物為主，對(duì)于該高分子雜質(zhì)而言，凝膠色譜法有著很好的分離效果，應(yīng)用較為廣泛，本文針對(duì)其使用要點(diǎn)進(jìn)行簡(jiǎn)要分析。

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