918例聽障人群耳聾基因篩查結(jié)果分析

孫毅 孫麗麗 潘持國 李猛 張斌

耳聾是影響人類健康的常見原因，它主要由單一基因突變導致，少數(shù)由多基因突變引起，也可以由環(huán)境因素或基因和環(huán)境因素共同導致。研究發(fā)現(xiàn)，65%的耳聾是由遺傳引起的[1]。本研究通過對山東省聽障人群進行4種常見致聾基因的15個突變位點基因篩查，了解山東耳聾基因突變情況，為政府制定聽障殘疾防控體系提供科學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

對山東省所轄的濟南市、菏澤市、日照市、泰安市4個地市的持證聽障人士918例進行耳聾基因檢測，年齡2～22歲，平均8.7±5.1歲，所有樣本采集對象均在醫(yī)生和老師指導下由本人或監(jiān)護人填寫《耳聾病人信息登記表》，包括一般信息、出生史、耳聾發(fā)病年齡、家族史、個人史（耳聾前感染病史、耳毒性藥物應(yīng)用史、外傷史等），簽署知情同意書。

1.2 耳聾基因檢測方法

采用天根全血核酸提取試劑盒（DP348-03）對外周血進行基因組DNA提取，使用Nano DRrop 2000對提取的基因組DNA進行濃度檢測，濃度合格后使用PCR擴增儀對目的基因片段進行擴增（TC-96/G/H(b)），后續(xù)使用晶芯BioMixerTM芯片雜交儀、晶芯SlideWasherTM洗干儀和LuxScanTM10K-A微陣列芯片掃描儀和遺傳性耳聾基因芯片判別系統(tǒng)對檢測結(jié)果進行判讀。每批樣本包含一組陰性、陽性對照組，以驗證芯片檢測結(jié)果的可靠性。對所有芯片陽性結(jié)果進行Sanger測序復(fù)核，同時隨機抽取5%的陰性結(jié)果樣本進行Sanger測序。

2 結(jié)果

918例聽障人士檢測出耳聾基因突變417例，占總?cè)藬?shù)的45.42%，分別為GJB2基因突變227例，攜帶率為24.73%，SLC26A4基因突變165例，攜帶率為17.97%；線粒體12SrRNA基因均質(zhì)15例，攜帶率為1.63%；GJB3基因突變3例，攜帶率0.33%；雙基因雜合突變7例，攜帶率為0.76%。

GJB2基因突變結(jié)果見表1，235delC純合突變占9.04%（83例）、299_300delAT純合突變占0.65%（6例）、235delC/299_300delAT復(fù)合雜合突變占3.27%（30例）、176del16/235delC復(fù)合雜合突變占1.42%（13例）。235delC雜合突變占7.19%（66例）299_300delAT雜合突變占2.18%（20例），攜帶GJB2基因單等位基因突變的患者占9.91%(91/918)。

表1 227例攜帶GJB2致病基因的患者檢測情況

SLC26A4基因突變結(jié)果見表2，純合突變占4.68%（43例），其中IVS7-2A＞G純合突變占4.03%（37例），2168A＞G純合突變占0.54%（5例），1174A＞T 純合突變占0.11%（1例）。復(fù)合雜合突變占2.72%（25例），其中IVS7-2A＞G/2168A＞G復(fù)合雜合突變占1.63%（15例），IVS7-2A＞G/1226G＞A復(fù)合雜合突變占0.33%（3例），IVS7-2A＞G/1229C＞T復(fù)合雜合突變和IVS7-2A＞G/1174A＞T復(fù)合雜合突變各占0.22%（2例），2168A＞G/1174A＞T復(fù)合雜合、1229C＞T/1174A＞T復(fù)合雜合、IVS7-2A＞G/IVS15+5G＞A復(fù)合雜合各占0.11%（1例），總確診率為7.41%(68/918)。攜帶SLC26A4基因單等位基因突變的患者占10.46%（96/918）。

表2 165例攜帶SLC26A4致病基因的患者檢測情況

聽障患者中發(fā)現(xiàn)線粒體均質(zhì)突變1555A＞G和1494C＞T分別為13人和2人，攜帶率1.63%；GJB3基因攜帶個體3人，攜帶率0.33%。雙基因攜帶者7人，攜帶率0.76%。通過對聽障人士進行15項遺傳性耳聾檢測，有501人顯示基因結(jié)果正常，未發(fā)現(xiàn)攜帶致聾基因，見表3。另外，線粒體12SrRNA基因檢測結(jié)果顯示，10歲及10歲以下線粒體12SrRNA致聾突變個體4人；11歲及22歲以下線粒體12SrRNA致聾突變個體11人。經(jīng)統(tǒng)計，在918例聽障患者中10歲及10歲以下患者638人，11歲到22歲患者280人。通過對比發(fā)現(xiàn)，在10歲及10歲以下患者中線粒體12SrRNA致聾突變占0.63%（4/638），遠低于11歲到22歲以下患者中3.93%（11/280的)線粒體12SrRNA致聾突變率。本結(jié)果說明山東省醫(yī)療機構(gòu)在兒童安全用藥方面取得顯著進步。

表3 918例聽障患者其他基因檢測情況

3 討論

遺傳性耳聾是最常見的遺傳缺陷性疾病。2006年第二次全國殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，我國有聽力殘疾2780萬人，每年以2～3萬人增長[2]。70%的遺傳性耳聾是以耳聾為唯一癥狀，不伴有其它臨床表現(xiàn)或疾病的非綜合征性耳聾[3]。在世界不同人種中GJB2基因都是最常見的致聾基因。GJB2基因突變導致的耳聾在遺傳性聾中占很大比例，約50%先天性聾與其相關(guān)[4]。SLC26A4基因是第二常見的致聾基因，與先天性顳骨畸形（前庭水管擴大或伴內(nèi)耳畸形）顯著相關(guān)，可通過影像學方法診斷[5]。線粒體DNA是唯一存在人細胞質(zhì)中的DNA，線粒體12 SrRNA基因突變?yōu)槟赶颠z傳，與藥物性聾相關(guān)，線粒體12 SrRNA基因的1555A＞G、1494C＞T為2個常見突變位點。Prezant等[6]證實攜帶有12 SrRNA基因1555A＞G的患者對氨基糖苷類抗生素具有較高的耳毒性敏感性，單次少量即可致重度聽力損失，故此類基因突變患者禁用氨基糖苷類藥物，以防“一針致聾”。

GJB3基因是1998年由夏家輝院士發(fā)現(xiàn)、定位并克隆成功的中國本土的第一個耳聾基因，主要提示遲發(fā)性高頻聽力下降[7]。

本研究應(yīng)用15項遺傳性耳聾篩查基因芯片，對山東918例持證聽障患者進行基因檢測，檢測到417人攜帶耳聾相關(guān)基因突變，其中GJB2基因突變227人，SLC26A4基因突變165人，線粒體12SrRNA基因均質(zhì)15例，GJB3基因突變3例，雙基因雜合突變7例，可見GJB2和SLC26A4這兩個基因是最主要的致病基因。藥物性耳聾12SrRNA基因攜帶者15人，攜帶率1.63%，此類人群完全是由不安全用藥造成的。因此通過基因檢測可以有效避免使用氨基糖甙類抗生素，防止耳聾的發(fā)生。

近年來，我國聽障發(fā)生率呈現(xiàn)逐年增長的趨勢[8]。因此，在聽障患者中開展耳聾基因檢測有急切的必要性。本項目檢測的意義是，（1）對聽障人群進行耳聾基因檢測是打破“聾生聾”現(xiàn)象的新型防聾手段。在我國聽障群人群中，聾-聾結(jié)合是最常見的婚配模式。通過對聽障人群進行前瞻性的耳聾基因檢測及遺傳咨詢，在合適的時間點干預(yù)此群體的婚育模式，可避免大部分聾-聾婚配家庭生育聾病后代，實現(xiàn)聽障殘疾發(fā)生的提前預(yù)防。（2）90%～95%的耳聾患兒父母為聽力正常者[9]，因此，擴大耳聾基因檢測的范圍，通過對健聽人群進行基因檢測，才能從根本上杜絕遺傳性耳聾的發(fā)生。

遺傳性耳聾的基因檢測可有效地明確病因，依據(jù)檢測結(jié)果，對不同病因、不同需求者提供準確而恰當?shù)倪z傳咨詢、生活指導和婚育指導、干預(yù)。整個過程對防止耳聾在家族中再次發(fā)生有積極意義，并可最終降低遺傳性耳聾的發(fā)生率。

本研究檢測結(jié)果表明，54.58%（501/918）的耳聾人沒有檢測出攜帶致聾基因。這與芯片法檢測的覆蓋位點只覆蓋中國人群中的熱點致病基因和突變位點有關(guān)。對于部分低發(fā)突變位點，尤其是相對罕見的錯義突變，無法推斷其與聾病發(fā)生的關(guān)系[10]。隨著耳聾基因檢測的深入或選擇更加全面的檢測方法，將有利于明確聽障人士遺傳學病因。如果將新的基因及突變類型納入檢測范圍，耳聾基因檢測的陽性率將大幅度提高，并為遺傳咨詢提供更詳實的依據(jù)。

因此，通過對聽障人群和普通人群中遺傳性耳聾相應(yīng)的知識進行普及、宣教，并隨著醫(yī)療水平的提高，逐漸地擴大耳聾基因檢測的范圍，經(jīng)過一兩代人的干預(yù)，可逐步降低耳聾基因在人群中的攜帶比例，降低遺傳性耳聾的發(fā)病率。