蒙藥成分體內(nèi)分析研究進(jìn)展

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(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

體內(nèi)藥物分析是由藥物分析學(xué)派生出來(lái)的一門(mén)新興學(xué)科，主要研究生物機(jī)體內(nèi)藥物及其代謝產(chǎn)物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量的變化規(guī)律[1,2]；而蒙藥成分體內(nèi)分析系以體內(nèi)藥物分析為基礎(chǔ)，綜合應(yīng)用生物學(xué)、化學(xué)、蒙醫(yī)藥學(xué)的理論、方法和技術(shù)，研究并闡明蒙藥有效成分的體內(nèi)過(guò)程，特別是其體內(nèi)的代謝方式和代謝產(chǎn)物，分析探討蒙藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，保證臨床用藥的安全、有效、可控。因此，本研究將從蒙藥成分體內(nèi)分析的研究意義、研究方法及現(xiàn)代研究進(jìn)展等三個(gè)方面進(jìn)行闡述。

1 蒙藥成分體內(nèi)分析的研究意義

1.1 有助于闡明蒙藥體內(nèi)物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制

眾所周知，蒙藥的藥效作用是蒙藥成分與機(jī)體相互作用的結(jié)果，眾多成分只有被吸收入血后才能產(chǎn)生藥效，根據(jù)這一觀點(diǎn)，給藥后血液中所含有的成分才是蒙藥體內(nèi)直接作用物質(zhì)，因此蒙藥有效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制的研究需要基于血清藥物化學(xué)與血清藥理學(xué)[3，4]。血清藥物化學(xué)與血清藥理學(xué)為蒙藥成分體內(nèi)分析研究提供了有效手段，如采用蒙藥成分體內(nèi)分析研究，可揭示給藥后血清中的移行成分，并通過(guò)建立蒙藥血清化學(xué)動(dòng)態(tài)圖譜來(lái)反映蒙藥成分群在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化，可有助于蒙藥血清藥物化學(xué)研究蒙藥中具有生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ)[5]。對(duì)含藥血清進(jìn)行藥效觀察，目前可采用器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)和基因表達(dá)等方法，以探究蒙藥可能的作用機(jī)制[6]。

1.2 新藥發(fā)現(xiàn)、設(shè)計(jì)及研發(fā)的新途徑

蒙藥在體內(nèi)的運(yùn)行過(guò)程包括吸收、分布、代謝、排泄，并在此過(guò)程中可能產(chǎn)生毒性。在蒙藥成分體內(nèi)分析過(guò)程中，人或動(dòng)物肝臟及消化道含有各種藥物代謝酶，這些酶對(duì)口服吸收的蒙藥成分進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，有些成分會(huì)導(dǎo)致新藥結(jié)構(gòu)失效，有些成分會(huì)產(chǎn)生毒性。另外通過(guò)蒙藥成分體內(nèi)分析研究，若發(fā)現(xiàn)不良的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)也可導(dǎo)致新藥研發(fā)失敗。綜上所述，新藥的合理設(shè)計(jì)與開(kāi)發(fā)，應(yīng)該充分考慮蒙藥體內(nèi)分析過(guò)程中的代謝途徑及相關(guān)代謝特征[7]。

1.3 藥物評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容

要確保蒙藥臨床應(yīng)用安全、合理、有效，首先要保證蒙藥的質(zhì)量，且要對(duì)蒙藥進(jìn)行全面的質(zhì)量控制。通過(guò)蒙藥成分體內(nèi)分析，加強(qiáng)蒙藥成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究、安全性評(píng)價(jià)及生物利用度研究，以了解蒙藥成分結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、劑型及生產(chǎn)工藝與蒙藥療效、血藥濃度、藥理作用、體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化等的關(guān)系，這些研究已成為評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要內(nèi)容[8]。

2 蒙藥成分體內(nèi)分析的研究方法

2.1 體內(nèi)樣品的采集與前處理

目前蒙藥成分體內(nèi)分析所要采集的樣品一般為血液和尿液，除此以外，還可能采集唾液、乳汁、腦脊液等。有時(shí)，可能會(huì)測(cè)定體內(nèi)任意組織或器官中藥物濃度。如今，一般的做法是在給藥一定時(shí)間后處死動(dòng)物，通過(guò)制備組織勻漿等方法進(jìn)行測(cè)定。近年來(lái)，出現(xiàn)了運(yùn)用微透析技術(shù)采集樣品，該技術(shù)可應(yīng)用于任何組織和器官，對(duì)組織無(wú)明顯的傷害，且可在活體、自由活動(dòng)的狀態(tài)下采集樣品，可以在非麻醉狀態(tài)下研究動(dòng)物體內(nèi)各種微環(huán)境的變化[9]。體內(nèi)樣品的前處理涉及到很多方面，包括除蛋白、樣品的分離純化、藥物的游離富集等。常用的技術(shù)方法有蛋白質(zhì)沉淀法、有機(jī)消解法、液-液萃取法、固相萃取法、自動(dòng)化SPE技術(shù)、固相微萃取技術(shù)、微透析技術(shù)等。其中，在諸多體內(nèi)分析研究工作中，血漿或其他組織樣品用得最多的前處理法就是除蛋白法及固相萃取法，本研究不再對(duì)其他方法進(jìn)行過(guò)多論述[10]。

2.2 蒙藥成分體內(nèi)分析技術(shù)

蒙藥成分體內(nèi)分析是要測(cè)定復(fù)雜生物樣品中的藥物成分，通常含量均較低。因此，需要選擇高靈敏度、高選擇性的分析方法[11]。色譜技術(shù)一直是蒙藥成分體內(nèi)分析技術(shù)中的強(qiáng)有力手段。目前，最新研究進(jìn)展主要集中在柱切換技術(shù)、手性色譜技術(shù)、高效毛細(xì)管電泳、高效液相色譜和色譜聯(lián)用技術(shù)等。其中在蒙藥成分體內(nèi)分析技術(shù)中，最為常用的是高效液相色譜和色譜聯(lián)用技術(shù)。

2.3 蒙藥成分體內(nèi)分析方法的建立和評(píng)價(jià)

2.3.1蒙藥成分體內(nèi)分析方法的建立 蒙藥成分體內(nèi)分析方法的建立，首先要確定測(cè)定目的，結(jié)合藥物成分的結(jié)構(gòu)、理化特征和體內(nèi)存在狀態(tài)，參考相關(guān)文獻(xiàn)，擬定方法，然后進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)，以選擇最合適的實(shí)驗(yàn)條件，驗(yàn)證分析方法是否適應(yīng)實(shí)際樣品的測(cè)定。篩選分析方法主要包括檢測(cè)條件和分離條件的篩選。確定檢測(cè)條件和分離條件后，蒙藥成分體內(nèi)分析的一般步驟為以純品進(jìn)行測(cè)定、以處理過(guò)的空白樣品進(jìn)行測(cè)定、回收率測(cè)定、體內(nèi)實(shí)際樣品的測(cè)定等。

2.3.2蒙藥成分體內(nèi)分析方法的評(píng)價(jià) 建立蒙藥成分體內(nèi)分析方法后，為了驗(yàn)證方法的可行性和可靠性，需要使用技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行方法驗(yàn)證。這些技術(shù)指標(biāo)包括：標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度、穩(wěn)定性等。標(biāo)準(zhǔn)曲線是指生物樣品中所測(cè)定成分的濃度與響應(yīng)值的相關(guān)性，用回歸方程來(lái)評(píng)價(jià)。在蒙藥成分體內(nèi)分析過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍應(yīng)能覆蓋全部待測(cè)樣品中蒙藥成分的濃度。準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)得的生物樣品中待測(cè)成分的濃度與其真實(shí)濃度的接近程度，分為絕對(duì)回收率和方法回收率。精密度系每次測(cè)定結(jié)果與多次測(cè)定的平均值的偏離程度，表示該方法的重復(fù)性。精密度可用重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性來(lái)表示。靈敏度是指一種分析方法可以檢測(cè)出的有關(guān)化合物的最小量，常用檢測(cè)限、定量限、最低檢測(cè)濃度來(lái)表示。在蒙藥成分分析中所需要測(cè)定的樣品例數(shù)居多，通常需要幾個(gè)工作日進(jìn)行分析。因此生物樣品和前處理后的溶液穩(wěn)定性就尤為重要，具體方法中有室溫和冷凍穩(wěn)定性考察。

3 蒙藥成分體內(nèi)分析研究進(jìn)展

董玉、薩礎(chǔ)拉等[12]制備類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，灌胃蒙藥復(fù)方森登-4及其各單味藥有效組分，分離制備含藥血清，建立蒙藥復(fù)方森登-4體外及含藥血清HPLC特征圖譜，分析蒙藥復(fù)方森登-4、各單味藥體外及其大鼠含藥血清特征圖譜，比對(duì)、歸屬并鑒定出了蒙藥復(fù)方森登-4體外化學(xué)成分及口服蒙藥復(fù)方森登-4后的大鼠吸收入血成分，共發(fā)現(xiàn)了47個(gè)峰。包明蘭、巴根那等[13]通過(guò)血清藥物化學(xué)方法，追蹤觀察單味藥、藥對(duì)及全方中入血指標(biāo)性化學(xué)成分梔子苷在急性肝損傷大鼠體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化，揭示梔子單味藥在地格達(dá)-4味湯中的作用和地位，并初步探討地格達(dá)-4味湯保肝效應(yīng)的有效成分。結(jié)果表明梔子與肋柱花藥對(duì)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)血中梔子苷含量均高于單味梔子和全方，且地格達(dá)-4味湯全方相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)血中梔子苷含量均低于單味梔子及藥對(duì)。巴根那等[14]以地格達(dá)-4味湯水提物為示例藥物，以D-GlaN致急性肝損傷大鼠為研究對(duì)象，應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用儀和核磁共振儀對(duì)急性肝損傷大鼠灌胃給藥地格達(dá)-4味湯后的血清中移行成分進(jìn)行LC-MSDTrap分析，結(jié)果表明灌胃給藥地格達(dá)-4味湯后，在以D-GlaN致急性肝損傷大鼠血清中共檢測(cè)到9個(gè)移行成分，其中4個(gè)移行成分為地格達(dá)-4味湯原型成分，即4-O-β-glucopyranosylacetophenone、草夾竹桃苷、獐牙菜苦苷、Sweroside，5個(gè)移行成分為代謝產(chǎn)物。雷露靜、王煥云等[15]基于血清藥物化學(xué)理念，建立了三子散含藥血清指紋圖譜，分析血中移行成分，為三子散藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究及質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)，結(jié)果建立三子散含藥血清指紋圖譜，指認(rèn)20個(gè)共有峰并確認(rèn)了其中5個(gè)成分。肖云峰、王玉華等[16]對(duì)牦牛心臟配伍和家豬心臟配伍八味沉香散的丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較研究，結(jié)果表明，在兩種不同動(dòng)物心臟配伍的八味沉香散中丁香酚代謝情況不相同，配伍牦牛心臟組方的代謝較好，其最大峰質(zhì)量濃度更高、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)速率更快、吸收進(jìn)入血液循環(huán)的總量更多。歐陽(yáng)輝、楊世林等[17]研究蒙藥藍(lán)盆花在大鼠體內(nèi)的主要藥效成分及其代謝產(chǎn)物，建立了大鼠灌胃藍(lán)盆花提取物后尿液、糞便和血漿中藍(lán)盆花活性物質(zhì)及其代謝物的鑒定方法，共鑒定出28個(gè)效應(yīng)成分和31個(gè)代謝產(chǎn)物，表明藍(lán)盆花黃酮類化合物代謝，主要途徑為氧化、硫酸化、甲基化、葡萄糖醛酸化等。