探討B(tài)RAF基因V600E突變檢測在甲狀腺乳頭狀癌術(shù)前診斷中的臨床價值

王新玲

南京市中醫(yī)院，江蘇 南京 210000

近年來甲狀腺癌發(fā)病明顯增加，主要由甲狀腺乳頭狀癌患者增加引起[1]。甲狀腺的惡性腫瘤被分為以下類型[2]：甲狀腺乳頭狀癌 （PTC）、甲狀腺濾泡癌（FTC）、低分化癌（PDC）和甲狀腺未分化癌（UDC），其中甲狀腺乳頭狀癌占甲狀腺惡性腫瘤的65%-80%，因此術(shù)前采用有效手段提高甲狀腺乳頭狀癌的診出率有重要意義。BRAF基因是一種原癌基因，BRAF V600E突變能夠調(diào)控細(xì)胞無限生長獲得惡性增殖的作用，近年來學(xué)者發(fā)現(xiàn)BRAF V600E突變與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病密切相關(guān)[3]。目前甲狀腺乳頭狀癌的術(shù)前診斷主要靠細(xì)針穿刺涂片細(xì)胞學(xué)診斷，往往存在組織不足及結(jié)果不確定的情況，本研究引入BRAF V600E基因檢測與之對比。分析檢測結(jié)果的差異性，探討兩者在甲狀腺乳頭狀癌術(shù)前診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018-2019年收治的90例甲狀腺結(jié)節(jié)穿刺患者。入選標(biāo)準(zhǔn)：影像學(xué)發(fā)現(xiàn)患者甲狀腺結(jié)節(jié)臨床懷疑甲狀腺癌可能，進(jìn)行細(xì)針穿刺，留取穿刺液進(jìn)行BRAF基因V600E檢測，同時涂片進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。其中男25例，女65例。年齡在18-72歲之間，平均年齡（48.47±3.24）歲。

1.2 方法 熒光定量PCR反應(yīng)：獲取患者穿刺后沖洗液，使用專用DNA提取試劑盒（采購自廈門艾德）提取穿刺液中的DNA，通過人類BRAF基因V600E突變試劑盒（購自廈門艾德），使用熒光定量PCR的方法對穿刺液進(jìn)行基因突變檢測。同時穿刺細(xì)胞進(jìn)行涂片，HE染色，由兩名主治以上病理科醫(yī)生進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。對比兩組患者檢測、診斷的結(jié)果。

1.3 結(jié)果判讀 熒光PCR結(jié)果判讀：待測樣品內(nèi)控基因HEX信號應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增曲線，且按照產(chǎn)品說明書Ct值位于13-21區(qū)間內(nèi)，同時若樣本待測基因有擴(kuò)增曲線出現(xiàn)，且突變信號的Ct值＜28，檢測樣本判定為基因突變陽性。內(nèi)控基因無擴(kuò)增，檢測無效，內(nèi)控基因有擴(kuò)增，而待測樣本目標(biāo)基因無擴(kuò)增則判讀為突變陰性。

細(xì)胞學(xué)判讀，細(xì)胞學(xué)涂片HE染色，兩位專家分別讀片后交流，形成統(tǒng)一意見后，甲狀腺乳頭狀癌包括可疑者以陽性計入統(tǒng)計學(xué)樣本，其他良性結(jié)節(jié)、橋本氏病等計入陰性結(jié)果。其他類型癌已經(jīng)從總體樣本中剔除，不計入統(tǒng)計。

2 結(jié)果

BRAF基因V600E突變陽性與細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷為甲狀腺乳頭狀癌的總體符合率為86.7%，雖然采取spearman correlation統(tǒng)計學(xué)方法兩種術(shù)前篩選方案并無統(tǒng)計學(xué)差異，但對臨床17例表現(xiàn)為BRAF V600E突變而細(xì)胞學(xué)診斷為良性或者懷疑良性的患者進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該部分患者多為穿刺細(xì)胞量少不資診斷，或者術(shù)后發(fā)現(xiàn)微小乳頭狀癌。這說明該基因的檢測對甲狀腺乳頭狀瘤患者的術(shù)前確診具有重要的臨床價值。見表1。

表1 BRAF基因V600E突變陽性與細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷為甲狀腺乳頭狀癌

3 討論

近年來甲狀腺癌的發(fā)病率逐年增高，而甲狀腺乳頭狀癌作為內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤中最常見的病理類型，甲狀腺癌總體發(fā)病率的80%以上。傳統(tǒng)的術(shù)前細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷對甲狀腺乳頭狀癌的確診具有重要的意義，但是由于存在微小乳頭癌及穿刺獲取細(xì)胞少造成診斷困難部分患者不能夠明確診斷，導(dǎo)致患者面臨重新穿刺取樣風(fēng)險的臨床現(xiàn)實情況。

在該組樣本中BRAF V600E在甲狀腺乳頭狀癌患者中的突變比例達(dá)90%，與細(xì)胞學(xué)診斷在統(tǒng)計學(xué)雖未體現(xiàn)出明顯差異，但是由于細(xì)胞學(xué)漏檢樣本的存在，該位點的突變檢測在術(shù)前患者確診中起到了很好的補(bǔ)充作用。減小了實際臨床細(xì)胞量少細(xì)胞學(xué)診斷壓力大的問題，同時能夠有效避免了由于細(xì)胞量少患者需要重新穿刺取樣的風(fēng)險及相應(yīng)帶來的醫(yī)療資源浪費。因此我們認(rèn)為BRAF V600E突變檢測具有重要的臨床應(yīng)用價值。