秦 娜,柴 磊,寇秋霜,馬超越,關(guān)婷婷
(1.焦作市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心,河南 焦作 454003;2.焦作市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 焦作 454003)
長期以來,沙門氏菌始終是一項世界性問題,尤其在畜產(chǎn)品中更為常見,由其引發(fā)的食物中毒概率較高,對人體生命安全構(gòu)成嚴重威脅。對此,應(yīng)對此類細菌的危害程度進行分析,并采取積極有效的檢測方法。
據(jù)調(diào)查,自從20世紀80年代后,世界范圍內(nèi)感染沙門氏菌的人數(shù)不斷增加,尤其是我國的內(nèi)陸地區(qū),因此類病菌引發(fā)的食物中毒已經(jīng)位居榜首。據(jù)統(tǒng)計,我國全部類型的細菌中毒中,因沙門氏菌引發(fā)的比例為70~80%,而在引發(fā)此類病菌的食品中,有超過90%為肉類食品。此類食品中的營養(yǎng)成分較為豐富,可為沙門氏菌的寄生和繁殖提供有利環(huán)境,當(dāng)人體內(nèi)攝入此類病菌含量超過(105~106個/g)時,便會引發(fā)細菌性感染,在毒素的影響下導(dǎo)致食物中毒。
由沙門氏菌引發(fā)的疾病主要為傷寒與急性腸胃炎,其中,鼠傷寒、豬霍亂、腸炎沙門氏菌君屬于污染動物性產(chǎn)品,成為人類食物中毒的主要誘因。此類細菌的來源較為廣泛,以患病人與動物為主,通過糞便、尿液、乳汁等對飼料、水源等造成污染,尤其是水源與飼料污染,屬于此類病菌傳播的主要載體。據(jù)調(diào)查,多種類型的飼料中均存在不同程度的沙門氏菌,特別是魚粉等動物性飼料,內(nèi)含此類細菌的數(shù)量更多,應(yīng)引起重視。
沙門氏菌具有較強的傳染性,如雞白痢、豬霍亂等。通常情況下,畜禽腸道的含菌量較多,當(dāng)動物患有疾病后,常常出現(xiàn)衰弱、營養(yǎng)不良等情況,自身的抵抗力下降,腸道內(nèi)的沙門氏菌很容易經(jīng)過淋巴結(jié)進入血液之中,導(dǎo)致動物全身感染此類細菌,嚴重的情況下甚至?xí)?dǎo)致死亡[1]。
沙門氏菌的類型較多,目前在世界范圍內(nèi)已知的血清型有2000余個,我國當(dāng)前發(fā)現(xiàn)200余個。在科技飛速發(fā)展之下,人們已經(jīng)研制出多種便捷的檢測方式,在畜產(chǎn)品安全檢測中得到廣泛應(yīng)用。
經(jīng)過細致的篩選,將大部分非沙門氏菌進行剔除,對此類細菌進行初步鑒定。然后,從每種分離皿培養(yǎng)基中選出5個較為相似的菌落,在平皿中進行劃線培養(yǎng),培養(yǎng)溫度設(shè)置為36±1℃,共計培養(yǎng)18~24h,采用純培養(yǎng)物進行生化鑒定。
(1)三糖鐵培養(yǎng)基:培養(yǎng)物斜面顏色泛紅,低端呈現(xiàn)出黃色,有微微氣味,形成硫化氫。當(dāng)分離到乳糖陽性沙門菌時,三糖鐵的斜面顏色變黃。
(2)懶氨酸脫烴反應(yīng):將培養(yǎng)物接種完畢后放入液體之中,待其外表呈現(xiàn)紫色后,說明為陽性反應(yīng)。
(3)尿素酶反應(yīng):如若反應(yīng)為陽性,說明尿素中氨的釋放速度較快,使原本的玫紅色朝著桃紅色轉(zhuǎn)變,然后再變?yōu)樯罘凵?,上述反?yīng)通常在2~24h內(nèi)出現(xiàn)。
(4)V-P反應(yīng):選取0.2ml的培養(yǎng)物放入滅菌試管之中,將兩滴肌酸溶液加入其中,攪拌均勻后將a-奶粉乙醇溶液加入其中,劑量為三滴,充分融合后再將兩滴氫氧化鉀溶液加入其中,靜置15min后顏色為桃紅色,說明其為陽性。
噬菌體對細菌裂解具有一定促進作用,主要的診斷流程分為四步:一是將樣本以常規(guī)方式進行前增菌,在平皿中進行劃線接種,在37℃溫度下培養(yǎng)過夜;二是將可疑菌群放入到2ml的胨水管之中,每1ml含有的細菌數(shù)量在50~100萬個之間;三是在37℃下對營養(yǎng)脂平板進行烘烤,去除表面水分,當(dāng)平板上的菌體被烤干后,用滴管將噬菌體加入其中;四是對平板進行培養(yǎng)6h后觀察,根據(jù)噬菌體裂解情況得出檢測結(jié)果。
(1)核酸探針:現(xiàn)階段,沙門氏菌探針已經(jīng)對鼠傷寒菌株的染色體進行克隆,并將其應(yīng)用到食品安全檢測之中。早在20世紀80年代,核糖體核糖核酸探針便已經(jīng)被研發(fā)出來,在此基礎(chǔ)上,以靶序列為標準對異性微生物進行探測,為細菌分類提供新路徑。
(2)PCR技術(shù):該項技術(shù)具有方便快捷、敏感性強等特征,目前在微生物檢測中得到普及,特別對于困難細菌檢測來說,具有無可替代的優(yōu)勢和效果,可使細菌鑒定準確性得到顯著提升。
(3)噬菌體裂解:在對沙門氏菌快速檢驗過程中,對100個菌株進行裂解實驗,其中有30株細菌全部為陽性,剩余非此類細菌為陰性。實驗表明,沙門菌的裂解概率在95%~99.6%之間,誤差較低,檢測結(jié)果十分高效可靠。
綜上所述,沙門氏菌具有來源廣、傳染性強、易感染等特征,可對動物和人體健康構(gòu)成較大威脅,需要采取科學(xué)有效的措施進行解決,如生物化學(xué)鑒定實驗、腸桿菌噬菌體診斷、細胞分子生物學(xué)技術(shù)等,使此類細菌被有效識別和控制,保障畜產(chǎn)品安全,維護人類生命健康。