2012-2017年遼寧省豬流感血清學(xué)調(diào)查分析

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豬流感是由豬流感病毒(swine influenza virus, SIV)引起的豬的一種急性、熱性和高度接觸性的呼吸道傳染病，其臨床上以突發(fā)、高熱、流涕、咳嗽和呼吸困難為主要特征，發(fā)病率高、傳播迅速、死亡率較低[1]。另外，SIV可造成豬的免疫系統(tǒng)受損害，引起免疫抑制，進(jìn)而繼發(fā)或混合感染其它病毒、細(xì)菌病，使病情加重，造成養(yǎng)豬業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前，在世界范圍內(nèi)引起豬流感的主要有H1N1、H1N2和H3N2三種亞型SIV，我國流行的豬流感也以這三種為主[3-4]。由于豬呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)同時具有人流感和禽流感病毒的唾液酸受體，對禽流感和人流感病毒均易感，使其具備潛在的產(chǎn)生新型流感病毒的能力，因此被認(rèn)為是流感病毒的“混合器”[4]。SIV偶爾也能感染人類并導(dǎo)致人發(fā)病甚至死亡，歷史上人流感大爆發(fā)與SIV有著密不可分的聯(lián)系，如1957年、1968年和2009年爆發(fā)的人流感疫情均由豬身上產(chǎn)生的重組流感病毒引起[4]，因此豬作為流感病毒的中間宿主的作用不容忽視。尤其在2009年甲型H1N1流感暴發(fā)后，普遍認(rèn)識到SI是一種非常值得重視的人獸共患病，多個國家均加強了對SI的監(jiān)測。另外，近年來H7N9流感疫情頻發(fā)，有研究表明，該亞型流感病毒可能在哺乳動物間相互傳播[5-6]，從豬體內(nèi)分離到H7N2亞型流感病毒表明其它H7亞型流感病毒也可能通過豬進(jìn)行傳播[7]。因此，研究豬群中流感病毒的流行情況具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

為了解遼寧省近年來SI的流行情況，本研究采用血凝抑制試驗(HI)對2012年10月至2017年3月期間采自遼寧省規(guī)模豬場的2 161份豬血清樣品進(jìn)行了歐亞類禽型H1N1(EA H1N1)、2009甲型H1N1(pdm/09 H1N1)、H3N2 SIV和H7N9亞型SIV抗體監(jiān)測，為深入研究SI的發(fā)生及流行規(guī)律、進(jìn)而為遼寧省乃至全國SI的有效防控和流感疫情的預(yù)警預(yù)報提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1樣品 2012年10月至2017年3月期間冬春寒冷季節(jié)，在遼寧省84家不同規(guī)模豬場采集的豬血液樣品分離的血清共2 161份。

1.2主要試劑 類禽型H1N1(EA H1N1)、2009甲型H1N1(pdm/09 H1N1)、H3N2亞型SIV抗原及H7N9流感病毒抗原和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清均由哈爾濱獸醫(yī)研究所國家流感參考參考實驗室制備提供。

1.3SIV HI抗體檢測及結(jié)果判定 按照GB/T 27535-2011中[8]規(guī)定，采集3只無禽流感和新城疫等抗體的健康公雞紅細(xì)胞，制備0.5%的紅細(xì)胞懸液、處理血清樣品以祛除非特異性抑制因子、制備各亞型的4 HAU抗原，進(jìn)行EA H1N1、pdm/09 H1N1、 H3N2亞型SIV及H7N9 流感病毒HI抗體檢測。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)陰性對照孔血清滴度不大于2log2，陽性對照孔血清滴度誤差不超過1個滴度，試驗成立；HI血凝抑制價≤3log2判定HI試驗陰性；HI血凝抑制價等于4log2為可疑，需重復(fù)試驗；HI血凝抑制價≥5log2判為陽性。

2 結(jié) 果

2.12012-2017年期間遼寧省SIV抗體檢測結(jié)果 對2012年10月至2017年3月采自遼寧84個不同規(guī)模豬場的2 161份血清樣品的HI試驗結(jié)果顯示：2012-2017年期間，遼寧省規(guī)模豬場中存在EA H1N1、pdm/09 H1N1和H3N2亞型SIV感染，監(jiān)測SIV抗體陽性場為77個，豬場抗體陽性率達(dá)91.67%，3個亞型SIV抗體陽性數(shù)為1 081份，總體陽性率達(dá)50.02%，年平均抗體陽性率為36.36%～68.18%，表明遼寧省豬群SI感染十分普遍；2012-2017年間，EA H1N1 SIV 、pdm/09 H1N1和H3N2抗體陽性率分別為15.36%、34.48%和0.28%，抗體檢測結(jié)果表明，遼寧省豬群中以EA H1N1、pdm/09 H1N1亞型SIV感染為主。豬群中也曾發(fā)生過H3N2亞型SIV感染，但感染率很低，且自2014年以后未再檢測到該型SIV抗體；H7N9亞型SIV抗體則一直未檢測到；2012-2014年期間，遼寧省規(guī)模豬場中以EA H1N1 SIV感染占主導(dǎo)地位，抗體陽性率為29.00%～49.62%，2013年是EA H1N1 SIV感染的最高峰期(占49.62%)，2015-2016年期間EA H1N1 SIV 抗體陽性率明顯下降，2016年降至1.46%，但2017年EA H1N1 SIV 抗體陽性率又顯著上升至13.89%；而2012-2015年期間遼寧省規(guī)模豬場中pdm/09 H1N1 SIV抗體陽性率逐年升高，2015年達(dá)到最高值(占64.55%)，2015-2017年期間遼寧省規(guī)模豬場中SIV感染抗體轉(zhuǎn)變?yōu)橐?pdm/09 H1N1型SIV抗體為主(表1)；另外，在2015年3月份遼寧省本溪市和營口市各一個規(guī)模豬場采集的各30份豬血清樣品中，分別有4份和1份血清樣品中同時監(jiān)測到EA H1N1和pdm/09 H1N1亞型SIV抗體，SI EA H1N1+pdm/09 H1N1抗體陽性率為0.23%，表明豬只可能同時感染或先后感染過這兩種亞型SIV，這也為不同亞型同時存在于豬體內(nèi)進(jìn)而發(fā)生病毒基因重組或重配提供可能。

表1 2012-2017年遼寧省規(guī)模豬場不同亞型SIV抗體檢測結(jié)果
Tab.1 Serological survey of different subtypes of SIV in large-scale pig farms in Liaoning, 2012-2017

年份陽性場數(shù)/監(jiān)測場數(shù)EA H1N1陽性數(shù)/樣品數(shù)pdm/09 H1N1陽性數(shù)/樣品數(shù)H3N2陽性數(shù)/樣品數(shù)H7N9陽性數(shù)/樣品數(shù)20129/12(75.00%)67/231(29.00%)15/231(6.49%)2/231(0.87%)0/231(0)201313/13(100%)129/260(49.62%)33/260(12.69%)4/260(1.54%)0/260(0)201410/10(100%)85/200(42.50%)36/200(18.00%)0/200(0)0/200(0)201511/11(100%)12/330(3.64%)213/330(64.55%)0/330(0)0/330(0)201628/32(87.50%)14/960(1.46%)382/960(39.79%)0/960(0)0/960(0)20176/6(100%)25/180(13.89%)64/180(35.56%)0/180(0)0/180(0)總計77/84(91.67%)332/2161(15.36%)743/2161(34.38%)6/2161(0.28%)1081/2161(50.02%)

2.2遼寧不同市SIV 抗體檢測結(jié)果 對2012年10月至2017年3月調(diào)查的14個市不同規(guī)模豬場的血清學(xué)檢測結(jié)果分析表明，遼寧省所轄14個市規(guī)模豬場均存在不同嚴(yán)重程度的SIV感染，SIV抗體總的陽性率從11.43%～76.74%，其中沈陽、大連、本溪、丹東、阜新、遼陽、盤錦、葫蘆島等市SIV抗體陽性率相對較高，均超過50%(表2)。

表2 2012-2017年遼寧不同地區(qū)規(guī)模豬場SIV抗體檢測結(jié)果
Tab.2 Antibodies against SIV in fourteen different regions in Liaoning, 2012-2017

市EA H1N1陽性數(shù)/樣品數(shù)pdm/09 H1N1陽性數(shù)/樣品數(shù)H3N2陽性數(shù)/樣品數(shù)H7N9陽性數(shù)/樣品數(shù)總計陽性數(shù)/樣品數(shù)沈陽6/180(3.33%)97/180(53.89%)4/180(2.22%)0/180(0)107/180(59.44%)大連44/180(24.44%)52/180(28.89%)0/180(0)0/180 (0)96/180(53.33%)鞍山1/152(0.66%)46/152(30.26%)0/152(0)0/152(0)47/152(30.92%)撫順8/150(5.33%)45/150(30.00%)0/150(0)0/150(0)53/150(35.33%)本溪20/153(13.07%)79/153(51.64%)0/153(0)0/153(0)99/153(64.71%)丹東7/120(5.83%)76/120(63.33%)0/120(0)0/120(0)83/120(69.17%)錦州7/150(4.67%)45/150(30.00%)0/150(0)0/150(0)52/150(34.67%)營口15/148(10.14%)30/148(20.27%)0/148(0)0/148(0)45/148(30.41%)阜新53/175(30.29%)48/175(27.43%)2/175(1.14%)0/175(0)103/175(58.86%)遼陽34/118(28.81%)35/118(29.66%)0/118(0)0/118(0)69/118(58.47%)鐵嶺24/144(16.67%)27/144(18.75%)0/144(0)0/144(0)51/144(35.42%)朝陽10/140(7.14%)6/140(4.28%)0/140(0)0/140(0)16/140(11.43%)盤錦66/172(38.37%)66/172(38.37%)0/172(0)0/172(0)132/172(76.74%)葫蘆島37/179(20.67%)91/179(50.84%)0/179(0)0/179(0)128/179(71.51%)

2.3SIV 抗體區(qū)域性分布情況 遼寧省所轄14個市按照區(qū)域分布可劃分5大區(qū)域：遼東地區(qū)、遼南地區(qū)、遼西地區(qū)、遼北地區(qū)和遼中地區(qū)。遼東地區(qū)包括撫順、本溪和丹東；遼南地區(qū)包括大連、營口和盤錦；遼西地區(qū)包括錦州、朝陽和葫蘆島；遼北地區(qū)包括沈陽、阜新和鐵嶺；遼中地區(qū)包括鞍山和遼陽。遼寧省畜牧業(yè)發(fā)展存著區(qū)域性差異，生豬養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)主要在遼西和遼北地區(qū)，對14個市SIV抗體檢測結(jié)果按照區(qū)域性分布進(jìn)行卡方統(tǒng)計分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3個亞型SIV總的抗體陽性率存在區(qū)域性差異，遼東、遼南和遼北地區(qū)陽性率較高且基本持平，陽性率為54.60%～55.56%；遼西和遼中地區(qū)陽性率相對較低且基本持平，陽性率分別為41.79%和42.96%；H3N2亞型SIV抗體僅在2012-2013年遼北地區(qū)檢測到，且陽性率極低(表3)。

表3 2012-2017年遼寧省5個區(qū)域規(guī)模豬場SIV抗體檢測結(jié)果
Tab.3 Antibodies against SIV in the five regions of Liaoning Province, 2012-2017

區(qū)域EA H1N1陽性數(shù)/樣品數(shù)pdm/09 H1N1陽性數(shù)/樣品數(shù)H3N2陽性數(shù)/樣品數(shù)H7N9陽性數(shù)/樣品數(shù)總陽性數(shù)/樣品數(shù)遼東35/423(8.27%)200/423(47.28%)0/423(0)0/423(0)235/423(55.56%)遼南125/500(25.00%)148/500(29.60%)0/500(0)0/500 (0)273/500(54.60%)遼西54/469(11.51%)142/469(30.28%)0/469(0)0/469(0)196/469(41.79%)遼北83/499(16.63%)172/473(36.36%)6/473(1.27%)0/473(0)172/473(55.18%)遼中35/270(12.96%)81/270(30.00%)0/270(0)0/270(0)116/270(42.96%)總計332/2161(15.36%)743/2161(34.38%)6/2161(0.28%)0/179(0)1081/2161(50.02%)

3 討 論

自1918年SI首次在北美豬群中被報道以來，至今已整整100年，目前在全球范圍內(nèi)廣泛流行，對世界經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重的損失。近年來國內(nèi)研究者逐漸重視對SI的系統(tǒng)監(jiān)測研究，如劉麗萍等[9]對2012-2013年我國養(yǎng)豬重點省份的SIV抗體監(jiān)測表明，豬群EA H1N1、pdm/09 H1N1和H3N2亞型SIV抗體陽性率分別為55.52%、13.92%和2.00%；隋金鈺等[10]分別對2013年福建等9個省份和2014年廣東和湖南兩省豬群進(jìn)行EA H1N1、pdm/09 H1N1、H3N2 SIV、H5N1、H9N2 AIV及H7N9 流感病毒抗體檢測，結(jié)果顯示：2013年抗體陽性率分別為49.73%、11.87%、1.71%、0%、0%、1.36%，2014年分別為48.52%、12.10%、1.04%、0%、0%、2.05%。陳櫻等[11]對2009-2013年廣西地區(qū)進(jìn)行SIV抗體監(jiān)測，結(jié)果EA H1N1抗體陽性率為23.50%～25.30%、H3N2抗體陽性率為20.51%～29.49%；王剛等[12]對2009-2014年西藏地區(qū)進(jìn)行SIV抗體檢測，結(jié)果H1N1、H3N2抗體陽性率分別達(dá)71%、27%，SIV H1N1+H3N2抗體陽性率達(dá)19%；何淑儀等[13]對2013-2014年華南地區(qū)5省進(jìn)行SIV抗體檢測，結(jié)果H1N1、H3N2和pdm09/H1N1抗體陽性率分別為22.51%、32.97%和26.49%。以上監(jiān)測結(jié)果表明，我國不同省份豬群中SIV感染亞型存在差異，各亞型抗體陽性率差異也較大，但總體上以感染H1N1、H3N2亞型SIV為主。目前，由于我國絕大部分豬群中未使用SI疫苗，因此，血清學(xué)抗體調(diào)查結(jié)果在一定程度上能夠較真實反映豬群中流感病毒感染的情況。

本研究采用HI方法，對2012年10月至2017年3月冬春寒冷季節(jié)遼寧省不同地區(qū)規(guī)模豬場采集的血清樣品進(jìn)行EA H1N1、pdm/09 H1N1、H3N2 SIV和H7N9流感病毒抗體檢測，結(jié)果表明，遼寧省規(guī)模豬場中SIV抗體陽性率較高，且不同階段有顯著的差異。2012-2014年豬群中以EA H1N1亞型SIV抗體陽性為主，自2015年起這種感染情況發(fā)生了明顯轉(zhuǎn)變，pdm/09 H1N1替代EA H1N1亞型SIV成為遼寧省豬群中感染的優(yōu)勢毒株；2012-2013年期間曾在遼北地區(qū)的3個豬場中監(jiān)測到H3N2亞型SIV抗體陽性，但個體陽性率很低，且自2014年起至今未監(jiān)測到；H7N9亞型流感病毒在遼寧省豬群中也未監(jiān)測到，表明遼寧省豬群中以感染EA H1N1亞型、pdm/09 H1N1亞型SIV為主，這也與本研究組近年來對遼寧省豬群中SI病原分離鑒定情況相印證；2013年以前，本研究在遼寧省分離鑒定的SIV均為EA H1N1亞型[14]，而2014年以后，分離到EA H1N1、pdm/09 H1N1、二重組及三重組H1N1亞型SIV(數(shù)據(jù)未發(fā)表)，并且在2015年監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)5份血清樣品中同時存在EA H1N1亞型和pdm/09 H1N1亞型SIV血清學(xué)抗體，表明遼寧省規(guī)模豬場中SIV流行情況變得更為復(fù)雜，多種亞型SIV感染共同存在，豬流感的防控已不容忽視。同時，根據(jù)本研究調(diào)查的結(jié)果也不能排除其它亞型SIV存在的可能，由于本研究調(diào)查的對象主要為規(guī)?；i場，一些小型豬場或養(yǎng)殖大戶不在調(diào)查范圍，調(diào)查的季節(jié)為冬春寒冷季節(jié)，未開展對夏秋兩季豬群中SIV感染情況調(diào)查，盡管SI的流行有明顯的季節(jié)性特點，但也有報道SI一年四季均可發(fā)生[15]。另外，本研究在采集樣本時未對豬群進(jìn)行不同群體、不同日齡段細(xì)分，然而，不同群體和日齡段的豬對SI的易感性和抗體水平可能存在一定差異，因此，本研究調(diào)查結(jié)果可能存在一定的局限性。

遼寧省是我國養(yǎng)豬大省，農(nóng)業(yè)部印發(fā)的我國第一個生豬生產(chǎn)指導(dǎo)性文件《全國生豬發(fā)生產(chǎn)發(fā)展規(guī)劃(2016-2020年)》明確將遼寧省劃定為“加快發(fā)展區(qū)”(14省市)之一，作為國家養(yǎng)殖區(qū)布局調(diào)整的轉(zhuǎn)移承接區(qū)，未來養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展?jié)摿薮?，集約化養(yǎng)殖程度會逐漸增高，跨省調(diào)運豬只及其產(chǎn)品也會變得頻繁，加上東北地區(qū)寒冷季節(jié)較長，均為流感病毒的重組變異和傳播提供了便利。因此，通過對遼寧省SIV感染情況的系統(tǒng)調(diào)查，摸清遼寧省豬流感感染與流行情況，為遼寧省規(guī)模豬場豬流感的有效防控提供科學(xué)依據(jù)，對保障遼寧省養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展意義重大，進(jìn)而對促進(jìn)國家按期完成生豬生產(chǎn)發(fā)展規(guī)劃奠定重要基礎(chǔ)。

利益沖突：無