重建人類免疫系統(tǒng)的人源化小鼠模型及其在血液系統(tǒng)疾病研究中的應(yīng)用*

龍 杰 楊志剛

(1. 廣東醫(yī)科大學(xué)，湛江 524023)(2. 廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，湛江 524001)(3.廣東省實驗動物監(jiān)測所，廣州 510663)(4.廣東醫(yī)科大學(xué)附屬湛江中心人民醫(yī)院，湛江 524045)

實驗動物學(xué)在醫(yī)學(xué)研究中發(fā)揮重要作用，實驗動物模型可以用于模擬人類疾病發(fā)病以及藥理學(xué)實驗研究。其中靈長類動物在遺傳學(xué)上與人類接近，曾在醫(yī)學(xué)研究中有著舉足輕重的地位，但由于靈長類動物價格昂貴及存在倫理學(xué)方面的限制，近年來逐漸減少在醫(yī)學(xué)研究上的應(yīng)用。小鼠作為實驗動物的歷史源遠(yuǎn)流長，但小鼠的遺傳學(xué)背景與人類相差較大，為解決該問題，研究人員將人類細(xì)胞或組織植入免疫缺陷小鼠體內(nèi)構(gòu)建免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型及人源化小鼠疾病模型，在這種人源化的小鼠動物模型中進(jìn)行的研究更能模擬人類免疫系統(tǒng)及人類疾病實際情況。

1 免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型的建立及優(yōu)化

1.1 人源造血干細(xì)胞來源的選擇

根據(jù)造血干細(xì)胞不同的起源部位，可分為胎肝造血干細(xì)胞、骨髓造血干細(xì)胞、粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)動員的外周血造血干細(xì)胞、臍帶血造血干細(xì)胞。其中，胎肝造血干細(xì)胞來源于胎兒，人類胎兒肝臟在妊娠第10周至第20周的大部分時間里是主要的造血器官。Kuchma等[1]在免疫表型的研究中，發(fā)現(xiàn)胎肝比臍帶血含有更豐富的人類造血干祖細(xì)胞。Roncarolo等[2]從胎肝中獲得的HSC免疫原性較弱，植入人類白細(xì)胞抗原(Human leukocyte antigen，HLA)不匹配的胎兒中也不會產(chǎn)生移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease，GVHD)。Lepus等[3]在幾個不同品系的免疫缺陷小鼠身上比較胎肝、臍帶血、成人外周血來源的造血干細(xì)胞的植入率，結(jié)果表明，胎肝來源的CD34+造血干細(xì)胞植入率最高。但胎肝來源于流產(chǎn)的胎兒，各項病原學(xué)陰性的流產(chǎn)胎兒的肝臟才成為收集的對象，另外，目前胎肝干細(xì)胞庫極少，并且，胎肝的應(yīng)用存在一些倫理相關(guān)的問題，使其在應(yīng)用上受到較大的限制。

與胎肝相比，臍帶血的來源更豐富、采集更方便，采集過程對母嬰均無危害，也不存在應(yīng)用胎肝造血干細(xì)胞所產(chǎn)生的倫理問題。臍血中T淋巴細(xì)胞數(shù)較少且較原始，使用HLA不匹配的臍帶血造血干細(xì)胞移植后GVHD發(fā)生率低[4]。這些優(yōu)點都是骨髓和外周血來源的造血干細(xì)胞所不具備的。

造血干細(xì)胞選擇時，還要考慮T細(xì)胞的植入有產(chǎn)生GVHD的風(fēng)險。但是，另一方面，適量的T細(xì)胞又具有促進(jìn)移植物植入的優(yōu)點，這在人類造血干細(xì)胞移植領(lǐng)域已經(jīng)得到了證實[5]。Hexner等[6]分別在等劑量臍帶血單個核細(xì)胞與去除T細(xì)胞的臍帶血單個核細(xì)胞中，加入了抗CD3/CD28單克隆抗體刺激T細(xì)胞增殖，然后注入NOD/SCID-β2m-/-小鼠體內(nèi)。結(jié)果表明，未去除T細(xì)胞組人源CD45+細(xì)胞的植入率明顯比第二組高(5.94%±1.65% VS 0.29%±0.79%)，證明了在小鼠體內(nèi)人源臍帶血中T細(xì)胞有克服免疫屏障促進(jìn)植入的作用。Hayakawa等[7]用CD34+分選的臍帶血單個核細(xì)胞與未分選的臍帶血單個核細(xì)胞分別經(jīng)白消安預(yù)處理后輸注入NSG(NOD/SCID/IL-2Rγnull)小鼠體內(nèi)比較，發(fā)現(xiàn)CD34+分選的臍帶血單個核細(xì)胞組植入率明顯高于其他組，且植入率長期維持在高水平狀態(tài)。所以，目前主要選擇臍帶血CD34+單個核細(xì)胞進(jìn)行人源化小鼠模型的研究。

1.2 免疫缺陷小鼠的選擇

小鼠的異種造血干細(xì)胞移植如同人類同種異基因造血干細(xì)胞移植一樣，供者干細(xì)胞的植入需克服受者的免疫屏障，而這些免疫屏障就是受者本身的免疫狀態(tài)，受者免疫缺陷程度越高，更利于供者的細(xì)胞植入[8]?；谏鲜隼碚摚嗽椿庖咝∈笸ǔ＿x擇免疫缺陷小鼠。

利用免疫缺陷小鼠進(jìn)行人源化小鼠的研究經(jīng)歷了幾個階段。最早發(fā)現(xiàn)的免疫缺陷小鼠是裸鼠，由于foxn1基因的缺陷導(dǎo)致該小鼠胸腺發(fā)育受損[9],從而沒有成熟T細(xì)胞產(chǎn)生導(dǎo)致該小鼠T細(xì)胞依賴的免疫排斥幾乎消失。但人源免疫細(xì)胞依然無法在該小鼠體內(nèi)生存[10]。

1983年，研究人員發(fā)現(xiàn)C.B-17純系小鼠16號染色體上的重癥聯(lián)合免疫缺陷(Severe combined immunodeficiency,SCID)基因發(fā)生隱性突變后,小鼠缺乏功能成熟的T和B淋巴細(xì)胞,由此得到了SCID小鼠[11]。1988年，Mccune等[12]用SCID小鼠植入人胎肝干細(xì)胞、胎胸腺、胎淋巴結(jié)，可使人源T細(xì)胞和B細(xì)胞重建。但由于SCID小鼠的免疫缺陷程度不高，體內(nèi)殘留較多NK細(xì)胞及部分T細(xì)胞和B細(xì)胞，人源免疫細(xì)胞重建水平不高。由于SCID小鼠對放射高度敏感，為降低放射敏感性，有學(xué)者通過敲除Rag1[13](Recombinant activating gene)或Rag2[14]基因產(chǎn)生Rag-/-小鼠。Rag1和Rag2基因在TCR的重排和抗體生成方面發(fā)揮重要作用，是T細(xì)胞和B細(xì)胞成熟所必需的基因，因此，Rag1-/-小鼠及Rag2-/-小鼠均缺乏功能成熟的T細(xì)胞和B細(xì)胞，但是也因它們的高NK細(xì)胞活性阻礙了人源細(xì)胞的植入[15-16]。

隨后通過NOD(Non-obese diabetic)背景小鼠與SCID小鼠回交得到免疫缺陷程度更高的NOD/SCID小鼠[17]。這種小鼠的特點除了T細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能喪失以外，還影響了部分NK細(xì)胞的功能，所以免疫缺陷程度比前述的小鼠更高。楊海燕等[18]利用臍帶血CD34+單個核細(xì)胞注入TBI預(yù)處理的NOD/SCID小鼠，在第8周行流式細(xì)胞術(shù)檢測，發(fā)現(xiàn)人源CD45+細(xì)胞植入達(dá)到(12.34 ±2.38)%，遠(yuǎn)高于Lewis等[19]定義的0.5%的植入標(biāo)準(zhǔn)。但NOD/SCID小鼠隨著年齡的增長，會出現(xiàn)“免疫滲漏”，即部分T和B細(xì)胞的功能恢復(fù)，且本身仍有NK細(xì)胞功能殘留，使得其植入效率不高。

在此基礎(chǔ)上，使NOD/SCID小鼠編碼白介素2受體γ鏈的基因發(fā)生無效突變，產(chǎn)生NSG[20](NOD/SCID/IL-2Rγnull)小鼠。因為該受體的γ鏈?zhǔn)前捉樗?、白介素4、白介素7、白介素9、白介素15、白介素21等細(xì)胞因子的共同受體，所以該基因的突變導(dǎo)致NK細(xì)胞成熟障礙和功能喪失，并且消除了T和B細(xì)胞的免疫滲漏現(xiàn)象，使得小鼠的免疫缺陷程度更高。McDermott等[21]比較了NSG小鼠與NOD/SCID等品系的小鼠外周組織的人源細(xì)胞植入率，結(jié)果表明，NSG小鼠和NOG(NOD/Shi-scid /IL-2Rγnull)小鼠明顯比NOD/SCID等品系小鼠的人源細(xì)胞植入率要高，而NSG小鼠在骨髓中人源細(xì)胞的植入率比其它品系的小鼠要高，雌性尤甚，所以NSG小鼠是目前人源化小鼠模型的最佳受鼠。

1.3 預(yù)處理方式的選擇

預(yù)處理是輸入人源細(xì)胞前的附加處理方式，目的是：1.產(chǎn)生骨髓抑制從而騰空骨髓龕及負(fù)反饋刺激造血再生，促進(jìn)造血干細(xì)胞歸巢骨髓龕并自我更新、增殖及分化[22]；2.產(chǎn)生免疫抑制預(yù)防移植物被排斥，這些作用都有利于人源細(xì)胞植入。由于目前接受移植的小鼠主要為NOD/SCID小鼠等免疫缺陷鼠，本身由于缺乏T細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞已產(chǎn)生明顯免疫抑制，所以預(yù)處理的策略主要是使小鼠產(chǎn)生骨髓抑制[23]。

傳統(tǒng)小鼠移植的預(yù)處理方式有全身射線輻照(Total body irradiation， TBI)等，預(yù)處理后，人源細(xì)胞植入率比沒有接受預(yù)處理的組別要高。其主要原因是使受者體內(nèi)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(Stromal cell-derived factor-1，SDF-1)、干細(xì)胞因子(Stem cell factor,SCF)等細(xì)胞因子水平的升高，SDF-1[24]是C-X-C 趨化因子受體4[25](C-X-C chemokine receptor type 4, CXCR4)的配體，在人鼠之間可以發(fā)生交叉反應(yīng)[26]，而人源造血干細(xì)胞表面表達(dá)CXCR4分子，通過CXCR4—SDF-1軸可以使經(jīng)尾靜脈注入的人源造血干細(xì)胞定向歸巢到骨髓里，人源造血干細(xì)胞只有歸巢到骨髓環(huán)境里才能自我更新、增殖及定向分化。SCF[27]是干細(xì)胞生長因子，主要生理作用是促進(jìn)早期造血前體細(xì)胞的增殖和分化，Zheng 等[28]利用重組人SCF與臍帶血CD34+細(xì)胞體外培養(yǎng)植入NOD/SCID小鼠體內(nèi)的植入率明顯比未經(jīng)處理的臍帶血CD34+細(xì)胞的組別要高。這些細(xì)胞因子、趨化因子的水平的上升可以使外源性人源細(xì)胞的植入率增高。傳統(tǒng)的以TBI為主要手段的預(yù)處理策略的弊端是小鼠的死亡率較高，小鼠的生存條件要求苛刻，需嚴(yán)格的無菌環(huán)境和配備獨立通氣籠(Individual ventilated Cage，IVC)，TBI設(shè)備需遠(yuǎn)離小鼠飼養(yǎng)的場所等，這些都使得人源化小鼠模型應(yīng)用受到限制。

白消安是一種烷化劑，較早前已應(yīng)用在人類骨髓移植上，它的特點是強(qiáng)烈的骨髓抑制作用但免疫抑制作用較弱[29]，其作用與TBI相似，但高劑量的TBI常導(dǎo)致高死亡率，而低劑量的TBI導(dǎo)致人源細(xì)胞植入率不高。Robert-Richard 等[23]在NOD/SCID小鼠回輸人源造血干細(xì)胞前分別用白消安及TBI作預(yù)處理的比較，結(jié)果表明SRC(scid repopulating cells)數(shù)目沒顯著差異。Choi 等[30]發(fā)現(xiàn)接受2.4Gy劑量TBI的NSG小鼠組第24周的存活率只有33%，而接受20 mg/kg 和30 mg/kg單劑量的白消安的NSG小鼠組第24周的存活率是100%。接受30 mg/kg單劑量的白消安的NSG小鼠組重建人源B細(xì)胞亞群的程度比接受2.4Gy劑量TBI的NSG小鼠組高，而接受40 mg/kg單劑量的白消安的NSG小鼠組在7周內(nèi)全部死亡。也有研究報道相隔24 h給予兩次25 mg/kg劑量的白消安預(yù)處理在NOD/SCID小鼠[31]和在NSG小鼠[22]上都達(dá)到最佳人源細(xì)胞植入率。使用白消安預(yù)處理的小鼠存活率高，不需要極度嚴(yán)格要求的小鼠飼養(yǎng)環(huán)境，操作簡便，近年來逐漸取代TBI，成為小鼠移植研究的主要預(yù)處理方式。

1.4 輸注造血干細(xì)胞方式的選擇

目前使用最廣泛的輸注造血干細(xì)胞的方式是小鼠尾靜脈注射，這種方式主要特點是便于操作，但造血干細(xì)胞經(jīng)尾靜脈進(jìn)入血液循環(huán)后大多數(shù)的造血干細(xì)胞都被滯留在外周器官，僅有少數(shù)造血干細(xì)胞在各種趨化因子等介導(dǎo)下歸巢骨髓。Yahata等[32]比較骨髓腔內(nèi)輸注與尾靜脈輸注兩種方法，發(fā)現(xiàn)經(jīng)骨髓腔內(nèi)注射產(chǎn)生的SRC是經(jīng)尾靜脈注射的15倍，因為骨髓腔內(nèi)輸注造血干細(xì)胞避開了各種外周器官滯留及各種細(xì)胞因子、趨化因子等因素的影響而直接歸巢骨髓。但骨髓腔內(nèi)注射技術(shù)要求較高，注射成功率不高，目前在做人源化小鼠各方面研究時兩種方法均有研究人員使用。

2 人源化小鼠模型在血液疾病上的應(yīng)用

2.1 人源化小鼠在研究GVHD上的應(yīng)用

GVHD是異基因造血干細(xì)胞移植后非復(fù)發(fā)死亡的主要原因之一，目前GVHD的發(fā)病機(jī)制仍未完全明確及治療手段有限[33]，所以，利用人源免疫細(xì)胞注入免疫缺陷小鼠，并在此基礎(chǔ)上誘導(dǎo)出GVHD對其發(fā)病機(jī)制的研究及指導(dǎo)臨床治療意義重大。

利用人源細(xì)胞注入免疫缺陷小鼠構(gòu)建異種GVHD模型已有多年歷史。大約30年前，Mosier等[34]率先利用人的外周血單個核細(xì)胞腹腔注射入經(jīng)TBI預(yù)處理后的SCID小鼠體內(nèi)，成功誘導(dǎo)出類似GVHD樣的癥狀。但這種方法誘導(dǎo)的GVHD的發(fā)病的異質(zhì)性很大，需大量的外周血單個核細(xì)胞誘導(dǎo)，經(jīng)腹腔注射的方式也不能模擬人類骨髓造血干細(xì)胞移植，因為所有的骨髓造血干細(xì)胞移植都是經(jīng)靜脈輸注的。

隨著Rag-/-γC-/-小鼠的出現(xiàn)，Van Rijn等[35]第一次利用靜脈注射30×106個人外周血單個核細(xì)胞到Rag-/-γC-/-小鼠內(nèi)誘導(dǎo)出GVHD，但仍需要大量的單個核細(xì)胞及TBI預(yù)處理。

Ito等[36]利用NOG小鼠、NOD/SCID小鼠及Rag2nullIL-2Rγnull小鼠進(jìn)行比較，結(jié)果表明，NOG小鼠輸注人源外周血單個核細(xì)胞后誘導(dǎo)GVHD的發(fā)病時間最快，死亡的時間較統(tǒng)一，當(dāng)使用10×106個人源外周血單個核細(xì)胞移植時，只有NOG小鼠在沒有使用TBI預(yù)處理的情況下能誘導(dǎo)出GVHD。King 等[37]的研究發(fā)現(xiàn)，在使用5×106個人源外周血單個核細(xì)胞情況下，所有NSG小鼠在2Gy劑量的TBI預(yù)處理后都能誘導(dǎo)出GVHD樣的癥狀。

綜上述，通過將人源外周血注入預(yù)處理或未預(yù)處理的免疫缺陷小鼠體內(nèi)，可誘導(dǎo)出GVHD樣癥狀，小鼠的免疫缺陷程度越高，誘導(dǎo)出GVHD需要的人源外周血細(xì)胞數(shù)量就越少。

目前，人源化GVHD小鼠模型主要應(yīng)用在研究GVHD的發(fā)病機(jī)制及開發(fā)臨床新型治療藥物。Wu等[38]通過尾靜脈高壓注射質(zhì)粒的方法，把人類IL-21基因?qū)隑RG(BALB/c-Rag2-/-IL-2Rγnull)小鼠的基因組中，然后分別利用人源外周血單個核細(xì)胞注入轉(zhuǎn)基因表達(dá)人類IL-21的BRG小鼠和對照組的BRG小鼠，在移植后第6天發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因表達(dá)人類IL-21小鼠脾臟聚集大量的CD19+的細(xì)胞，并觀察轉(zhuǎn)基因表達(dá)人類IL-21的BRG小鼠死亡時間明顯縮短；同時將去除供者B細(xì)胞單個核細(xì)胞注入BRG小鼠，長達(dá)25天內(nèi)沒有GVHD癥狀，結(jié)果表明IL-21和B細(xì)胞可能參與GVHD的發(fā)病，靶向供者B細(xì)胞的治療有可能成為預(yù)防和治療GVHD的一種新方法。也有Ito等[39]分別利用CD4+人源外周血T細(xì)胞和CD8+人源外周血T細(xì)胞注入NOG小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有注入CD4+人源外周血T細(xì)胞的NOG小鼠發(fā)生嚴(yán)重的皮膚GVHD；然后利用CD8+人源外周血T細(xì)胞與至少0.5×106個CD4+人源外周血T細(xì)胞一起注入NOG小鼠，或者CD8+人源外周血T細(xì)胞直接注入轉(zhuǎn)基因表達(dá)人類IL-2的NOG小鼠內(nèi)，都能誘發(fā)嚴(yán)重的皮膚GVHD，結(jié)果表明CD4+細(xì)胞可能通過IL-2的信號通路促進(jìn)CD8+細(xì)胞植入和擴(kuò)增，并證實皮膚GVHD的病理結(jié)果是由TH17細(xì)胞分泌的IL-17和IFNγ所介導(dǎo)的，使用抗IL-17抗體可明顯減輕皮膚GVHD。

雖然人源化GVHD小鼠模型為人類造血干細(xì)胞移植后產(chǎn)生的GVHD的發(fā)病機(jī)制和治療提供了新思路。但由于種屬差異性，異種移植產(chǎn)生GVHD的發(fā)病機(jī)制不完全等同于同種移植。于是，Covassin等[40]將HLA-DR4陰性供者的人源CD4+外周血單個核細(xì)胞注入缺失小鼠MHC分子及轉(zhuǎn)基因表達(dá)HAL-DR4的NSG小鼠中，可構(gòu)建同種異基因GVHD模型。這種GVHD小鼠模型比異種GVHD小鼠模型，更好地模擬人類GVHD的發(fā)病。

2.2 人源化小鼠在研究白血病上的應(yīng)用

白血病是血液系統(tǒng)最常見的腫瘤之一，該病的預(yù)后與白血病細(xì)胞的形態(tài)、免疫分型、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等因素有很大的相關(guān)性，且異質(zhì)性很大。因此建立一種穩(wěn)定的人源化的白血病小鼠模型對于抗白血病藥物研發(fā)及白血病的免疫治療具有重要意義。

縱觀白血病人源化小鼠模型的歷史，最早使用裸鼠行白血病模型研究。Potter等[41]使用HL-60細(xì)胞系皮下注射經(jīng)環(huán)磷酰胺預(yù)處理的裸鼠內(nèi)，能夠在裸鼠局部長出急性早幼粒細(xì)胞肉瘤。但這種動物模型的白血病表現(xiàn)與人類白血病相差較大，應(yīng)用意義不大。

1989年，Kamel-Reid等[42]使用急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系注射入SCID小鼠內(nèi)，成功重建白血病小鼠模型。這種小鼠模型中的白血病細(xì)胞在各器官的分布與兒童急性淋巴細(xì)胞白血病類似，基本重現(xiàn)了白血病細(xì)胞的生物學(xué)行為，對白血病的生長和發(fā)展的研究有一定幫助。但這種白血病細(xì)胞系無法保留腫瘤的異質(zhì)性，為了體現(xiàn)出腫瘤的異質(zhì)性，Uckun[43]使用患者來源的高危B細(xì)胞譜系急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞注入SCID小鼠內(nèi)，結(jié)果表明，白血病細(xì)胞在SCID小鼠內(nèi)生長越快，患者的預(yù)后就越差。

隨后，Steele等[44]將19例患者來源的急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞注射入SCID小鼠內(nèi)，只有12例白血病細(xì)胞能在小鼠內(nèi)生長，且進(jìn)展的速度與患者的預(yù)后相關(guān)；剩余未能在SCID小鼠內(nèi)生長的7例白血病細(xì)胞，再次注射入NOD/SCID小鼠體內(nèi)，均能在小鼠內(nèi)生長，但進(jìn)展與患者預(yù)后無相關(guān)性。結(jié)果表明，小鼠免疫缺陷程度越高，白血病細(xì)胞越容易植入，但白血病細(xì)胞在NOD/SCID小鼠內(nèi)的進(jìn)展不能作為患者預(yù)后的一項指標(biāo)。

為了進(jìn)一步提升人源白血病細(xì)胞的植入率，也隨著免疫缺陷小鼠的發(fā)展，有學(xué)者逐漸使用NSG小鼠等新一代免疫缺陷小鼠行人源化白血病小鼠模型研究。Diamanti等[45]利用NOD/SCID小鼠及NSG小鼠分別注入兒童患者的急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，并比較了這兩種品系小鼠之間的白血病細(xì)胞植入率，結(jié)果表明，不管患者的白血病亞型及危險度分層如何，NSG小鼠的白血病細(xì)胞植入率是NOD/SCID小鼠的1.2～7.7倍。Woiterski J等[46]將200多只NSG小鼠分別注入54名原發(fā)兒童急性白血病患者來源的骨髓細(xì)胞，結(jié)果表明，植入中位時間為7～10周，90%的小鼠植入，雄性小鼠比雌性小鼠具有顯著更高的植入水平，NSG小鼠的植入水平及總生存時間與患者白血病危險度分層有關(guān)。

人源化白血病小鼠模型主要應(yīng)用在臨床前藥物試驗及研究白血病的發(fā)病機(jī)制。Her 等[47]利用新生的NSG小鼠經(jīng)肝內(nèi)注入FLT3突變的急性髓系白血病細(xì)胞，成功建立白血病小鼠模型，并行索拉菲尼、瑞戈非尼臨床前藥物試驗。Willmann等[48]利用NSG小鼠植入CD34+分選的慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，成功建立慢性粒細(xì)胞白血病動物模型，并在其基礎(chǔ)上評價伊馬替尼、尼洛替尼、維達(dá)列汀等藥物療效。.這種疾病模型雖然可以行藥物篩選實驗，但不能反映人類白血病的發(fā)病情況。

為了解決這一問題，Trivial等[49]和Tezuka等[50]以病毒為載體將白血病致病基因?qū)肴祟愒煅杉?xì)胞，進(jìn)一步在免疫缺陷小鼠中誘發(fā)白血病的人源化小鼠模型逐漸發(fā)展起來。這種模型彌補(bǔ)了上述小鼠模型在白血病發(fā)病機(jī)制研究上的不足。

3 小結(jié)與展望

人源化小鼠是一種很好的反應(yīng)人類的免疫系統(tǒng)及某些疾病狀態(tài)的工具。通過對人源造血干細(xì)胞來源、免疫缺陷小鼠品系、預(yù)處理方式等各方面因素的優(yōu)化，可能建立一種免疫系統(tǒng)人源化程度較高的小鼠模型。過去的10余年人源化小鼠在血液學(xué)、免疫學(xué)等方面取得了令人矚目的進(jìn)步，多種人源化小鼠模型可以直接對人類疾病進(jìn)行模擬，這在以前的免疫缺陷動物身上是不可能完成的。

但是，目前的人源化小鼠模型仍有幾方面的不足之處。首先，人源化小鼠模型的免疫缺陷小鼠的體內(nèi)環(huán)境與人類的體內(nèi)環(huán)境存在差異；其次，人源造血干細(xì)胞分化出來的各種免疫細(xì)胞存在不完整、不成熟、細(xì)胞間的接觸不足等劣勢。為了解決這些存在的問題，目前正在嘗試研究出可以在免疫缺陷小鼠體內(nèi)促進(jìn)人源造血干細(xì)胞定向分化、成熟的基因工程方法，可能產(chǎn)生更適合應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究的人源化小鼠模型。