高危型人乳頭瘤病毒E6、E7mRNA檢測篩檢宮頸癌的臨床評價

徐雅杰

河南省周口市中心醫(yī)院 466000

宮頸癌是一種臨床常見婦科惡性腫瘤，發(fā)病率僅低于乳腺癌，是婦科惡性腫瘤致死的主要原因，近年來其發(fā)病率呈年輕化趨勢，已引起了臨床上的廣泛關(guān)注。目前臨床上多采用宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)篩檢宮頸癌，但該方式無法有效區(qū)分少數(shù)可進(jìn)展為浸潤癌的病變及多數(shù)可自然消退的病變[1]。近年來多項研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌的發(fā)病與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染關(guān)系密切，90%以上的宮頸癌患者皆伴有高危型HPV感染，若能盡早發(fā)現(xiàn)并及時治療，其治愈率可達(dá)90%[2-4]。使用HPV-DNA檢測可有效提高宮頸癌檢出率，但由于多數(shù)HPV感染患者均無明顯臨床癥狀，且多可在2年內(nèi)消退，使得HPV-DNA檢測雖具較高敏感性，但特異性較低，可能會存在一定誤診，加重患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及心理壓力。高危型HPV E6、E7mRNA表達(dá)的產(chǎn)物能通過鈍化腫瘤，起到抑制蛋白P53及PRb的作用，從而誘導(dǎo)宿主細(xì)胞癌變，因此本研究旨在探究高危型HPV E6、E7mRNA檢測篩檢宮頸癌的臨床應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月—2017年3月因?qū)m頸疾病于我院就診的83例患者為觀察對象，患者多為接觸性出血或陰道異常出血，并伴有白帶異常及下腹隱痛癥狀就診，年齡23～65歲，平均年齡39.62歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：無妊娠；入組前3d內(nèi)無性生活，無陰道沖洗及用藥史。排除標(biāo)準(zhǔn)：子宮切除手術(shù)史及宮頸手術(shù)史患者；嚴(yán)重凝血功能障礙及心肺臟器功能不全者。本研究經(jīng)我院倫理委員會通過，患者均知情并簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 宮頸樣本采集：使用宮頸細(xì)胞收集保存系統(tǒng)(凱普生物科技公司)采集患者宮頸細(xì)胞標(biāo)本，每例患者各采集2份，室溫下保存待測。

1.2.2 主要器材及試劑：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增儀、HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、HPV-DNA提取試劑盒(凱普生物科技公司)、PCR擴(kuò)增試劑盒(凱普生物科技公司)、HPV-DNA雜交試劑盒(凱普生物科技公司)、HPV mRNA診斷試劑盒(科蒂亞生物科技公司)。

1.2.3 宮頸TCT及陰道鏡下活檢：對于宮頸TCT常規(guī)篩檢異常的患者(非典型鱗狀細(xì)胞、低度鱗狀上皮內(nèi)病變)陰道鏡下取活檢組織送病理學(xué)檢查，以病理學(xué)檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.4 高危型HPV E6、E7mRNA檢測：嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，包括裂解細(xì)胞、雜交捕獲mRNA、信號放大、底物發(fā)光反應(yīng)等步驟，QuantiVirusTM冷光儀檢測光子數(shù)，Diacarta公司計算機(jī)軟件轉(zhuǎn)換后評價檢測結(jié)果。

1.2.5 HPV-DNA分型檢測：嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，包括全基因組DNA提取、PCR、導(dǎo)流雜交等步驟，肉眼觀察檢測結(jié)果為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn)后，根據(jù)雜交膜HPV亞型分布圖判斷感染類型(可觀察到一個圓點(diǎn)：HPV亞型單一感染；可觀察到圓點(diǎn)數(shù)>1：多重感染)。每張芯片上均有一個內(nèi)照點(diǎn) (PCR放映質(zhì)控點(diǎn)) 及一個生物素對照點(diǎn)(雜交顯色質(zhì)控點(diǎn))。

1.3 觀察指標(biāo) 比較高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢出率、敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及檢測費(fèi)用、患者滿意度(采用Zung氏焦慮自評量表評價，總分20～80分，20～50分為無焦慮，51～60分為輕度焦慮，61～70分為中度焦慮，71～80分為重度焦慮，以無焦慮和輕度焦慮為患者滿意，中度及重度焦慮為患者不滿意)。

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)檢測結(jié)果 陰道鏡活檢結(jié)果顯示：慢性宮頸炎23例；宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)45例，其中CINⅠ10例，CINⅡ14例，CINⅢ21例；宮頸癌15例。

2.2 檢出率比較 高危型HPV E6、E7mRNA檢出率57.83%(48/83)與HPV-DNA分型檢出率62.65%(52/83)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；且高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌的檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢出率比較

注：與HPV-DNA分型比較，*P>0.05。

2.3 敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測敏感性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；高危型HPV E6、E7mRNA檢測特異性顯著高于HPV-DNA分型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較(%)

注：與HPV-DNA分型比較，*P>0.05，#P<0.05。

2.4 檢測費(fèi)用及患者滿意度比較 與HPV-DNA分型檢測比較，高危型HPV E6、E7mRNA檢測費(fèi)用顯著較低，患者滿意度顯著較高，差異有具統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 高危型HPV E6、E7mRNA與HPV-DNA分型檢測費(fèi)用及患者滿意度比較

注：與HPV-DNA分型比較，*P<0.05。

3 討論

多項研究均發(fā)現(xiàn)[5]，以DNA為基礎(chǔ)的HPV檢測在宮頸癌的篩檢中具重要意義。雖然HPV-DNA檢測可以盡早檢出感染患者，但多數(shù)為對預(yù)測宮頸癌風(fēng)險無實際指導(dǎo)意義的暫時性感染，其敏感性及陰性預(yù)測值雖較高，但陽性預(yù)測值較低。隨著近年來醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上對E6、E7癌蛋白與宮頸癌的致病機(jī)制有了更新、更全面、客觀的了解，E6具有抑制宿主細(xì)胞P53基因表達(dá)，阻斷細(xì)胞凋亡的作用，E7具有抑制PRb基因表達(dá)，使細(xì)胞周期失控的作用。因此，較多學(xué)者認(rèn)為檢測E6、E7mRNA可反映HPV病毒活性及致癌能力，可能具有預(yù)測病情進(jìn)展的作用。

本文對83例患者分別行高危型HPV E6、E7mRNA檢測及HPV-DNA分型檢測，結(jié)果顯示兩種檢測方法檢出率比較無顯著差異，且慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌檢出率比較也無顯著差異。兩種檢測方法敏感性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較無顯著差異，但高危型HPV E6、E7mRNA檢測特異性顯著高于HPV-DNA分型，與劉佳佳等[6]研究一致。同時本文還發(fā)現(xiàn)，高危型HPV E6、E7mRNA檢測費(fèi)用顯著較低，患者滿意度顯著較高，說明高危型HPV E6、E7mRNA檢測可在宮頸癌病變早期及時篩查具有進(jìn)展風(fēng)險的持續(xù)性感染，并特異性識別可消退感染，減少因誤診造成的過度檢測及治療加重患者痛苦及精神負(fù)擔(dān)，能顯著提高患者滿意度，減輕其經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

綜上所述，高危型HPV E6、E7mRNA檢測能更直接、精準(zhǔn)地篩檢宮頸癌病變，提高其早期診斷有效性，避免過度檢查及治療，減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，具有較高應(yīng)用價值。