重組酶聚合酶等溫擴(kuò)增技術(shù)在食品安全檢測領(lǐng)域的應(yīng)用

蘭海鷗，柯義強(qiáng)，馬咸瑩，程浩，丁功濤，李明生，陳士恩，馬忠仁，魏嘉*

1(西北民族大學(xué)，生物醫(yī)學(xué)研究中心，中國-馬來西亞國家聯(lián)合實驗室，甘肅 蘭州，730030)2(西北民族大學(xué) 生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州，730030)

隨著全球經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，進(jìn)口貿(mào)易的增多，食品安全檢測也日趨嚴(yán)格。常用于食品安全檢測的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR)技術(shù)，是目前大部分檢測機(jī)構(gòu)及醫(yī)學(xué)實驗室都在使用的常規(guī)技術(shù)。然而該技術(shù)需要昂貴且精密的控溫設(shè)備，耗費(fèi)較長時間，在現(xiàn)場檢測中不具備優(yōu)勢，因此，我們需要更加簡便的技術(shù)來提高檢測效率。

等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)的問世為快速檢測帶來新的曙光。目前開發(fā)出來的等溫擴(kuò)增技術(shù)包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification method, LAMP)、自主序列復(fù)制與依賴核酸序列性擴(kuò)增技術(shù)(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)、單引物等溫擴(kuò)增(single primer isothermal amplification, SPIA)、鏈置換擴(kuò)增技術(shù)(strand displacement amplification,SDA)、信號介導(dǎo)的核糖核酸擴(kuò)增技術(shù)(sigal-mediated amplification RNA technology,SMART)、依賴解旋酶的等溫擴(kuò)增技術(shù)(helicase-dependent isothermal DNA amplification, HAD)、滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(rolling circle amplification,RCA)、快速等溫檢測放大技術(shù)(rapid isothermal detection and amplification,RIDA)、切刻內(nèi)切酶核酸恒溫擴(kuò)增(nicking enzyme mediated isothermal amplification, NEMA)和重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)等[1]。文章對重組酶聚合酶等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(recombinase polymerase amplification, RPA)及其在食品安全檢測方面的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

RPA技術(shù)是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的一種替代品，可快速、便捷地進(jìn)行核酸檢測分析[2]。RPA與PCR擴(kuò)增一樣具有特異性，但速度更快，結(jié)果通常在3～10 min生成。與PCR不同的是，RPA反應(yīng)不需要熱變性，因此不需要昂貴的熱循環(huán)設(shè)備。RPA對操作溫度要求并不嚴(yán)格，反應(yīng)在37～42 ℃下工作最優(yōu)，比其他等溫擴(kuò)增技術(shù)需要的溫度要低，能在廣泛的環(huán)境溫度下工作[3]。RPA可以在多種應(yīng)用中取代PCR，如傳染病診斷和食品安全檢測，它非常適合于現(xiàn)場、護(hù)理點(diǎn)和其他設(shè)備缺乏的環(huán)境，特別是對于檢測速度需求較高的情況下。

1 RPA技術(shù)介紹

1.1 反應(yīng)原理

RPA技術(shù)的整個反應(yīng)體系包含噬菌體重組酶UvsX及其輔助因子UvsY、寡苷酸引物、單鏈核酸結(jié)合蛋白(single-stranded DNA-binding proten,SSB)、DNA聚合酶，DNA模板、ddH2O和Mg2+等[4]。其擴(kuò)增原理是恒溫條件下，重組酶與長約 30～35 nt的寡核苷酸引物結(jié)合形成復(fù)合物，并在雙鏈DNA模板中尋找靶位點(diǎn)，重組酶打開雙鏈DNA，引物與同源序列發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成D狀環(huán)，SSB隨即結(jié)合到被置換的DNA鏈，防止引物解離，重組酶解離后引物3’端暴露并被鏈置換DNA聚合酶識別，在DNA聚合酶的作用下DNA擴(kuò)增反應(yīng)啟動；引物與雙鏈DNA配對形成復(fù)制所需的3’羥基末端，并在聚合酶的作用下進(jìn)行復(fù)制延伸，繼續(xù)DNA合成過程并完成2個引物的擴(kuò)增，最后形成完整的擴(kuò)增子。

1.2 引物設(shè)計

RPA引物設(shè)計原則：

(1)引物長度最長是45 bp，最好為30～35 bp，過短會影響重組酶活性。

(2)5’端為3～5個核苷酸，且避免出現(xiàn)連續(xù)的聚鳥嘌呤，最好是胞嘧啶，能促進(jìn)擴(kuò)增片段的重組。

(3)3’端最好為胞嘧啶和鳥嘌呤，有助于聚合酶的穩(wěn)定結(jié)合，提升引物擴(kuò)增性能。

(4)引物中避免出現(xiàn)特殊序列，如避免出現(xiàn)回文序列和連續(xù)的重復(fù)結(jié)構(gòu)。

(5)引物設(shè)計時盡量避免容易形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的序列，減少引物二聚體的形成。

(6)GC含量過高(>70%)或過低(<30%)都不利于RPA擴(kuò)增[6-8]。

1.3 技術(shù)特點(diǎn)

RPA技術(shù)與傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增相比,在便捷性以及高效性上有顯著的優(yōu)勢，與PCR技術(shù)相比有以下特點(diǎn)：

(1)反應(yīng)能夠在恒溫條件下進(jìn)行。盡管RPA的反應(yīng)模式與PCR相似，但不同的是PCR反應(yīng)需要加熱使DNA模板變性，而RPA不需要，在37～42 ℃的條件下，利用重組酶引物復(fù)合體掃描雙鏈DNA，促使DNA鏈上同源位點(diǎn)的互換。

(2)耗時短。RPA反應(yīng)速度快，能在5～10 min完成檢測。在許多情況下，沒有經(jīng)過專門訓(xùn)練的人就可以采集樣本，進(jìn)行實驗，并在半小時內(nèi)得到結(jié)果。檢測速度遠(yuǎn)勝于其他等溫擴(kuò)增技術(shù)。

(3)操作簡單。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，只需加入引物和模板就可以反應(yīng)，不需要復(fù)雜的樣品前處理，這大大提高了操作效率，避免繁瑣的實驗步驟帶來可能性的誤差。

(4)不受場地的限制。PCR擴(kuò)增需要專門的PCR儀，RPA技術(shù)由于對溫度要求低，甚至可以用人體溫度進(jìn)行，并可以在條件較為簡陋的地方進(jìn)行檢測。

(5)高靈敏性。在復(fù)雜樣品中，RPA技術(shù)可以檢測單拷貝的DNA和幾十個或更少拷貝數(shù)的RNA分子，而不需要事先進(jìn)行核酸純化和富集[9-11]。

1.4 操作過程

含有重組酶及聚合酶干粉的反應(yīng)管中分別加入反應(yīng)緩沖液、上下游引物以及模板DNA，用蒸餾水補(bǔ)至總體積，充分混勻，加入醋酸鎂溶液，上下顛倒8～10次混合均勻，瞬時離心后，放置于所需溫度的水浴鍋中反應(yīng)10～15 min[12-15]。

2 RPA及衍生技術(shù)

2.1 直接重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(Direct-RPA)

Direct-RPA是一種快速、靈敏的檢測方法。該技術(shù)不需要復(fù)雜的樣品前處理環(huán)節(jié)，常溫下就能夠?qū)悠分械哪繕?biāo)基因進(jìn)行擴(kuò)增，簡化了過程分析，在15～40 min的反應(yīng)時長內(nèi)能完成實驗要求，遠(yuǎn)低于NASBA、HDA等技術(shù)的時長要求。它既不需要PCR所依賴的熱循環(huán)儀器,也不像環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)需要提前準(zhǔn)備預(yù)變性的模板[16]。Direct-RPA具有快速、靈敏、簡單等優(yōu)點(diǎn)，是RPA系列技術(shù)的基礎(chǔ)，但也有較明顯的缺點(diǎn)，如產(chǎn)物的檢測需要進(jìn)行凝膠電泳，與其他等溫擴(kuò)增技術(shù)相比，檢測步驟比較麻煩。

2.2 重組酶聚合酶擴(kuò)增側(cè)流免疫技術(shù)(RPA-LFD)

側(cè)向流動免疫試紙條(lateral flow device，LFD)是目前用于定性和半定量檢測的簡單裝置。RPA-LFD是指在RPA技術(shù)結(jié)合LFD的一種聯(lián)用技術(shù)，兩者相結(jié)合可建立一種快速靈敏的現(xiàn)場檢測系統(tǒng)[17]。RPA-LFD基于RPA擴(kuò)增原理，用帶生物素標(biāo)記的引物和6-羧基熒光激素(6-FAM)標(biāo)記的探針與靶核酸進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)[18]，最終形成的擴(kuò)增子既帶有FAM基團(tuán)又被生物素標(biāo)記。LFD前端帶有FAM抗體的納米金粒，檢測線上帶有生物素抗體，將產(chǎn)物滴到試紙條上，擴(kuò)增子上的FAM基團(tuán)與FAM抗體反應(yīng)，檢測線處的生物素抗體與擴(kuò)增子上的生物素結(jié)合。最終，檢測線上顯示深紫色條帶，未被捕獲的產(chǎn)物與質(zhì)控線線處的特異性抗體結(jié)合顯示深紫色條帶。RPA-LFD檢測能在15～20 min完成，25～45 ℃的環(huán)境中便可進(jìn)行，因此，可用一些簡單的加熱裝備，如電熱水器等便可實現(xiàn)精確檢測。RPA-LFD檢測結(jié)果能在橫向流動試紙條上顯示，裸眼便可觀察，即使是非專業(yè)人員也可以直接分析結(jié)果，非常適用于現(xiàn)場快速檢測，尤其在經(jīng)濟(jì)條件差資源缺乏的區(qū)域，具有更好的應(yīng)用前景[19]。

2.3 重組酶聚合酶擴(kuò)增酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(RPA-ELISA)

酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是抗原抗體的特異性反應(yīng)，指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法[20]。RPA-ELISA技術(shù)是在RPA技術(shù)的基礎(chǔ)上結(jié)合ELISA技術(shù)發(fā)展起來的用于檢測核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的新型分析檢測手段，綜合了RPA、ELISA兩種技術(shù)的特點(diǎn)，在特異性、靈敏性等方面表現(xiàn)出優(yōu)異的特點(diǎn)、而且操作過程簡單，結(jié)果不需要電泳檢測和RPA產(chǎn)物純化，較短時間內(nèi)可以完成整個檢測過程[21]。同時，能在數(shù)小時內(nèi)對大量待檢樣品進(jìn)行篩選和鑒定，適用于資源匱乏的現(xiàn)場快速檢測，是一種有效的聯(lián)用檢測技術(shù)。但RPA-ELISA也存在缺陷，如重復(fù)性差，容易出現(xiàn)假陽性等[22]。

2.4 實時重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(real-time RPA)

Real-time RPA，即實時熒光定量RPA，是RPA基礎(chǔ)反應(yīng)體系與熒光探針結(jié)合起來的一種聯(lián)用技術(shù)。與實時定量PCR比較，兩者具有相同的靈敏度與特異性，然而實時熒光定量RPA的檢測過程所需時間明顯短于實時熒光定量PCR，即實時熒光定量RPA所需時間是7～15 min，實時熒光定量PCR則需耗時約90 min，且實時熒光定量PCR的實驗操作設(shè)備較復(fù)雜、昂貴，而且所占空間大、不便攜帶。此外，實時熒光定量PCR不僅需要一個熱循環(huán)過程而且實驗操作步驟復(fù)雜，而實時熒光定量RPA實驗操作 37～42 ℃ 的恒溫條件下就可進(jìn)行，不需復(fù)雜的操作程序[23]。用雙標(biāo)記寡核苷酸探針檢測目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物，該探針的5’末端含有熒光基團(tuán)Tamra或FAM)，3’末端含有猝滅基團(tuán)。當(dāng)探針與被擴(kuò)增的靶DNA結(jié)合時，外切酶Ⅲ切割基本位點(diǎn)，熒光基團(tuán)和猝滅基團(tuán)被分離，從而產(chǎn)生出與擴(kuò)增目標(biāo)DNA數(shù)量成正比的熒光信號，熒光強(qiáng)度也會隨著其擴(kuò)增而增強(qiáng)[24]。熒光強(qiáng)度信號實時檢測由熒光信號檢測器或掃描儀完成，目前有針對熒光定量RPA技術(shù)的簡易便攜熒光檢測設(shè)備。該技術(shù)敏感性強(qiáng)、特異性高，檢測時間短，已有不少報道利用該技術(shù)建立食品安全快速檢測的方法。

3 RPA技術(shù)在食品安全檢測領(lǐng)域的應(yīng)用

目前，RPA技術(shù)在國內(nèi)外已經(jīng)有大量的報道，涉及食品安全檢測以及臨床診斷等方面，并且在快速便捷檢測等方面優(yōu)于PCR檢測。RPA技術(shù)在食品安全領(lǐng)域的應(yīng)用主要包括食源性病毒、食源性致病菌、動物源性成分及轉(zhuǎn)基因成分檢測等方面。

3.1 食源性致病菌的RPA檢測

沙門氏菌是引起世界各地食源性疾病暴發(fā)的最常見病原，許多流行病學(xué)調(diào)查將沙門氏菌爆發(fā)的源頭歸咎于家禽和家禽副產(chǎn)品，包括蛋類[25]。GAO等[26]建立了一種快速檢測貝類中沙門氏菌的RPA-LFD檢測方法，在30～45 ℃下，僅需要8 min的擴(kuò)增就能達(dá)到擴(kuò)增子的檢測閾值。該方法具有良好的特異性，每次反應(yīng)都能達(dá)到100 fg DNA(20 μL)的靈敏度。且不需要昂貴的設(shè)備，可作為野外條件下貝類和其他食物中沙門氏菌的檢測試劑盒。KERSTING等[27]將芯片技術(shù)與RPA技術(shù)結(jié)合，建立了一種能夠在芯片表面檢測淋球菌、腸道沙門氏菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法，酶反應(yīng)在20 min完成，檢出耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、腸道沙門氏菌10個菌落形成單位和淋球菌100個菌落形成單位，該方法對于護(hù)理點(diǎn)檢測和基于核酸的簡化和小型化診斷是有效的。KIM等[28]以牛奶為研究對象，建立了RPA方法檢測其中的沙門氏菌，5 min后裸眼觀察檢測結(jié)果。整個實驗過程在30 min即可完成，得出牛奶中的沙門氏菌檢出限為100 CFU/mL(每毫升樣品中含有的細(xì)菌菌落總數(shù))，再次印證了RPA具有高靈敏度的特點(diǎn)。LIU等[29]以牛奶和雞胸肉為研究對象，建立了一種RPA-LFD快速檢測方法，檢測樣品中的沙門氏菌，并與PCR-LFD的檢測結(jié)果比對，結(jié)果顯示RPA-LFD的檢出限為1.05×10 CFU/mL，而PCR-LFD的檢出限為1.05×105CFU/mL，因此RPA-LFD的檢出限比較低，靈敏度高。由此可見，RPA技術(shù)能夠為食源性致病菌的檢測提供一種簡便的方法。

3.2 食源性病毒的RPA檢測

食源性病毒指以食物為載體并經(jīng)糞口途徑傳播而導(dǎo)致人類感染、患病的病毒。作為食源性疾病的重要病原體，微量的病毒即可引起相關(guān)疾病的發(fā)生，其中不乏傳染性強(qiáng)、流行范圍廣、危害嚴(yán)重的疾病。WANG等[30]基于RPA技術(shù)結(jié)合側(cè)流層析技術(shù)LFD建立了一種檢測口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的方法。在38 ℃ 條件下，用特異性引物和探針，在20 min成功擴(kuò)增了口蹄疫病毒基因組2B基因的一個區(qū)域。該方法進(jìn)一步驗證了RPA技術(shù)具有操作簡便、特異性好、靈敏度高等的優(yōu)點(diǎn)，且不需復(fù)雜儀器，適用于基層實驗室和現(xiàn)場的口蹄疫病毒快速篩查檢測。YEHIA等[31]開發(fā)了用于檢測H5亞型流感病毒的血凝素基因的定性逆轉(zhuǎn)錄重組酶聚合酶擴(kuò)增(reverse transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA)測定法。將結(jié)果與實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進(jìn)行比較，前者在7 min能完成檢測，而后者至少需要90 min才能完成。總之，RT-RPA比RT-PCR更快，并且易于在便攜式設(shè)備中操作。而且，它們具有同等的敏感性和特異性。EI等[32]以家禽及肉制品中H7和N9亞型流感病毒為研究對象，建立了反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR(RT-qRPA)方法。該方法分別可最低檢測到10個H7亞型病毒RNA或100個N9亞型病毒RNA，進(jìn)一步表明RPA技術(shù)具有高靈敏性的優(yōu)點(diǎn)。食源性病毒威脅人類健康，因此其檢測對食品安全體系的完善具有重要的意義。RPA檢測方法的建立為食源性病毒的檢測提供了新的方向。

3.3 肉類摻假檢測

肉類食品是人們生活中最重要的生鮮類食品之一，隨著生活水平的提高，對肉品質(zhì)的需要也越來越高，近年來，國內(nèi)外市場上的肉制品摻假事件頻繁發(fā)生，這些不法行為不僅破壞了公平貿(mào)易，給消費(fèi)者帶來經(jīng)濟(jì)損失，更重要的是引起了食品安全等方面的問題。郭燕華等[33]根據(jù)豬源線粒體細(xì)胞色素B基因序列設(shè)計了2對RPA引物，篩選了1對可用于擴(kuò)增的引物，建立了基于重組酶聚合酶介導(dǎo)的等溫核酸擴(kuò)增檢測方法，結(jié)果顯示，30 ℃等溫擴(kuò)增條件下，RPA引物的特異性良好，檢測靈敏度可達(dá)0.1 ng/μL，該方法快速簡便，具有較高的特異性和靈敏性，適用于快速檢測市售生鮮肉中的豬源性成分。吳昊等[34]根據(jù)家豬線粒體細(xì)胞色素B的核苷酸序列建立了一套利用Real-time RPA技術(shù)進(jìn)行肉及肉制品中豬源性成分的檢測方法。此方法能夠檢測出肉及其制品中低至0.2% 的豬源性成分，且能夠在恒溫條件下(40 ℃)15 min內(nèi)完成反應(yīng)，是一種新型、簡單、高效的檢測方法，對實現(xiàn)快速便攜式的豬源性成分檢測具有重要意義。綜上所述，RPA技術(shù)在動物源性檢測方面具有簡單高效等優(yōu)點(diǎn)，為市售生鮮肉制品摻假提供了快速便捷的檢測方法。

3.4 轉(zhuǎn)基因檢測

隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷發(fā)展，其在農(nóng)業(yè)技術(shù)方面的應(yīng)用也越來越廣泛，轉(zhuǎn)基因食品也走向市場，在轉(zhuǎn)基因食品的監(jiān)測方面，監(jiān)管部門也面臨越來越大的壓力。賈玄[35]針對轉(zhuǎn)基因水稻建立了一套利用RPA技術(shù)的檢測方法，包括RPA-Basic、RPA-LFD、實時熒光定量RPA(RPA-Exo),結(jié)果顯示，該檢測方法相較于傳統(tǒng)的PCR具有更高的靈敏性，檢測速度方面也優(yōu)于傳統(tǒng)PCR，在15～40 min能夠檢測出結(jié)果。李凱等[36]以轉(zhuǎn)基因玉米TC1507和MON89034兩個品種為研究對象，在實時熒光定量RPA檢測方法的基礎(chǔ)上，建立了雙重RPA檢測方法，結(jié)果顯示，RPA熒光檢測方法可以對這兩種轉(zhuǎn)基因玉米進(jìn)行雙重檢測。XU等[37]基于花椰菜花葉病毒35S(camv-35S)啟動子和農(nóng)桿菌NOP合成酶基因(NOS)終止子等在轉(zhuǎn)基因作物中的調(diào)控序列，設(shè)計了兩套RPA引物，建立了用于轉(zhuǎn)基因作物篩選和檢測的實時RPA檢測方法。該方法可在15～25 min可靠地檢測出樣品中的100個拷貝的目標(biāo)分子。此外，還成功地將實時RPA檢測方法用于4種主要轉(zhuǎn)基因作物(玉米、水稻、棉花和大豆)的DNA擴(kuò)增和檢測。這種新的擴(kuò)增方法大大縮短了檢測時間，簡化了反應(yīng)過程，為轉(zhuǎn)基因作物的快速檢測提供了一種有效的方法。CHANDU等[38]以轉(zhuǎn)基因RR2Y大豆為研究對象，建立了一種RPA的現(xiàn)場檢測方法，以大豆樣品中內(nèi)源Lec基因作為對照，反應(yīng)開始后大約5～7 min，Lec調(diào)控的反應(yīng)在所有情況下均產(chǎn)生陽性信號。研究表明，這種現(xiàn)場檢測方法同樣適用于未經(jīng)訓(xùn)練的人員對樣品進(jìn)行快速簡單的測試。RPA技術(shù)為轉(zhuǎn)基因食品的檢測提供了快速便捷的方法。

3.5 過敏原基因檢測

隨著食品行業(yè)的發(fā)展，過敏食物的增多，過敏性疾病已經(jīng)成為全球性的問題，并引起各界廣泛的關(guān)注，據(jù)報道，約有90%的過敏反應(yīng)是由花生、雞蛋、牛奶、果仁、貝類、大豆和小麥引起的，其中以花生為過敏原引起的過敏反應(yīng)最為嚴(yán)重，SANTIAGO-FELIPE等[39]建立了一種RPA-ELISA檢測技術(shù)，同時檢測榛子、花生、大豆、番茄和玉米中的過敏原結(jié)果表明，每個分析物的檢出限為 1.3～5.3 μg/g，與PCR-ELISA的靈敏度和重復(fù)性相比，RPA-ELISA都優(yōu)于前者，且RPA-ELISA技術(shù)更適合應(yīng)用于偏遠(yuǎn)地區(qū)等資源匱乏的環(huán)境。JAUSE-TRUBIO等[40]以羽扇豆為研究對象，建立了核酸適體-重組酶聚合酶等溫擴(kuò)增(Apta-RPA)的方法，利用選擇的DNA適體的親和力和特異性，對抗過敏性β-凝集素過敏原進(jìn)行等溫擴(kuò)增超靈敏檢測。將磁珠作為固相與Apta-RPA檢測相結(jié)合，總測定時間從210 min減少到僅25 min，檢測限為3.5×10-11mol/L，證明了快速和超靈敏的通用方法可以與任何適配器一起使用。RPA方法的建立為食品中過敏原的檢測提供了新的思路。

4 結(jié)論

RPA等溫擴(kuò)增技術(shù)具有許多優(yōu)點(diǎn)。這種反應(yīng)沒有熱循環(huán)的需要，可使用簡單設(shè)備，如加熱器或烤箱，價格低廉，可以進(jìn)行最低限度的維護(hù)控制。具體來說，RPA具有恒溫、較低溫度、擴(kuò)增時間短、可靠性和簡單性等特點(diǎn)。核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的測定還具有靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，在食品安全檢測領(lǐng)域具有一定的應(yīng)用價值。它提供了一種能夠檢測潛在食物威脅因素的方法，如過敏原、轉(zhuǎn)基因生物或病原體。傳統(tǒng)檢測技術(shù)由于耗時長，設(shè)備復(fù)雜，因此不利于現(xiàn)場快速檢測，已不能滿足食品安全檢測的更高需求，因此建立一種快速、便捷、靈敏、特異的檢測方法十分重要。RPA作為一個新興的分子檢測技術(shù)，迄今為止，不僅在醫(yī)藥學(xué)等方面應(yīng)用較多，而且在食品安全檢測方面的研究也初有成效，隨著RPA技術(shù)不斷應(yīng)用與研發(fā)，未來RPA將朝更加快速、便捷、敏感、特異的方向發(fā)展，給食品安全檢測的研究帶來新的曙光。