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    HPLC-MS/MS法測定人體血液中文拉法辛的濃度

    2019-02-14 06:02:19包東偉
    中國科技縱橫 2019年23期
    關(guān)鍵詞:文拉法辛血液

    包東偉

    摘 要:目的:建立檢測血液中文拉法辛的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)方法。方法:以乙腈為沉淀劑,經(jīng)蛋白質(zhì)沉淀,取上清液進(jìn)高效液相串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)(LC-MS/MS)分析。結(jié)論:該方法操作簡單,靈敏度高,特異性強(qiáng),可用于血液中文拉法辛的定量測定。

    關(guān)鍵詞:文拉法辛;血液;高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

    中圖分類號:R115 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1671-2064(2019)23-0250-02

    文拉法辛(venlafaxine)是一種全新的口服抗抑郁藥,用于治療抑郁癥和廣泛性焦慮癥,是5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取抑制劑,具有雙抽抑制作用。因其起效較快且不良反應(yīng)較小,已逐漸成為抗抑郁的一線藥物[1]。文拉法辛在體內(nèi)主要通過肝臟細(xì)胞色素P450酶代謝,生成主要活性代謝產(chǎn)物O-去甲基文拉法辛。目前,國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的有關(guān)文拉法辛血藥濃度的測定方法較多,包括熒光檢測法[2]、高效液相色譜法[3]、質(zhì)譜檢測法[4-6]等。本文建立高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS),采用蛋白沉淀方法測定血液中文拉法辛濃度。

    1 材料與試藥

    1.1 儀器

    臺式三重四極桿串接質(zhì)譜系統(tǒng)(含ESI電噴霧離子源);U3000二元超高效LC;德國賽多利斯Quintix35-1CN。

    1.2 試劑

    鹽酸文拉法辛,批號:100543-201602,純度:99.9%,中國食品藥品檢定研究院。

    1.3 色譜條件

    分析柱為:Allure PFP Propyl 100mm×2.1mm×5μm,流動相為乙腈:20mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸緩沖液(70:30),流速為200μL/min。柱溫為常溫。

    1.4 質(zhì)譜條件

    電噴霧離子源(H-ESI)正離子選擇多反應(yīng)檢測(SRM)掃描分析,定量分析離子對分別為:m/z 278.212→m/z 57.97(文拉法辛);m/z 290.125→m/z 198.054(地西泮-d5)。

    2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

    在空白血液中分別加入文拉法辛的工作液,配置成文拉法辛濃度分別為1、10、50、100、250、500ng/mL的血液標(biāo)準(zhǔn)液。

    3 血液樣品處理

    精密量取100μL血液,加入內(nèi)標(biāo)50μL和沉淀劑乙腈900μL,混旋2min,10000轉(zhuǎn)/min離心2.5分鐘,取上清液1μL供LC-MS/MS分析。

    4 方法考察

    4.1 專屬性

    分別取6份不同來源的不服用文拉法辛的正常人空白血液100μL,不加內(nèi)標(biāo),按“血液樣品處理”項(xiàng)處理,進(jìn)樣分析,得空白樣品色譜圖。另取空白血3份,1份加內(nèi)標(biāo),1份加分析物,1份加內(nèi)標(biāo)和分析物,同法處理,得相應(yīng)色譜圖。

    4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量下線

    含藥標(biāo)準(zhǔn)曲線血液按“血液樣品處理”處理后進(jìn)樣分析。以文拉法辛添加濃度為X軸,樣品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為Y軸,進(jìn)行線性回歸,經(jīng)“Equal”權(quán)重得文拉法辛標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

    4.3 精密度、準(zhǔn)確度和提取回收率

    取24份空白血液,分別配制定量下線及低、中、高質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品各6份,按“血液樣品處理”項(xiàng)處理,進(jìn)樣分析,連續(xù)測定3批,計(jì)算精密度和準(zhǔn)確度。

    分別配制低、中、高質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品各8份,其中6份于提取前加入工作液和內(nèi)標(biāo),另2份于提取后加入工作液和內(nèi)標(biāo),進(jìn)樣分析,計(jì)算提取回收率。

    4.4 穩(wěn)定性

    制備低、高質(zhì)量濃度的血液質(zhì)控樣品,分別考察在常溫光照放置24h、反復(fù)凍融3次、-70℃凍存1個月、進(jìn)樣器內(nèi)24h條件下的穩(wěn)定性。

    4.5 基質(zhì)效應(yīng)

    分別取6種不同來源的空白血清90μL,按“血液樣品處理”處理,得空白基質(zhì)后,分別加入低、高質(zhì)量濃度工作液10μL及內(nèi)標(biāo)50μL,制備成基質(zhì)考察樣品,進(jìn)樣分析,得分析物與內(nèi)標(biāo)峰面積比值A(chǔ)1。用去離子水代替血液,同法操作,得分析物與內(nèi)標(biāo)峰面積比值A(chǔ)2。內(nèi)標(biāo)歸一化的基質(zhì)因子=A1/A2×100%。

    5 結(jié)果

    5.1 專屬性

    文拉法辛的保留時間約為3.22min,地西泮-d5的保留時間約為1.83min,血液中內(nèi)源性物質(zhì)對目標(biāo)分析物及其對應(yīng)內(nèi)標(biāo)的測定無干擾,專屬性好,見圖1。

    左及中:空白血液,右上:空白血液添加內(nèi)標(biāo),右中:空白血液添加分析物,右下:空白血液添加內(nèi)標(biāo)及分析物。

    5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量下限

    文拉法辛的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.00173148+0.00604996* X(R^2=0.9991),定量下線為1ng/mL(S/N≥10:1),線性范圍為1~500ng/mL。

    5.3 精密度、準(zhǔn)確度和提取回收率

    文拉法辛定量下線的批間精密度(RSD)為18.80%,其余在3.38~7.76%之間,準(zhǔn)確度為87.83~102.98%,結(jié)果見表1。在低、中、高質(zhì)量濃度下,文拉法辛的平均提取回收率為101.33~104.61%,結(jié)果見表1。

    5.4 穩(wěn)定性

    含藥血液質(zhì)控樣品在常溫光照下放置24h、反復(fù)凍融3次、-70℃凍存1個月、進(jìn)樣器內(nèi)24h各條件下穩(wěn)定,RSD小于15%。

    5.5 基質(zhì)效應(yīng)

    文拉法辛在低和高2個質(zhì)量濃度水平下的內(nèi)標(biāo)歸一化基質(zhì)因子RSD分別為3.61%、4.54%,小于15%,樣品測定不受基質(zhì)效應(yīng)影響。

    6 討論

    本實(shí)驗(yàn)采用LC-MS/MS建立的檢測人血液中文拉法辛的方法,所需血液樣品量少,專屬性好,靈敏度高,準(zhǔn)確穩(wěn)定。以乙腈為沉淀劑,采用蛋白沉淀法處理樣品,簡單快捷,可快速對樣品進(jìn)行定性定量分析。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 李華芳,顧牛范.抗抑郁藥臨床應(yīng)用的進(jìn)展[J].中國新藥與臨床雜志,2005,24(8):605-609.

    [2] Ardakani YH,F(xiàn)orounmdi A,Rouini MR.Development and validationofarapid HPLC-fluorescencemethod for simultaneousdetermination of venlafaxine and its major metabolites in human plasma[J].Daru J Facul Pharm,2010,18(2):97-102.

    [3] 王志綱,朱雪松,馬睿婷,等.RP-HPLC同時測定人血清中文拉法辛及氧去甲文拉法辛的濃度[J].中國藥學(xué)雜志,2011,46(1):54-57.

    [4] Kingback M,Josefsson M,Karlsson L,et al.Stereoselective determination of venlafaxine and its three demethylated metabolites inhuman plasma and whole blood by liquid chromatography withelectrospray tandem mass spectrometric detection and solid phase extraction[J].J Pharm Biomedi Anal,2010,53(3):583-590.

    [5] 陸川,劉罡一,茅曉寅,等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定人血漿中文拉法辛及其代謝物的濃度[J].中國新藥與臨床雜志,2011,30(8):634-638.

    [6] 謝煥山,盧浩揚(yáng),倪曉佳,等.HPLC-MS/MS法同時測定人血清中文拉法辛和O-去甲基文拉法辛的濃度[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2019,35(3):283-286.

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