牛羊布氏桿菌病臨床樣品采集與送檢技術(shù)要點(diǎn)

布氏桿菌病是布氏桿菌引起牛、羊等動(dòng)物和人感染的一種傳染性病。一旦動(dòng)物感染本病，妊娠動(dòng)物和雄性動(dòng)物主要出現(xiàn)流產(chǎn)和睪丸炎的臨床癥狀。布氏桿菌病不僅對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成極大的危害，同時(shí)也嚴(yán)重威脅人類健康和公共衛(wèi)生安全。對(duì)于臨床采樣和送檢過程的嚴(yán)格規(guī)范，是避免布氏桿菌病流行的基礎(chǔ)，采集樣品主要來自流產(chǎn)母牛的血清以及胎衣或胎兒，采集時(shí)應(yīng)取發(fā)病典型的動(dòng)物樣品送檢到實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)用血清學(xué)和細(xì)菌學(xué)等實(shí)驗(yàn)室檢查法進(jìn)行檢測(cè)。

一、樣品采集

1.采集血液樣品。布氏桿菌會(huì)感染人，所以在采集臨床樣本的時(shí)候一定要保護(hù)好自身安全。在采血前必須穿戴質(zhì)量較好的專用工作服、手套、口罩、帽子、護(hù)眼鏡及鞋靴等，做好一切采樣前的工作準(zhǔn)備。應(yīng)使用一次性塑料注射器采血管進(jìn)行采血，根據(jù)采血量的需求選擇針管的大小型號(hào)，針對(duì)牛羊的采血應(yīng)選擇中型或者大型的針頭。采血前要準(zhǔn)備記號(hào)筆、毛剪、消毒水、消毒棉、試管、自封袋等等。采血時(shí)對(duì)采血部位進(jìn)行剪毛消毒，先用碘伏由里至外螺旋式擦拭，后用酒精由外至里的螺旋式擦拭消毒。動(dòng)物采血最佳時(shí)間是在早晨空腹時(shí)進(jìn)行，采集臨床的樣品要選用典型的病例。牛、羊等大動(dòng)物采血一般可選取靜脈最顯著的部位。垂直下針，一邊進(jìn)針一邊緩慢回抽直到見到回血，然后放開按壓的左手，一般需要抽取血液5mL作為樣本。采血完畢后，用潔凈的酒精棉球按壓至不再流血，注意要避免形成瘀血塊和感染。采血后對(duì)樣品進(jìn)行編號(hào)，每個(gè)樣品標(biāo)記唯一的編號(hào)。按相關(guān)要求嚴(yán)格填寫采樣表格，清楚記錄每一個(gè)樣品對(duì)應(yīng)的來源。針管要傾斜45°放置，凈置到血液凝固之后再進(jìn)行挪動(dòng)。

2.采集病理組織學(xué)樣品。病理學(xué)檢查也是檢測(cè)布氏桿菌病重要的實(shí)驗(yàn)室方法，用于病理組織學(xué)檢驗(yàn)的樣品主要是流產(chǎn)的胎兒胎衣、患病奶牛群的乳汁、淋巴、脾臟、肝臟、臍帶和公牛公羊的生殖器官，用于病理組織學(xué)檢驗(yàn)的組織樣品首先要保證取材新鮮。在采樣時(shí)選病變最明顯的組織器官的部位，也要連同部分健康的組織一起采集。將采集的組織切成小的組織塊，然后立即完全浸泡入95%酒精內(nèi)進(jìn)行固定。如果不能在2d內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)，在經(jīng)24h固定后再更換一次固定液，然后密封貼上標(biāo)簽送到檢驗(yàn)中心進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于奶牛乳汁要進(jìn)行冷藏保存。

二、樣品采集的注意事項(xiàng)

1.采集適時(shí)適量和典型部位的樣品。要根據(jù)具體的情況確定采集樣品的時(shí)間，牛羊布氏桿菌病要在疾病發(fā)生最明顯的時(shí)候采集樣品。樣品還要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的不同來確定采集量，采集病例的樣品數(shù)量要足夠，如果開始采集量少，再次重新采集的難度將大大增加，不僅浪費(fèi)時(shí)間而且還會(huì)錯(cuò)過最佳采集樣品的時(shí)機(jī)，影響實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果。

確定采集樣品的品種、生理狀態(tài)、年齡和臨床癥狀。對(duì)牛羊布氏桿菌病進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，應(yīng)采集患病牛羊血液樣品，主要進(jìn)行血清凝集試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，奶牛還應(yīng)該對(duì)乳汁性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于組織病理學(xué)檢查，牛應(yīng)該采集淋巴、肝臟、脾臟、流產(chǎn)的胎兒胎衣等，羊的組織學(xué)檢查與牛大致一樣。最好采集還未用藥物治療并且癥狀最明顯的病例樣品，炎癥癥狀明顯的病例要采集發(fā)病部位的膿汁進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測(cè)。

2.采集樣品注意事項(xiàng)。采集牛羊組織和血液需要無(wú)菌操作，采集樣品所用到的器具和容器要滅菌處理。要避免人為污染樣品，還要盡量避免其他細(xì)菌和病毒的污染，影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的結(jié)果。送檢樣品的資料表格要盡可能的詳細(xì)。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員對(duì)送檢樣品檢測(cè)的重要依據(jù)主要是送檢表格，這是分析樣品檢測(cè)結(jié)果的重要參考資料，因此送檢表格一定要對(duì)應(yīng)做好。

三、送檢要點(diǎn)

在炎熱的夏季，血樣大概放置1h就會(huì)析出血清。在冬季血清不容易析出，需要將采血管傾斜放在37℃恒溫箱中靜置2h左右。血清析出前不能放入冰箱中進(jìn)行儲(chǔ)藏，不然血清非常難析出，沒有分離血清的全血放置時(shí)間不宜超過12h，不然很容易發(fā)生溶血。要注意只有待血清析出之后，才可以進(jìn)行離心操作分離血清。

送檢的樣品編號(hào)要一一對(duì)應(yīng)，送檢的時(shí)候應(yīng)該將采集的樣品放到冷藏裝置中與采樣表格一起送到檢測(cè)中心。送檢的血液樣品要注意避免出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，若出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，可能是放置時(shí)間太久、全血凝血不良、離心時(shí)過度的震蕩等原因所致。