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      一次藥敏試驗(yàn)及其應(yīng)用

      2019-02-13 01:04:26徐玉斌甘肅省華池縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心745600
      山東畜牧獸醫(yī) 2019年3期
      關(guān)鍵詞:新諾明平皿酒精燈

      徐玉斌 (甘肅省華池縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 745600)

      隨著新型致病菌的不斷出現(xiàn),抗菌藥對(duì)細(xì)菌性傳染病的控制起到了非常重要的作用,但由于養(yǎng)殖過程中不科學(xué)、盲目的濫用抗菌藥,很多致病性細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性,使得抗菌藥對(duì)細(xì)菌性疾病的控制效果越來越差,不但造成藥物浪費(fèi),而且還延誤病情,給養(yǎng)殖戶造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。并且各種致病菌對(duì)不同的抗菌藥物的敏感性不同,同一細(xì)菌的不同菌株對(duì)不同抗菌藥物的敏感性也有差異。因此,通過藥敏試驗(yàn),掌握致病菌對(duì)藥物的敏感性,指導(dǎo)臨床用藥,提高療效。

      1 流行病學(xué)調(diào)查

      某養(yǎng)殖戶,養(yǎng)羊95只,發(fā)病羊30只,病死2只。臨床癥狀有體溫升高41℃,食欲廢絕,咳嗽,消瘦,流濃鼻。剖解肺間質(zhì)增厚,有肉樣變化,伴隨出血,肝臟和膽囊腫大。曾經(jīng)用青霉素、板藍(lán)根注射液、磺胺間甲氧嘧啶鈉治療。治療無效后送檢病死羊肺組織、肝組織進(jìn)行藥敏測(cè)定。

      2 試驗(yàn)步驟

      2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

      2.1.1 材料用具 培養(yǎng)基(可購買成品)、培養(yǎng)皿、電子天平、錐形瓶、電磁爐、石棉網(wǎng)、玻璃棒、pH試紙、氯化鈉、氫氧化鈉、瓶口塞、酒精燈、接種環(huán)、酒精棉球、記號(hào)筆、吸水紙、恒溫箱、高壓鍋。

      2.1.2 培養(yǎng)基的制備 按照各類微生物生長(zhǎng)的需要將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行人工合成:(1)稱取蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化鈉5g溶解于1000ml的超純水中。(2)用試劑氯化氫(酸)和氫氧化鈉(堿)校正酸堿度,使其達(dá)到pH值7.2~7.4。加入瓊脂15g,在電磁爐上墊石棉網(wǎng),用玻璃棒攪拌加熱直至溶解。(3)瓶口塞棉塞,包裝后置高壓鍋內(nèi),同時(shí)也將接種平皿用報(bào)紙包好置于其內(nèi),121℃高壓滅菌30min。(4)經(jīng)高壓滅菌后趁熱取出,溫度降到56度左右,在生物安全柜里將培養(yǎng)基傾入滅菌的培養(yǎng)皿,每一空皿傾入培養(yǎng)基20ml,放入4℃冰箱中備用。

      2.1.3 病料處理 在超凈工作臺(tái)上取出采集的肺組織、肝組織,用滅菌手術(shù)刀剪剪去手指大小的病變邊緣組織,然后用吸水紙吸干組織水分,在酒精燈火焰上滅菌固定,最后剪開組織進(jìn)行接種培養(yǎng)。

      2.1.4 細(xì)菌接種 (1)用洗手液將雙手洗凈,擦干,再用75%酒精棉球檫試雙手。當(dāng)手上酒精揮發(fā)完畢后,點(diǎn)燃酒精燈。(2)對(duì)接種環(huán)火焰灼燒滅菌,冷卻后分別蘸取接種物,開始在培養(yǎng)皿劃線。左 手 斜 持 平皿(45°角),用拇指打開皿蓋,使其與皿底間分開成2~3cm寬的縫隙,靠近火焰周圍,右手握持接種環(huán)伸入平皿內(nèi),在平皿上端1/6范圍來回劃線,密集涂布。然后用腕力在原劃線處作連續(xù)平行劃線,劃線時(shí)使接種環(huán)與平板成30°~40°角,劃線間距適當(dāng),不能重疊。(3)接種完畢后,將接種環(huán)火焰滅菌后放回,用記號(hào)筆在皿底玻璃上注明組織名稱,接種時(shí)間等,將培養(yǎng)皿倒置,送進(jìn)溫箱。(4)經(jīng)37℃ 18~24h孵育后取出,觀察瓊脂平板表面細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

      2.2 藥敏試驗(yàn)

      將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測(cè)試菌的瓊脂表面上,紙片中的藥物在瓊脂中擴(kuò)散,隨著擴(kuò)散距離的增加,抗菌藥物的濃度呈對(duì)數(shù)減少,從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時(shí),紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的菌株不能生長(zhǎng),可以使抑菌范圍外的菌株生長(zhǎng),從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈,不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂中擴(kuò)散速度的影響而可能不同,抑菌圈的大小可以反映測(cè)試菌對(duì)藥物的敏感程度。

      2.2.1 材料準(zhǔn)備 藥敏試紙(購買)、接種環(huán)、酒精燈、鑷子、恒溫箱、毫米尺。

      2.2.2 操作步驟 (1)在“超凈臺(tái)”中,用經(jīng)火焰滅菌的接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌,以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(2)將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停,選取慶大霉素、青霉素、鏈霉素、氨芐西林、林可霉素、復(fù)方新諾明、卡那霉素、頭孢曲松、呋喃唑酮、環(huán)丙沙星藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。用鑷子輕按幾下藥敏片,使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼。先在平皿中央貼一片,然后外周等距離貼(外周一般可貼7片)。(3)將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h后,觀察效果。

      2.2.3 結(jié)果觀察與判斷 過夜培養(yǎng)后形成一個(gè)抑菌圈,用毫米尺測(cè)量抑菌圈直徑,慶大霉素11mm、青霉素4mm、鏈霉素4mm、氨芐西林6mm、林可霉素1mm、復(fù)方新諾明12mm、卡那霉素12mm、頭孢曲松9mm、呋喃唑酮5mm、環(huán)丙沙星12mm。抑菌圈越大,說明該菌對(duì)此藥敏感性越大,反之越小,在15mm以上為高敏,10~15mm為中敏,小于10mm為低敏,無抑菌圈為不敏。

      3 藥敏試驗(yàn)的應(yīng)用

      藥物敏感實(shí)驗(yàn)后,選擇高敏藥物進(jìn)行治療,推薦藥物有復(fù)方新諾明、卡那霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素。選用復(fù)方新諾明進(jìn)行臨床治療,0.08g/kg給藥,首次加倍,2次/d,連用3d。經(jīng)過治療病情得到控制,3d治愈力87%,根據(jù)綜合治愈力來看復(fù)方新諾明療效是明顯的,是臨床的理想藥物。同時(shí)在選擇高敏藥物時(shí)應(yīng)考慮藥物的吸收途徑,因?yàn)樗幟粼囼?yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸,而在給畜禽用藥的時(shí)候,必須通過機(jī)體的吸收才能使藥物達(dá)到一定的效果,所以用藥時(shí),要考慮給藥方法,這樣才會(huì)達(dá)到好的治療效果。

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