• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    關(guān)于豬瘟病毒Taqman實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)方法與臨床應(yīng)用的探討

    2019-02-12 20:40:14
    獸醫(yī)導(dǎo)刊 2019年22期
    關(guān)鍵詞:精密度核酸豬瘟

    馬 蘭

    (哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司,黑龍江哈爾濱 150069)

    豬瘟病毒是一種小型單鏈RNA病毒,與牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral dirhea virus,BVDV)及羊邊界病毒(Borger disease virus,BVD)均屬于黃病毒科瘟病毒屬。而近年發(fā)展的實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Real-time fluorescent quantitativePCR)技術(shù)由于快速檢測(cè)微量的病毒核酸,可以準(zhǔn)確的確定病毒拷貝數(shù)的樣本,操作方便,耗時(shí)短,結(jié)果直觀,這么快就被廣泛使用在農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本文通過反復(fù)試驗(yàn),成功建立了一種實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)特異性CSFV的方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 毒株和樣品

    從中牧實(shí)業(yè)股份有限公司購買豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖呼吸綜合征病毒(PRSV)、豬O型口蹄疫病毒(O-FMDV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒II型(PCV2)、豬細(xì)小病毒(PPV)等滅活疫苗,這些滅活疫苗經(jīng)多次凍融處理后,應(yīng)用RNA/DNA提取。

    1.1.2 主要試劑與儀器設(shè)備

    主要試劑:磁珠法全自動(dòng)核酸提取試劑盒、世紀(jì)元亨豬瘟通用型實(shí)時(shí)熒光RT-PCR試劑盒;儀器:MagMAXTMExpress核酸提取儀、AB17500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

    1.2 方法

    1.2.1 模板準(zhǔn)備

    在MagMAXTMExpress核酸提取儀的幫助下,按照磁珠自動(dòng)核酸提取試劑盒的說明書提取PPVAPRVAPCV2的DNA和o=fmdvAPRRSVACSFV的RNA。提取的DNA/RNA用于PCR擴(kuò)增或-20c保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2 精密度試驗(yàn)

    精密吸取濃度為1.000mg/mL的CSFV 1uL,作為實(shí)驗(yàn)?zāi)0?,連續(xù)進(jìn)樣6次。x軸為CT值,y軸為Rn,用于CSFV實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的精密度驗(yàn)證。

    1.2.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

    精密量取含有CSFV病毒的樣本和不含CSFV病毒的樣本各6份,每份1μl,濃度為1.000mg/ml,送至具有實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)能力的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對(duì)檢測(cè)。

    1.2.4 特異性試驗(yàn)

    以選擇的反應(yīng)體系和條件為參照,擴(kuò)增模板中制備的PPV、PRV、PCV2、o-fmdv、PRRSV、CSFV的DNA,并設(shè)置陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。

    2 結(jié)果

    2.1 精密度試驗(yàn)

    精密度檢測(cè)結(jié)果顯示:第一次檢測(cè)CT值為23.1、第二次檢測(cè)CT值為23.2、第三次檢測(cè)CT值為23.3、第四次檢測(cè)CT值為23.2、第五次檢測(cè)CT值為23.6、第六次檢測(cè)CT值為23.5,變異系數(shù)為1.10%。

    2.2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

    與設(shè)計(jì)的一組樣本相比,測(cè)試結(jié)果基本一致,具有較好的CSFV檢測(cè)精度。

    2.3 特異性試驗(yàn)

    用本文方法擴(kuò)增含有CSFV的疫苗時(shí),會(huì)出現(xiàn)陽性擴(kuò)增信號(hào),而PPV、PRV、PCV2、0-fmdv、PRRSV的核酸模板沒有出現(xiàn)陽性擴(kuò)增,說明該方法具有較好的特異性。

    3 討論

    對(duì)于中國養(yǎng)豬業(yè)而言,CSFV所造成的危害十分嚴(yán)重。目前,我國有大量的CSFV疫苗生產(chǎn)企業(yè),但生產(chǎn)的疫苗質(zhì)量差異非常明顯,往往出現(xiàn)免疫失敗。此外,CSFV的臨床表現(xiàn)十分復(fù)雜,缺乏典型病例??焖?、特異、靈敏的分子生物學(xué)診斷方法的發(fā)展,有利于CSFV的快速檢測(cè)、CSFV病原陽性豬的清除和豬瘟的純化。將樣品中總RNA提取樣品,以樣品中的mRNA為模板。利用0ligo (dT)或隨機(jī)引物將逆轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后以cDNA為模板將PCR進(jìn)行擴(kuò)增,建立和應(yīng)用豬瘟病毒Taqman實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè),可以檢測(cè)到多種CSFV陽性樣品,但沒有CSFV的其他樣品沒有特異性擴(kuò)增,準(zhǔn)確度和精密度的檢測(cè)結(jié)果也是有效的,表明該方法具有較好的特異性、精密度和準(zhǔn)確度。

    綜上所述,豬瘟病毒Taqman實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)方法,敏感性.特異性、準(zhǔn)確性好,是了解豬瘟病疫情流行狀況的有效手段,有助于更好地控制豬瘟的感染和流行。

    猜你喜歡
    精密度核酸豬瘟
    測(cè)核酸
    中華詩詞(2022年9期)2022-07-29 08:33:50
    全員核酸
    中國慈善家(2022年3期)2022-06-14 22:21:55
    第一次做核酸檢測(cè)
    快樂語文(2021年34期)2022-01-18 06:04:14
    核酸檢測(cè)
    中國(俄文)(2020年8期)2020-11-23 03:37:13
    Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate dependent Rac exchange factor 1 is a diagnostic and prognostic biomarker for hepatocellular carcinoma
    副波長(zhǎng)對(duì)免疫比濁法檢測(cè)尿微量清蛋白精密度的影響
    豬瘟爆發(fā),豬肉還敢吃嗎?
    幸福(2019年12期)2019-05-16 02:27:44
    豬瘟病毒感染的診治
    淺談豬瘟防治
    海水U、Th長(zhǎng)壽命核素的高精密度MC-ICP-MS測(cè)定方法
    大竹县| 禄丰县| 离岛区| 辛集市| 东光县| 中方县| 沾化县| 眉山市| 麻阳| 出国| 碌曲县| 乌苏市| 敦化市| 拜泉县| 锡林郭勒盟| 东乡县| 南康市| 海伦市| 长治市| 澜沧| 丹凤县| 阆中市| 龙山县| 普洱| 湖口县| 盐山县| 汪清县| 湄潭县| 平阴县| 云浮市| 琼中| 台中县| 任丘市| 五家渠市| 南漳县| 汽车| 嘉荫县| 桦南县| 汽车| 大英县| 竹北市|