• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    北蟲草在雞蛋內(nèi)培養(yǎng)與制備研究

    2019-02-06 03:53:14趙慶楓高巨董鳳華丁壯陳鵬舉
    湖北畜牧獸醫(yī) 2019年12期
    關(guān)鍵詞:培養(yǎng)基

    趙慶楓 高巨 董鳳華 丁壯 陳鵬舉

    摘要:通過選育北蟲草菌種,以0.1、0.3、0.5 mL接種在360日齡無公害雞蛋尿囊腔和卵黃囊腔內(nèi),以噴霧干燥蛋蟲草粉質(zhì)量為指標,考察北蟲草在雞蛋內(nèi)培養(yǎng)與制備的影響因素。結(jié)果表明,在尿囊腔內(nèi)接種0.3 mL菌種培養(yǎng)18日齡時,菌絲體生長明顯,蛋蟲草粉質(zhì)量顯著增加。雞蛋是較好的具備多種營養(yǎng)元素的單一培養(yǎng)基,接種北蟲草菌種成功培育蛋蟲草,突破真菌微生物在液體、固體培養(yǎng)基的生長模式,簡單易行、周期短、產(chǎn)量高,為工業(yè)化生產(chǎn)北蟲草提供了新的思路和方法。

    關(guān)鍵詞:北蟲草菌種;培養(yǎng)基;尿囊腔;蟲草菌絲體;蛋蟲草

    中圖分類號:S831 ? ? ? ?文獻標識碼:A ? ? ? ?文章編號:1007-273X(2019)12-0010-04

    隨著畜禽傳染病的混合感染、慢性病、免疫抑制性和腫瘤性疾病的發(fā)生,免疫增強劑成為臨床應用醫(yī)學領(lǐng)域最活躍的研究之一[1]。北冬蟲夏草又名北蟲草、蛹蟲草,與冬蟲夏草的有效成分、營養(yǎng)價值和藥理作用相似[2,3],具有調(diào)節(jié)體液免疫和細胞免疫、抗腫瘤、保肝護腎等作用,將其作為免疫增強劑的研究越來越多[4-6]。雞蛋內(nèi)含有大量的營養(yǎng)元素,理論上能滿足北蟲草菌生長需求[7,8],適合工廠化、規(guī)?;a(chǎn)。

    試驗通過優(yōu)化固態(tài)和液體培養(yǎng)基,選育北蟲草菌種,按照一定劑量將北蟲草菌種分別接種在無公害雞蛋尿囊腔和卵黃囊腔內(nèi),在溫度、濕度、暗環(huán)境下培養(yǎng)一定時期后,根據(jù)接種劑量、部位和時間噴霧干燥蛋蟲草,以蛋蟲草粉重量為考察指標,研究北蟲草菌種在雞蛋內(nèi)生長發(fā)育最優(yōu)條件,確立合適的培養(yǎng)、制備條件,為工業(yè)化生產(chǎn)北蟲草提供技術(shù)依據(jù)和參考。

    1 ?材料與方法

    1.1 ?材料

    北蟲草菌種來源于河北省科學院微生物研究所食用菌研究室,360日齡無公害雞蛋由商水縣為農(nóng)養(yǎng)殖專業(yè)合作社提供。

    1.2 ?試劑與儀器

    高錳酸鉀、葡萄糖、KH2PO4、MgSO4、瓊脂、蛋白胨、β-環(huán)狀糊精[9]等均為分析純,75%乙醇,液體石蠟。

    LDZH-100KBS型立式壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠),PV-30/70型超凈工作臺(榮事達有限公司),SPX-100B-Z型生化培養(yǎng)箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠),SY-6000型小型噴霧干燥儀(上海世遠生物設備工程公司)。

    1.3 ?方法

    1.3.1 ?固體及液體培養(yǎng)基配伍 ?前期經(jīng)多次配伍試驗,優(yōu)化固體培養(yǎng)基[10,11]為土豆200.0 g、葡萄糖20.0 g、KH2PO4 2.5 g、MgSO4 1.5 g、瓊脂20.0 g,補水至1 000 mL,pH為7.0。液體培養(yǎng)基為葡萄糖20.0 g、瓊脂20.0 g、蛋白胨10.0 g、KH2PO4 3.0 g、MgSO4 1.5 g,超純水1 000 mL,pH為7.0。

    1.3.2 ?菌種篩選、復壯與保存 ?將北蟲草菌種在固體培養(yǎng)基斜面上劃線,28 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7 d,得到活化的北蟲草菌種,重新選擇、挑取菌落塊接種在固體培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)7 d,然后挑取菌落塊于液體培養(yǎng)基中,三角瓶裝液量為300 mL/L,28 ℃、150 r/min培養(yǎng)7~10 d,得到活化的北蟲草種子液[12]。

    1.3.3 ?無公害雞蛋選擇 ?選擇同一批360日齡蛋雞,飼養(yǎng)管理條件相同,雞蛋收集前15 d雞群未飼喂藥物,環(huán)境、飼料、飲水、防疫措施等均符合無公害雞蛋標準,隨機采集180枚雞蛋。

    1.3.4 ?消毒 ?雞蛋表面用無菌紗布擦拭后放入0.1%的高錳酸鉀清洗1 min,再用75%乙醇消毒后備用。

    1.3.5 ?接種 ?雞蛋打孔后,用1 mL無菌針在尿囊腔和卵黃囊腔內(nèi)接種北蟲草菌種低劑量(0.1 mL)、中劑量(0.3 mL)各2組,在卵黃囊腔內(nèi)接種高劑量(0.5 mL)菌種1組,對照組雞蛋不接種菌種,每組30枚雞蛋。

    1.3.6 ?培養(yǎng) ?參考北蟲草對生長環(huán)境的要求[13,14],雞蛋尿囊腔或卵黃囊腔內(nèi)接種前3 d在20 ℃、濕度60%的恒溫培養(yǎng)箱光照環(huán)境下培養(yǎng),后3 d在23 ℃、濕度70%恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)暗環(huán)境下培養(yǎng)。

    1.3.7 ?噴霧干燥 ?于雞蛋氣室處破殼剝離蛋殼,在培養(yǎng)6、12、18、24日齡時,各取樣品50 mL,加入超純水、粉碎均質(zhì)后采用4層紗布過濾,根據(jù)前期試驗優(yōu)化的工藝標準:進風溫度150 ℃、進樣量300 mL/h、空氣流量600 L/h、干燥劑比例4%進行噴霧干燥[15-17]、稱重,觀察試驗結(jié)果。

    1.4 ?數(shù)據(jù)處理

    試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0進行單因素方差分析,各組間數(shù)據(jù)的平均值采用鄧氏多重比較進行差異顯著性檢驗,測定結(jié)果以“平均值±標準誤”表示,P<0.05表示差異顯著。

    2 ?結(jié)果與分析

    2.1 ?北蟲草菌種接種劑量對蛋蟲草粉質(zhì)量的影響

    低、中劑量組噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增20.75%、34.95%,差異顯著(P<0.05);高劑量組噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增加5.23%,差異不顯著(P>0.05)。中劑量組比低劑量組增加11.76%,差異極顯著(P<0.01)。高劑量組比對照組增加5.23%,差異不顯著(P>0.05),比低劑量組減少14.74%,差異顯著(P<0.05),比中劑量組減少28.24%,差異顯著(P<0.05)(表1)。

    2.2 ?雞蛋接種部位對蛋蟲草粉質(zhì)量的影響

    尿囊腔、卵黃囊腔噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增加34.76%、15.70%,差異顯著(P<0.05)。卵黃囊腔比尿囊腔噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量減少16.47%,差異顯著(P<0.05)(表2)。

    2.3 ?接種培養(yǎng)時間對蛋蟲草粉質(zhì)量的影響

    6日齡噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增加8.03%,差異不顯著(P>0.05)。12日齡噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增加11.34%,差異顯著(P<0.05),比6日齡增加3.07%,差異顯著(P<0.05)。18日齡噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增加23.21%,差異顯著(P<0.05);比6日齡增加14.05%,差異顯著(P<0.05);比12日齡增加10.66%,差異顯著(P<0.05)。24日齡噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量比對照組增加3.49%,差異不顯著(P>0.05);比6日齡減少4.38%,差異顯著(P<0.05);比12日齡減少7.59%,差異顯著(P>0.05);比18日齡減少19.06%,差異顯著(P<0.05)(表3)。

    3 ?討論

    3.1 ?接種劑量對蛋蟲草發(fā)酵培養(yǎng)的影響

    王蓉等[18]研究人工培養(yǎng)北蟲草的接種菌種量為2.5~5.0 mL,但在雞蛋內(nèi)接種北蟲草菌種的研究目前還未見報道。本研究結(jié)果表明,在雞蛋內(nèi)接種低劑量北蟲草菌種,蛋殼膜增厚,雞蛋內(nèi)菌絲體生長發(fā)育良好,蛋蟲草粉質(zhì)量比普通雞蛋明顯增加,成功培育出蛋蟲草,雞蛋內(nèi)的氮源、碳源能滿足北蟲草菌種的生長發(fā)育,突破真菌微生物在液體、固體培養(yǎng)基的生長模式。尤其接種中劑量北蟲草菌種時,菌絲和蛋殼膜形成一體,菌絲體比低劑量北蟲草菌種生長發(fā)育更好,蛋蟲草粉質(zhì)量極顯著增加,證明雞蛋內(nèi)的營養(yǎng)能滿足一定劑量菌種的正常生長發(fā)育。但當接種劑量過大時,蛋殼膜表現(xiàn)不明顯,菌絲體生長發(fā)育受阻,蛋蟲草粉質(zhì)量比低劑量、中劑量明顯減少,說明雞蛋內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)數(shù)量有限,不能滿足足量的菌種生長發(fā)育,以接種中劑量時(0.3 mL)生長發(fā)育良好(表4、圖1、圖2)。

    3.2 ?接種部位對蛋蟲草發(fā)酵培養(yǎng)的影響

    接種部位對蛋蟲草發(fā)酵培養(yǎng)的影響結(jié)果和方華舟等[19]研究一致,在北蟲草菌種培養(yǎng)中加雞蛋為外源氮源效果良好,試驗和對照組雞蛋相比較,無論接種在尿囊腔或者卵黃囊腔內(nèi),菌絲體在蛋殼膜上生長,蛋殼膜逐漸增厚,蛋殼內(nèi)環(huán)境發(fā)生不同程度的改變,北蟲草菌種均能生長發(fā)育,但以接種在尿囊腔內(nèi)的菌絲體變化明顯,噴霧干燥的蛋蟲草粉質(zhì)量增加顯著(表4、圖3和圖4)。

    3.3 ?培養(yǎng)日齡對蛋蟲草發(fā)酵培養(yǎng)的影響

    通過觀察在雞蛋內(nèi)接種3日齡后,北蟲草菌絲體開始生長發(fā)育,蛋殼膜和菌絲膜形成一體、蛋清營養(yǎng)物質(zhì)吸收稀薄如水樣、蛋黃顏色的改變以及噴霧干燥蛋蟲草粉重量等綜合比較,在試驗前生長發(fā)育不明顯,到12日齡生長發(fā)育明顯,尤其12~18日齡時生長發(fā)育良好。但隨著日齡的增加,雞蛋內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)被菌種消耗殆盡,24日齡和對照組、6日齡、12日齡之間差異不明顯,應該是菌絲體逐漸出現(xiàn)自溶現(xiàn)象,與張楊等[20]研究關(guān)于北蟲草接種時間對培養(yǎng)基的要求基本一致(表4、圖5和圖6)。

    4 ?結(jié)論

    北蟲草天然資源數(shù)量很少,再加上大量采挖已日漸枯竭,傳統(tǒng)人工培養(yǎng)基以大米、小麥、高粱、蠶蛹粉等為主,各營養(yǎng)成分有限,對培養(yǎng)條件要求苛刻、工藝復雜、周期長,而雞蛋中含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物,能滿足北蟲草菌的營養(yǎng)需求,使之開發(fā)成具備多種營養(yǎng)的單一培養(yǎng)基質(zhì),接種后培養(yǎng)條件簡單、周期短、方法簡便,同時我國產(chǎn)蛋量大、價廉易得,因此將北蟲草菌接種在雞蛋內(nèi)培養(yǎng)適合工業(yè)化批量生產(chǎn)。

    通過試驗將北蟲草菌種接種在無公害雞蛋內(nèi),以在尿囊腔內(nèi)接種0.3 mL培養(yǎng)18日齡時,菌絲體變化明顯、蛋殼膜和菌絲膜形成一體、蛋清營養(yǎng)物質(zhì)吸收稀薄如水樣,噴霧干燥蛋蟲草粉質(zhì)量增加顯著,為北蟲草培養(yǎng)新模式提供技術(shù)依據(jù)和理論基礎(chǔ),為研制北蟲草提供新的思路和方法,為新型免疫增強劑的開發(fā)提供更多來源。

    參考文獻:

    [1] 楊其蓮,韓 ?冰,祁 ?紅.免疫增強劑的處方使用調(diào)查及其合理性評價[J].中國臨床藥學雜志,2012,21(4):213-217.

    [2] KIM H G,SONG H,YOON D H,et a1.Cordycepsproinosaex tractsinduceapo pmsis of HeLa cells by a caspase dependent pathway[J].J E thopharm a col,2010,128(2):342-351.

    [3] 王林萍,余 ?意,馮成強.冬蟲夏草活性成分及藥理作用研究進展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2014,21(7):132-136.

    [4] 黎 ?煉.青藤堿誘導未成熟樹突狀細胞對腎移植大鼠CD4+CD5+調(diào)節(jié)性T細胞及Fox3表達的影響[D].湖南衡陽:南華大學,2015(1):3.

    [5] 朱雅娟,樊麗超.腦脊液ADA和IL-23的測定對結(jié)核性腦膜炎的診斷價值[J].中國保健營養(yǎng)(中旬刊),2012(8):309.

    [6] 齊 ?賀,黃竹清,鄭劍玲,等.北蟲草復合制劑對小鼠免疫功能的影響[J].微生物學雜志,2013,33(3):63-65.

    [7] JIN C Y,KIM G Y,CHOI Y H.Induction of apoptosis by aqueousextract of cordyeepsm ilitaris through activation of caspases and inactivelion of Akt in hum an breast cancer MDA-MB-231 cells[J].J Microhiol ?Bioteehnol,2008,18(12):1997-2003.

    [8] CABONI M F,BOSELLI E,MCSSIA M C,et al.Effect of processing ?and storage on the chemical quality markers of spray-dried whole egg[J].Food chemistry,2005,92(2):293-303.

    [9] 廖才智.β-環(huán)糊精的應用研究進展[J].化工科技,2010,18(5):69-72.

    [10] 趙 ?潤,郭成金.冬蟲夏草菌絲體液體培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].天津師范大學學報:自然科學版,2008,28(1):8-11.

    [11] 程紅艷,郭 ?偉,常明昌,等.蛹蟲草菌絲體液體發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究[J].山西農(nóng)業(yè)大學學報:自然科學版,2011,31(1):66-72.

    [12] 申 ?苗,常尚連.工廠化栽培北蟲草高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)技術(shù)[J].食用菌,2017(1):42-44.

    [13] 范志微.蛹蟲草優(yōu)良菌株的篩選及其營養(yǎng)特性的分析[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學,2013.2-3.

    [14] 錢雯婕,袁青鋒,魏紅英,等.北冬蟲夏草人工栽培技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2015(14):74-75.

    [15] 李 ?潔.正交優(yōu)選柴芩退熱顆粒噴霧干燥工藝[J].江西中醫(yī)藥大學學報,2017(4):63-64,120.

    [16] 楊凈堯,王仁廣,王 ?暢,等.噴霧干燥研究進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2018,14(9):97-99.

    [17] 覃興奇,王熙珍,葉善洋,等.中藥配方顆粒貓爪草提取液噴霧干燥工藝的研究[J].藥物資訊,2018,7(1):1-6.

    [18] 王 ?蓉,董偉潔,李海薇,等.北蟲草人工培養(yǎng)條件的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2014(25):8511-8512.

    [19] 方華舟,賈 ?瑞,程利霞,等.不同培養(yǎng)基原料及配方對北冬蟲夏草液體菌種質(zhì)量的影響[J].貴州農(nóng)業(yè)科學,2011,39(2):105-109.

    [20] 張 ?楊,肖小君,張明月,等.蠶蛹蟲草人工培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)[J].貴州農(nóng)業(yè)科學,2016,44(7):65-68.

    猜你喜歡
    培養(yǎng)基
    黑木耳菌種母種復壯培養(yǎng)基的篩選
    副干酪乳桿菌RS26培養(yǎng)基優(yōu)化
    食品微生物檢驗中培養(yǎng)基的質(zhì)量管理
    Clustering of Virtual Network Function Instances Oriented to Compatibility in 5G Network
    蛹蟲草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
    各種培養(yǎng)基制作應注意的幾個事項
    不同激素配比的培養(yǎng)基對白芨增殖擴繁的影響
    不同培養(yǎng)基人工培育蟬花中有效成分的比較
    KBM581培養(yǎng)基:人T細胞誘導與擴增培養(yǎng)基應用指南
    茯磚茶中優(yōu)勢微生物在不同培養(yǎng)基的差異性比較
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:07
    亚洲精品aⅴ在线观看| 国产av国产精品国产| 国产男女内射视频| 亚洲色图综合在线观看| www日本在线高清视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲国产欧美网| 曰老女人黄片| 久久久久久久大尺度免费视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲精品视频女| 亚洲美女视频黄频| 午夜免费鲁丝| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 在线观看人妻少妇| 九草在线视频观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 男人操女人黄网站| 中文字幕最新亚洲高清| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 在线免费观看不下载黄p国产| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成人一区二区在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品久久蜜臀av无| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产 精品1| av线在线观看网站| 国产午夜精品一二区理论片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 男人操女人黄网站| 久久ye,这里只有精品| av电影中文网址| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 深夜精品福利| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产男女内射视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 1024视频免费在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品人妻久久久影院| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产免费又黄又爽又色| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲 欧美一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 秋霞伦理黄片| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产人伦9x9x在线观看 | 欧美 日韩 精品 国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲熟女精品中文字幕| 有码 亚洲区| 久久午夜福利片| 在线观看www视频免费| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美亚洲日本最大视频资源| 熟女av电影| kizo精华| 永久网站在线| 亚洲av.av天堂| 免费观看无遮挡的男女| 我要看黄色一级片免费的| 美国免费a级毛片| 久久韩国三级中文字幕| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产综合精华液| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久影院123| 久久青草综合色| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲内射少妇av| 精品一区在线观看国产| 国产精品三级大全| 男女国产视频网站| 久久午夜福利片| 韩国高清视频一区二区三区| av在线老鸭窝| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 五月伊人婷婷丁香| 9色porny在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 在线观看一区二区三区激情| 免费高清在线观看日韩| 成人国产av品久久久| 波多野结衣一区麻豆| 国产男人的电影天堂91| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 中文字幕精品免费在线观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品免费大片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 精品一品国产午夜福利视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 成人国语在线视频| 亚洲一区中文字幕在线| 午夜福利一区二区在线看| 免费观看在线日韩| 成人国产av品久久久| 色视频在线一区二区三区| 下体分泌物呈黄色| 亚洲欧美成人精品一区二区| 18在线观看网站| 亚洲综合色网址| www.精华液| 国产人伦9x9x在线观看 | 亚洲精品一区蜜桃| 一区二区三区激情视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久久精品免费免费高清| 免费观看在线日韩| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲精品国产av成人精品| 新久久久久国产一级毛片| 看十八女毛片水多多多| 亚洲av.av天堂| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲av综合色区一区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美激情高清一区二区三区 | 最近最新中文字幕免费大全7| 日日爽夜夜爽网站| 香蕉精品网在线| 亚洲,欧美,日韩| 超色免费av| 免费av中文字幕在线| 亚洲精品日本国产第一区| 男女午夜视频在线观看| 黄频高清免费视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 搡老乐熟女国产| 一二三四在线观看免费中文在| 美女中出高潮动态图| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日本欧美国产在线视频| 欧美在线黄色| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品欧美亚洲77777| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品亚洲成国产av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 丰满乱子伦码专区| 妹子高潮喷水视频| 亚洲,欧美,日韩| 国产一区二区三区av在线| 国产精品女同一区二区软件| 丝袜在线中文字幕| 精品酒店卫生间| 日韩中字成人| 一级毛片我不卡| 波多野结衣av一区二区av| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 免费看av在线观看网站| 黄色配什么色好看| 精品国产一区二区久久| 9色porny在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜免费鲁丝| 国产深夜福利视频在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| xxx大片免费视频| 老司机亚洲免费影院| 国产成人精品一,二区| 国产福利在线免费观看视频| 多毛熟女@视频| 亚洲四区av| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 交换朋友夫妻互换小说| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 满18在线观看网站| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲伊人色综图| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 成人国产av品久久久| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一级片'在线观看视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲五月色婷婷综合| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精品欧美亚洲77777| av在线播放精品| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| av有码第一页| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲欧美色中文字幕在线| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品欧美亚洲77777| 性色av一级| 国产一区二区激情短视频 | 免费日韩欧美在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产高清不卡午夜福利| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 欧美人与性动交α欧美软件| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文欧美无线码| 啦啦啦在线免费观看视频4| 欧美成人午夜免费资源| 人体艺术视频欧美日本| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一级a爱视频在线免费观看| 伦精品一区二区三区| 久久这里只有精品19| 老司机亚洲免费影院| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成人国产麻豆网| 不卡av一区二区三区| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲av.av天堂| 亚洲成人手机| 男女无遮挡免费网站观看| 国产黄色免费在线视频| 精品国产国语对白av| 国产成人精品一,二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 免费观看性生交大片5| 韩国精品一区二区三区| 伊人亚洲综合成人网| xxxhd国产人妻xxx| 波多野结衣av一区二区av| 日本午夜av视频| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 黑丝袜美女国产一区| 高清av免费在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 中文字幕亚洲精品专区| 欧美日韩综合久久久久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一区二区三区乱码不卡18| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本黄色日本黄色录像| 人体艺术视频欧美日本| 香蕉丝袜av| 国产一区二区在线观看av| 国产亚洲欧美精品永久| 久久青草综合色| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 精品一区二区三卡| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产白丝娇喘喷水9色精品| av在线观看视频网站免费| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 大码成人一级视频| 久久99热这里只频精品6学生| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 天天操日日干夜夜撸| 日本av免费视频播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 在线观看三级黄色| 有码 亚洲区| 老司机亚洲免费影院| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产av精品麻豆| 日韩伦理黄色片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 免费黄频网站在线观看国产| 免费观看在线日韩| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产激情久久老熟女| 飞空精品影院首页| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久久久精品精品| 1024香蕉在线观看| av片东京热男人的天堂| 久热久热在线精品观看| 老鸭窝网址在线观看| 国产片内射在线| 丝瓜视频免费看黄片| 一级,二级,三级黄色视频| 精品少妇内射三级| 少妇的逼水好多| 国产 一区精品| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产乱人偷精品视频| 久久99蜜桃精品久久| 婷婷色综合www| 在线精品无人区一区二区三| 国产一区亚洲一区在线观看| 999久久久国产精品视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 制服人妻中文乱码| 国产日韩欧美在线精品| 极品人妻少妇av视频| 国产一级毛片在线| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品不卡视频一区二区| 国产高清国产精品国产三级| 欧美av亚洲av综合av国产av | www.熟女人妻精品国产| 免费黄频网站在线观看国产| 男女边摸边吃奶| 99久久精品国产国产毛片| www.av在线官网国产| 丰满乱子伦码专区| 午夜影院在线不卡| av片东京热男人的天堂| 成年av动漫网址| 日韩中字成人| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产有黄有色有爽视频| 高清不卡的av网站| 深夜精品福利| 国产精品免费大片| 日日啪夜夜爽| 日韩中字成人| 妹子高潮喷水视频| 2022亚洲国产成人精品| 青春草国产在线视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 精品人妻熟女毛片av久久网站| av网站在线播放免费| 久热久热在线精品观看| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品久久久久成人av| 国产精品.久久久| 制服人妻中文乱码| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲av男天堂| 亚洲少妇的诱惑av| 制服诱惑二区| 亚洲精品在线美女| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 夫妻午夜视频| 久热这里只有精品99| 一本色道久久久久久精品综合| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 18在线观看网站| 在线观看免费高清a一片| 欧美成人午夜免费资源| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲精品,欧美精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 老熟女久久久| 欧美激情高清一区二区三区 | 激情视频va一区二区三区| 老女人水多毛片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 高清黄色对白视频在线免费看| 一边亲一边摸免费视频| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲,欧美,日韩| 99热国产这里只有精品6| 热re99久久国产66热| av在线老鸭窝| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲国产精品一区三区| 另类精品久久| 免费高清在线观看日韩| 日本色播在线视频| 热re99久久国产66热| 久久久久久久大尺度免费视频| 黄色配什么色好看| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品av麻豆狂野| 男人舔女人的私密视频| 超色免费av| 亚洲欧美一区二区三区国产| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 熟女av电影| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲五月色婷婷综合| 男女免费视频国产| 99九九在线精品视频| 在线天堂中文资源库| 青青草视频在线视频观看| 久久久欧美国产精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 日韩制服丝袜自拍偷拍| 制服诱惑二区| 99热全是精品| 中文天堂在线官网| 女性被躁到高潮视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 中文字幕人妻熟女乱码| 三级国产精品片| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲精品日本国产第一区| 最近中文字幕2019免费版| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲男人天堂网一区| av一本久久久久| 国产又爽黄色视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久亚洲国产成人精品v| 黄色怎么调成土黄色| 国产精品.久久久| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 只有这里有精品99| 国产精品久久久久久久久免| 99热网站在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 久久久国产一区二区| 免费少妇av软件| 搡女人真爽免费视频火全软件| av线在线观看网站| 成人国产麻豆网| 男人舔女人的私密视频| 一区二区av电影网| 亚洲内射少妇av| 男人舔女人的私密视频| 一区二区av电影网| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日本wwww免费看| 飞空精品影院首页| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲成人av在线免费| 丝袜美足系列| 久久国产精品大桥未久av| 男男h啪啪无遮挡| 看十八女毛片水多多多| 热re99久久国产66热| 天堂中文最新版在线下载| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美激情高清一区二区三区 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久久精品性色| 成人毛片a级毛片在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 精品久久久精品久久久| 大香蕉久久网| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 热re99久久国产66热| 亚洲人成77777在线视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 老汉色av国产亚洲站长工具| 看免费av毛片| 国产一区二区激情短视频 | 午夜精品国产一区二区电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 国产欧美日韩一区二区三区在线| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲美女搞黄在线观看| 精品久久久久久电影网| 一个人免费看片子| 最黄视频免费看| 国产精品国产三级国产专区5o| 青草久久国产| 久久久久久人人人人人| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品在线美女| 亚洲综合色惰| 欧美97在线视频| 777米奇影视久久| 国产日韩欧美在线精品| 久久久国产一区二区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久国产一区二区| 国产av一区二区精品久久| 国产成人免费观看mmmm| 一个人免费看片子| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| av免费观看日本| 亚洲成人一二三区av| 2022亚洲国产成人精品| 韩国av在线不卡| 日韩一本色道免费dvd| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 日韩中字成人| www.自偷自拍.com| 女人精品久久久久毛片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产精品三级大全| 午夜福利,免费看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久av网站| 久久 成人 亚洲| 99国产综合亚洲精品| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 女人精品久久久久毛片| 男女无遮挡免费网站观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 水蜜桃什么品种好| 看非洲黑人一级黄片| 国产亚洲精品第一综合不卡| 高清av免费在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 2018国产大陆天天弄谢| 岛国毛片在线播放| 婷婷色综合www| 美女大奶头黄色视频| 国产精品一二三区在线看| 香蕉国产在线看| 国产深夜福利视频在线观看| 精品午夜福利在线看| 另类亚洲欧美激情| 一级毛片电影观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 中文天堂在线官网| 热re99久久精品国产66热6| 青草久久国产| 中文字幕制服av| 国产成人91sexporn| 国产xxxxx性猛交| 亚洲综合色网址| 亚洲在久久综合| 9191精品国产免费久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 99久久精品国产国产毛片| 国产黄频视频在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产成人精品婷婷| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩免费高清中文字幕av| 男女啪啪激烈高潮av片| 如何舔出高潮| av片东京热男人的天堂| 青春草视频在线免费观看| 多毛熟女@视频| 人妻一区二区av| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲 欧美一区二区三区| 最近中文字幕2019免费版| 一本久久精品| 视频在线观看一区二区三区| 久热久热在线精品观看| 成人国产av品久久久| 中文字幕色久视频| 精品亚洲成国产av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 伊人久久国产一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 制服丝袜香蕉在线| 18禁观看日本| www.熟女人妻精品国产| 国产av码专区亚洲av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产激情久久老熟女| 精品酒店卫生间| 亚洲五月色婷婷综合| 久久这里只有精品19| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产伦理片在线播放av一区| 黄色怎么调成土黄色| 欧美激情极品国产一区二区三区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 不卡视频在线观看欧美| 久久韩国三级中文字幕| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲国产色片| 街头女战士在线观看网站| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品国产av在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 香蕉丝袜av| 一二三四在线观看免费中文在| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| av线在线观看网站| 高清av免费在线| 亚洲在久久综合| 一本久久精品| 亚洲av国产av综合av卡| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美成人精品欧美一级黄| 极品人妻少妇av视频| 久久这里有精品视频免费| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久精品人妻al黑| 高清不卡的av网站|