Pgp1和FoxP3在結直腸癌中的表達及其與預后的關系

陸志紅，蔡衛(wèi)梅，孔靈利，劉新玲，康小紅

(新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬腫瘤科，河南 衛(wèi)輝453100)

結腸癌是常見消化道腫瘤，患者確診時大多已處于晚期，5年生存率僅在40%左右。研究[1]證實處于不同病理分期結腸癌患者的疾病預后顯著不同，故而，現(xiàn)臨床研究嘗試從生物學因子的角度預測患者預后并取得了一定的進展。

Pgp1作為重要的細胞黏附因子，具有促進細胞運動、調(diào)節(jié)上皮細胞-間質(zhì)轉化、參與腫瘤轉移侵襲及抑制腫瘤凋亡的作用，此外多項研究[2，3]發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的進展期可見Pgp1的高表達，并提示其可能與腫瘤的預后關系密切。機體抗腫瘤系統(tǒng)中核轉錄因子FoxP3是T細胞中最具有特異性的標記因子，其在胰腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤中均存在高表達，但關于結腸癌的研究仍存在分歧[4]。故此，本研究探討了Pgp1和FoxP3在結直腸癌中的表達及其與預后的關系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2015年2月我院保存的結直腸癌標本106例，其中男性68例，女性38例，年齡34～73歲，中位年齡50歲，同時選取癌旁組織（距癌邊緣＞5cm）標本64例作為對照，其中男性37例，女性27例，年齡31～71歲，中位年齡48歲。納入標準：⑴均經(jīng)病理組織學確診；⑵能獲得隨訪資料；⑶術前未行任何抗腫瘤治療；⑷簽署標本留取知情同意書。排除標準：⑴臨床隨訪資料不完整；⑵伴有其他惡性腫瘤者。

1.2 免疫組化染色法 采用免疫組化染色法檢測Pgp1和FoxP3表達水平；兔抗人Pgp1和FoxP3多克隆抗體均購于美國GE公司；DAB顯色盒、免疫組化試劑盒等相關試劑盒及染色液均購于南京建成生物研究所。適量組織常規(guī)石蠟切片，梯度水化；熱抗原修復，10min過氧化物酶修復；山羊血清1h封閉；分別滴加Pgp1和FoxP3抗體，孵育（4℃）過夜；PBS緩沖液3次沖洗；滴加二抗（辣根過氧化物酶標記）；1h室溫孵育，PBS3次沖洗；DAB顯色，蘇木素復染；自來水沖洗反藍后梯度脫水，中性膠封片，高倍顯微鏡下觀察[5]。

1.3 隨訪方法 前2年，6月/次門診隨訪，共持續(xù)5年，之后1年/次，常規(guī)血液檢測并定期進行CT和結腸鏡檢查[6]。

1.3 判斷標準 Pgp1和FoxP3以胞質(zhì)或包膜出現(xiàn)黃色顆粒為陽性表現(xiàn)，采用半定量積分法，對染色輕度和陽性細胞比例進行評分，染色強度無著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例≤10%為1分，11%～50%為2分，＞50%為3分。兩者得分之積≥3分為陽性表達[7]。

1.4 統(tǒng)計學處理 統(tǒng)計分析采用SPSS 19.0軟件，計數(shù)資料比較使用χ2檢驗，生存分析采用Kaplan-Meier法，比較采用Log-rank法。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 結直腸癌與癌旁組織Pgp1和FoxP3表達比較結直腸癌組織Pgp1和FoxP3蛋白陽性表達率分別為63.21%和43.40%，明顯高于癌旁組織，差異比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 見表1。

表1 結直腸癌與癌旁組織Pgp1和FoxP3表達比較

2.2 Pgp1和FoxP3表達與結直腸癌臨床病理特征關系 Pgp1蛋白陽性表達與腫瘤部位有關 （P＜0.05），與年齡、性別、TNM 分期、分化程度、淋巴結轉移、腫瘤直徑和治療方案無關 （P＞0.05）；FoxP3表達與患者臨床病理特征以及治療方案無關 （P＞0.05）。 見表 2。

2.3 Pgp1和FoxP3表達與結直腸癌預后的關系根據(jù)Pgp1和FoxP3表達情況，將患者分為Pgp1和FoxP3雙陰性表達 （A組），Pgp1單陽性表達（B組）、FoxP3單陽性表達 (C組)，Pgp1和FoxP3雙陽性表達（D組），分別為19例、41例、20例和26例。截止隨訪時間2018年3月，B組中位總體生存時間為 52 個月 （95%CI：40.01～63.99）， 明顯高于 A組、D 組和 C 組 （χ2=10.547、9.844 和 17.344，P＜0.05），A組和D組中位總體生存時間為40個月（95%CI：31.20～48.80） 和 34 個月 （95%CI：30.74～37.26），明顯高于C組的24個月 （95%CI：18.56～29.44），比較差異具有統(tǒng)計學意義 （χ2=8.714和8.620，P＜0.05）。見圖 1。

3 討論

結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，占胃腸道腫瘤的第二位。好發(fā)部位為直腸及直腸與乙狀結腸交界處，占60%。發(fā)病多在40歲以后，男女之比為2：1[8]。盡管手術、靶向治療及放化療已在結直腸癌的治療中取得了滿意的療效，但總體5年生存率仍處于較低的水平，僅為50%左右，其中30%的晚期結直腸患者在較短的時間內(nèi)即可出現(xiàn)疾病的進展[9]。故而，如何更加準確地評估疾病的發(fā)展和預后已成為臨床研究的重要方向。

表2 Pgp1和FoxP3表達與結直腸癌臨床病理特征關系

圖1 生存曲線

Pgp1蛋白具有與ATP結合重要位點，Pgp1可結合ATP并在ATP提供能量的基礎上將阿霉素及長春新堿等相關藥物泵入細胞期內(nèi)或泵出細胞外，降低細胞內(nèi)的藥物濃度，降低藥物對細胞的毒性，進而形成癌細胞耐藥性，這提示Pgp1蛋白與腫瘤治療的預后具有重要關系[10，11]。研究[12]證實機體局部的免疫反應和免疫狀態(tài)可影響腫瘤組織的轉移及發(fā)展，其中T淋巴細胞的免疫抑制調(diào)節(jié)作用愈加受到關注。資料[13，14]提示腫瘤浸潤Tregs數(shù)量下降可提高腫瘤免疫反應強度，其中FoxP3是最具特異性標記的Tregs影響因子，對Tregs的正常發(fā)育及免疫系統(tǒng)平衡具有重要的調(diào)節(jié)作用。

本研究結果顯示結直腸癌組織Pgp1和FoxP3蛋白陽性表達率分別為63.21%和43.40%，明顯高于癌旁組織 （P＜0.05）。上述結果提示 Pgp1和FoxP3蛋白在結直腸癌中存在高表達，具有成為結直腸癌早期診斷、術前評估及預后重要指標的潛力。

結腸癌Pgp1蛋白陽性表達率為78.95%，明顯高于直腸癌（P＜0.05）；FoxP3表達與患者臨床病理特征以及治療方案無明顯關系（P＞0.05）。上述結果提示Pgp1和FoxP3表達與結直腸癌臨床病理特征關系較弱，其中僅Pgp1表達與腫瘤位置有一定關系。FoxP3的蛋白表達主要定位于腫瘤細胞的胞漿和包膜，周圍淋巴細胞亦可見表達，部分有包膜加強的表現(xiàn)，但與臨床病理特征的相關性不高，可能與本研究樣本量較少有關，還需要大樣本量研究證實。

預后結果顯示B組中位總體生存時間為52個月明顯高于A組、D組和C組 （P＜0.05）；A組和D組中位總體生存時間為40個月和34個月明顯高于C組的24個月比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。上述結果提示gp1和FoxP3表達與結直腸癌患者預后有一定關系，其中Pgp1陽性表達，F(xiàn)oxP3陰性表達者預后較好。這與吳帆[15]研究結果相符，Pgp1低表達提示患者預后差，這可能與本研究患者I-Ⅱ期患者較多有關，但相關機制還有待進一步深入探討證實。

綜上所述，Pgp1和FoxP3表達與結直腸癌臨床病理特征關系較弱，其中僅Pgp1表達與腫瘤位置有一定關系；Pgp1和FoxP3表達與結直腸癌患者預后有一定關系，其中Pgp1陽性表達，F(xiàn)oxP3陰性表達者預后較好。