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    啤酒中微生物的衛(wèi)生檢查與結(jié)果分析

    2019-01-28 07:16:12陳光申
    現(xiàn)代食品 2018年22期
    關(guān)鍵詞:平皿大腸菌群總數(shù)

    ◎ 陳光申

    (武漢輕工大學(xué)生物與制藥工程學(xué)院,湖北 武漢 430023)

    啤酒是世界上消費量最大的酒類飲料,全球啤酒產(chǎn)量連續(xù)多年保持增長;啤酒作為一種含二氧化碳的、起泡的、低酒精度發(fā)酵酒,在全球倍受歡迎。目前,我國是世界上最大的飲料酒生產(chǎn)和消費國,酒類品種繁多,釀造歷史悠久,是世界上產(chǎn)業(yè)規(guī)模最大的國家之一[1]。中國是全球啤酒市場中人均消費量增長最快的國家。2002年,中國啤酒總產(chǎn)量達2 386.83萬t,位居世界第一,并連續(xù)16年蟬聯(lián)。2013年,中國啤酒企業(yè)年總產(chǎn)量為5 061.54萬t,同比增長4.59%[2]。隨著啤酒行業(yè)的發(fā)展,消費者對啤酒質(zhì)量的要求提高,在制作與銷售過程中的啤酒質(zhì)量控制極為關(guān)鍵,作為食品監(jiān)測中的一項,對啤酒微生物進行檢查與分析具有重要意義。

    1 材料與方法[3-5]

    1.1 材料

    成品熟啤(市場在售啤酒隨機取樣)、無菌培養(yǎng)皿(Φ90 mm)、無菌吸管(1 mL、10 mL)、無菌生理鹽水、無菌試管、酒精燈、開瓶器、無菌紗布、無菌三角瓶、平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基以及煌綠乳糖膽鹽(BGLB),雙料月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST),1 mol·L-1NaOH,1 mol·L-1HCl,單料月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST),pH試紙,接種環(huán),超凈工作臺及電爐(微波爐)等。

    1.2 樣品的采取與預(yù)處理

    瓶裝啤酒采用原包裝樣品,取原包裝兩瓶;用滅菌容器采取500 mL散裝樣品,放入滅菌磨口瓶中。

    在對啤酒取樣時,將瓶蓋部分浸入75%的乙醇1 min后用火灼燒,用石炭酸紗布蓋好,再用滅菌開瓶器啟開,由于啤酒含二氧化碳,可倒500 mL滅菌磨口瓶中,口勿蓋緊;覆蓋滅菌布,輕輕搖蕩5 min,待氣體全部逸出后,進行檢驗。散裝酒類,可直接吸取檢驗。

    使用無菌1 mol·L-1NaOH調(diào)節(jié)樣品酒pH至6.5~7.5。

    1.3 菌落總數(shù)的測定

    啤酒中菌落總數(shù)測定常用有2種測定方法:平板菌落計數(shù)法和菌落總數(shù)PetrifilmTM。

    ①測試片法。平板菌落計數(shù)是將啤酒經(jīng)過一系列處理后進行計數(shù)。②菌落總數(shù)PetrifilmTM法則是將啤酒樣液滴入含有培養(yǎng)基和指示劑的紙片上進行培養(yǎng),紙片大多是滅菌濾紙、纖維膜、膠膜等,不同的培養(yǎng)基配置原料、方法、消毒滅菌過程等會影響PetrifilmTM的效果。

    1.3.1 樣品的稀釋

    ①采用無菌操作吸取25 mL預(yù)處理后的啤酒樣品,放置于裝有225 mL無菌生理鹽水的滅菌錐形瓶內(nèi),振蕩,混合成1∶10的均勻樣品稀釋液。②無菌操作吸取1 mL 1∶10稀釋液,注入含有9 mL無菌生理鹽水的無菌試管內(nèi),振蕩,混合成1∶100的均勻樣品稀釋液。③同上,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用1支1 mL無菌吸管。

    1.3.2 樣品的處理

    取稀釋后的樣品均液和空白稀釋液(不含啤酒樣品的無菌生理鹽水)各1 mL,注入無菌平皿中,每個稀釋度做兩個平皿。配制好的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(PCA)冷卻到46 ℃后,注入平皿中約15 mL,并轉(zhuǎn)動平皿,混合均勻??瞻紫♂屢旱臒o菌平皿做空白對照。

    為使菌落均勻的分布在平板上,均勻樣品稀釋液加入平皿后,應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并且旋轉(zhuǎn)混合均勻,可以正反兩個方向旋轉(zhuǎn),從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20 min,以防止細(xì)菌死亡或繁殖。

    1.3.3 培養(yǎng)

    待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平板,將其放置在(36±1)℃條件下培養(yǎng)(48±2)h。

    1.3.4 菌落計數(shù)

    培養(yǎng)規(guī)定時間后,立即計數(shù)??梢杂萌庋塾^察,必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器檢查,以防止遺漏。記錄各平板的菌落總數(shù),求出菌落總數(shù)。

    1.3.5 菌落總數(shù)的計算方法

    (1)若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)(30~300 CFU),計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每克(毫升)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

    (2)若有兩個連續(xù)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時,按公式(1)計算:

    式(1)中:N—樣品中菌落數(shù);∑C—平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;n1—第一個適宜稀釋度的平板數(shù);n2—第二個適宜稀釋度的平板數(shù);d—稀釋因子(第一稀釋度)。

    1.3.6 結(jié)果報告

    若空白平皿中沒有菌落,并且兩個平行平皿中菌落數(shù)相近,則菌落總數(shù)為兩平皿中的菌落平均數(shù);若空白平皿中有菌落或兩平行平皿中的菌落總數(shù)相差太大,則該實驗需要重做。

    1.4 大腸菌群的測定

    1.4.1 樣品的稀釋

    同1.3.1,但從制備樣品均液至樣品接種完畢全程應(yīng)15 min內(nèi)。

    1.4.2 初發(fā)酵與復(fù)發(fā)酵試驗

    第一步是初發(fā)酵,培養(yǎng)基是月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)。每個樣品需接種9個裝有小倒管的培養(yǎng)基試管。其中3個試管是雙料管,其余6個是單料管。取10 mL預(yù)處理樣品接種在3個雙料管和單料管中。經(jīng)過(36±1)℃培養(yǎng)(24±2)h后,觀察發(fā)酵管中的小倒管中是否有氣泡產(chǎn)生,如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至(48±2)h,記錄24 h和48 h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管數(shù)。都未產(chǎn)氣者,可直接判定該樣品的大腸菌群為陰性。產(chǎn)氣者需進行復(fù)發(fā)酵。其操作是:用接種環(huán)從所有(48±2)h內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的LST肉湯管中取培養(yǎng)物1環(huán),移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基(BGLB)復(fù)發(fā)酵管中,再經(jīng)(36±1)℃培養(yǎng)(48±2)h后,觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者,計為大腸菌群陽性管。

    1.4.3 大腸桿菌計數(shù)

    初發(fā)酵未產(chǎn)氣者,可直接判定為大腸桿菌陰性,復(fù)發(fā)酵產(chǎn)氣者,計為大腸桿菌陽性,根據(jù)大腸菌群陽性管數(shù)和接種量,查大腸菌群檢索MPN表,報告每克(或毫升)該樣品中大腸菌群的MPN值。

    2 結(jié)果與分析

    啤酒的微生物部分衛(wèi)生要求[6]如表1。

    表1 啤酒的微生物要求表

    其中,菌落總數(shù)指的是啤酒經(jīng)過處理,1 mL啤酒在平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基上在(36±1)℃條件下培養(yǎng)(48±2)h后,生長出來的微生物菌落總數(shù)。

    菌落總數(shù)作為判定食品被污染程度的標(biāo)志,也可以用這一方法觀察細(xì)菌在啤酒中繁殖的動態(tài),以便對啤酒樣品進行衛(wèi)生學(xué)評價時提供依據(jù)。

    本檢測中的大腸桿菌指在(36±1)℃培養(yǎng)(48±2)h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群的數(shù)量以每100 mL啤酒中最可能數(shù)來表示。

    由于大腸菌群直接或間接來源于人以及溫血動物的糞便。大腸菌群在啤酒的衛(wèi)生檢查中有2方面的意義。①受糞便污染的指標(biāo)菌。用來衡量啤酒生產(chǎn)過程中的操作衛(wèi)生狀況。②可作為腸道致病菌污染啤酒的指示菌。大腸菌群數(shù)量越大,啤酒中腸道致病菌存在的可能性越大。

    對啤酒樣品菌落總數(shù)重復(fù)測定10次,并對每個樣品做兩個平行測定,菌落總數(shù)、大腸桿菌測定結(jié)果如表2、表3。

    表2 樣品中菌落測定結(jié)果表

    表3 大腸桿菌測定結(jié)果表

    對比國家標(biāo)準(zhǔn)可以看出,該批次啤酒樣品微生物衛(wèi)生檢查結(jié)果為合格。

    3 討論

    啤酒作為人們社會生活中主要的酒類消費品之一,其質(zhì)量與安全不僅影響著生產(chǎn)企業(yè)的利益,更關(guān)乎消費者的身體健康。就要求啤酒生產(chǎn)企業(yè)嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)對啤酒進行微生物衛(wèi)生檢查;在生產(chǎn)過程中,要有明確的衛(wèi)生控制與詳細(xì)的微生物檢驗標(biāo)準(zhǔn)??傊?,只有徹底消除啤酒中有害微生物或?qū)⒂泻ξ⑸飻?shù)量控制在一定范圍內(nèi),才能生產(chǎn)出高質(zhì)量的、符合消費者需求的、產(chǎn)品穩(wěn)定性強的啤酒。因此,對啤酒中微生物的檢測與分析,具有十分重要的意義。

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