橙皮苷栓劑的研制及質(zhì)量評價

金輝，林迦勒，王陳翔，周子曄

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 藥學(xué)部，浙江 溫州 325015）

痔瘡是一種由于肛門部位靜脈叢發(fā)生病理性改變而導(dǎo)致的慢性疾病。痔瘡的主要致病原因是直腸下段黏膜和肛管皮膚下的靜脈叢淤血、擴張和屈曲，主要臨床表現(xiàn)是靜脈團破裂導(dǎo)致的便血，嚴(yán)重時伴有血栓或炎癥導(dǎo)致的腫脹和疼痛?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療痔瘡的主要目的是解除痔瘡的臨床癥狀，而非通過手術(shù)消除痔體[1]。

橙皮苷是一種天然黃酮類衍生物，具有雙氫黃酮氧苷結(jié)構(gòu)，可以從蕓香科植物酸橙或甜橙的干燥果皮提取獲得，同時也廣泛存在于豆科、唇形花科、蝶形花科等多種植物中[2]。橙皮苷具有維生素P樣作用，能增強毛細血管韌性，維持血管正常滲透壓，縮短出血時間[3-4]，同時還具有抗炎作用，這與臨床治療痔瘡的思路一致。目前國內(nèi)外用于治療痔瘡的橙皮苷劑型只有片劑，未見橙皮苷栓劑的臨床應(yīng)用報道，如能將其制成栓劑直接作用于給藥部位治療痔瘡，臨床應(yīng)用前景將會十分廣闊。本課題通過制備橙皮苷栓劑，并對其進行質(zhì)量評價，為橙皮苷新劑型的開發(fā)提供藥劑學(xué)實驗數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試劑 橙皮苷原料藥（批號20160215，浙江龍游振強生物科技有限公司）；橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品（純度96.1%，批號110721-201617，國家食品藥品檢定研究院）；聚乙二醇400（批號150815，江蘇彤盛化學(xué)試劑有限公司）；聚乙二醇6000（批號20140711，上海 國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；甘油、液體石蠟（南昌白云藥業(yè)有限公司）；二甲基亞砜（北京索萊寶科技有限公司）；甲醇（色譜純，美國SPECTAUM有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器 Waters 600E-2487高效液相色譜儀（美國Waters有限公司）；RBY-4型自動融變時限儀（天津天光儀器有限公司）；SJM-10型栓劑模型（長沙常宏制藥機械設(shè)備廠）；AB135-S/FACT電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo儀器有限公司）；90-1B恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器有限公司）。

1.3 橙皮苷栓劑的制備

1.3.1 處方選擇及配比：處方選聚乙二醇400、聚乙二醇6000、甘油為基質(zhì)，以三者的配比進行正交分析考察，根據(jù)前期預(yù)實驗和橙皮苷的理化特點，最終確定1:5:1為最優(yōu)配比。同時考察基質(zhì)與藥物橙皮苷的比例，當(dāng)它們配比為4:1時，能兼顧載藥量與 栓劑外觀。栓劑配方最終如下：栓劑總質(zhì)量為2 g，其中含0.4 g橙皮苷，0.23 g聚乙二醇400，1.14 g聚乙二醇6000，0.23 g甘油。

1.3.2 制備工藝：采用熱熔法制備栓劑[5]，按10粒栓劑制備量分別稱取聚乙二醇400 2.3 g、聚乙二醇6000 11.5 g、甘油2.3 g至50 mL燒杯，放至攪拌器上80 ℃融化攪拌，混合均勻；稱取橙皮苷微粉4 g至上述燒杯中，持續(xù)加熱攪拌30 min，使藥物與基質(zhì)充分混合均勻；用注射器抽取混勻的含藥基質(zhì)3 mL，快速注入含少量脫模劑（石蠟）的栓模 中，待其冷卻凝固，削去溢出部分，脫模即得。

1.4 栓劑的質(zhì)量評價

1.4.1 栓劑外觀檢查：按照要求，栓劑外觀應(yīng)完整光滑，顏色均勻一致，無軟化、變形或干裂，藥物和基質(zhì)完全混合。

1.4.2 重量差異檢查：根據(jù)《中華人民共和國藥典》[6]規(guī)定：取10粒栓劑，精密稱定總質(zhì)量，得平均粒重。然后精密稱定各粒質(zhì)量，該質(zhì)量與平均粒重相比，超出質(zhì)量差異限度的粒數(shù)不應(yīng)多于1粒，質(zhì)量的超出不應(yīng)超過限度1倍。

1.4.3 融變時限：取3粒栓劑，按《中華人民共和國藥典》[6]融變時限檢查裝置，基質(zhì)為水溶性的栓劑應(yīng)在60 min內(nèi)完全溶解。如有1粒不合格應(yīng)再復(fù)測3粒，直至達到規(guī)定要求。

1.4.4 藥物含量的測定

1.4.4.1 色譜條件：X-Bridge C18色譜柱（4.6× 150 mm，5 μm），流動相A（1.3%醋酸水溶液，pH= 2.76）:B（甲醇）=66:34；檢測波長275 nm；柱溫 40 ℃；流速1.0 mL·min-1；進樣量為20 μL。

1.4.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，放于10 mL容量瓶中，加入二甲基亞砜定容，得1 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。精密稱取10 mg秋水仙堿，置100 mL容量瓶中，用純化水定容，得100 μg·mL-1內(nèi)標(biāo)溶液。移取1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液適量，用0.1 mol·L-1的NaOH溶液依次配成濃度為10、50、100、250、500 μg·mL-1的工作液。在各濃度工作液100 μL中加入10 μL內(nèi)標(biāo)溶液，分別20 μL進樣高效液相（high performance liquid chromatography，HPLC）測定，以橙皮苷濃度C為橫坐標(biāo)，橙皮苷峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值R為縱坐標(biāo)做線性回歸。

1.4.4.3 準(zhǔn)確度試驗：按“1.4.4.2”項下工作液配制方法平行配制低、中、高3種濃度（40、250、400 μg·mL-1）的橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液各3份，依上述色譜條件HPLC進樣，分別測定各濃度溶液和內(nèi)標(biāo)的峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算橙皮苷濃度，該濃度與理論濃度的比值即為準(zhǔn)確度。

1.4.4.4 精密度試驗：按“1.4.4.2”項下工作液配制方法平行配制低、中、高3種濃度（40、250、400 μg·mL-1）的橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液各6份，分別于室溫條件下放置0、3、6 h后測定，4 ℃條件下保存 0、3、7 d后測定，依上述色譜條件HPLC進樣，計算橙皮苷的濃度，得精密度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）。

1.4.4.5 回收率試驗：取成品栓劑一枚碾碎后溶于500 mL 0.1 mol·L-1NaOH溶液，充分振搖使其溶解，溶液經(jīng)0.46 μm微孔濾膜濾過，取濾液1 mL至10 mL容量瓶稀釋定容，移取100 μL按“1.4.4.2”項下方法操作，進樣HPLC測得樣品濃度C1。將橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品加入到樣品溶液中，分別配成含橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品濃度為40、250、400 μg·mL-1的低、中、高加樣溶液，各濃度平行配制3份，按“1.4.4.2”項下方法處理后HPLC進樣測定，得樣品濃度C2，（C2-C1）的實際測定值與加入橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度的比值即為橙皮苷栓的加樣回收率。

1.4.4.6 含量均勻度分析：取三批橙皮苷栓劑樣 品，按“1.4.4.5”項下方法處理后得樣品溶液， 20 μL進樣HPLC測定橙皮苷濃度，每批次樣品平行操作5次，并對其含量均勻度進行分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理方法 采用統(tǒng)計軟件SPSS19.0進行統(tǒng)計分析。所有數(shù)據(jù)以±s表示。

2 結(jié)果

2.1 外觀色澤 橙皮苷栓表面光滑完整，呈子彈型，栓體棕色，25 ℃室溫條件下成型良好，硬度適宜，無軟化、變形、開裂等現(xiàn)象。

2.2 重量差異 取10粒成品栓劑稱定，平均粒重為（2.01±0.05）g，RSD為2.74%，符合重量差異低于7.5%栓劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.3 融變時限 本次制得橙皮苷栓劑的融變時間為（17.98±1.17）min，符合關(guān)于水溶性基質(zhì)栓劑的融變時限限度少于60 min的規(guī)定。

2.4 含量測定結(jié)果

2.4.1 方法專屬性：在本色譜條件下橙皮苷出峰時間為7.0 min，內(nèi)標(biāo)出峰時間為13.3 min，兩個物質(zhì)完全分離，且無雜質(zhì)峰干擾，方法專屬性強（見圖1）。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立：以橙皮苷濃度C為橫坐標(biāo)，橙皮苷峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值R為縱坐標(biāo)，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：R=0.145C+0.390，r2=0.9999。表明在10～500 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。

圖1 橙皮苷栓檢測的HPLC色譜圖

2.4.3 準(zhǔn)確度、精密度、加樣回收率：橙皮苷標(biāo)準(zhǔn) 品溶液低、中、高3種濃度（40、250、400 μg·mL-1） 的準(zhǔn)確度范圍為99.16%～100.74%，室溫放置3 h與4 ℃保存7 d精密度RSD均小于5%，見表1。橙皮苷低、中、高3種濃度（120、330、480 μg·mL-1）的加樣回收率均在95%以上，見表2。表明該實驗建立的方法學(xué)符合橙皮苷濃度的檢測要求。

表1 橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確度、精密度

表2 橙皮苷的加樣回收率

2.4.4 含量均勻度：本實驗制備的橙皮苷栓劑經(jīng)HPLC測定，如表3所示，三批次樣品實際含量RSD均低于5%，在標(biāo)示量400 mg的92.2%～103.4%范圍內(nèi)，符合含量均勻度要求。

3 討論

橙皮苷片劑難溶于水，口服后易受胃酸作用發(fā)生水解和酶解，生物利用度低[7]，日服用劑量較大。將橙皮苷制成栓劑，塞入腔道后由于體溫作用迅速軟化并融化于分泌液中，能夠在局部維持較高濃度，起到治療作用[8]。與口服給藥相比，直腸給藥起效迅速，且吸收后濃度維持時間無差別，因此將橙皮苷制成栓劑更符合痔瘡的臨床治療目的[9]。

本實驗采用聚乙二醇作為水溶性栓劑基質(zhì)，可以使橙皮苷在體內(nèi)快速釋放并發(fā)揮療效。正交實驗結(jié)果顯示，聚乙二醇400:聚乙二醇6000:甘油= 1:5:1是基質(zhì)的最優(yōu)配比，并且確定橙皮苷與基質(zhì)的比例為1:4，以熱熔法結(jié)合定量注模成型制備橙皮苷栓，所得栓劑外觀良好，其重量差異、含量均勻度以及融變時限檢測結(jié)果均符合《中華人民共和國藥典》的質(zhì)量要求。將橙皮苷制成直腸栓劑，給藥簡單、方便、安全，適合作為該藥的新劑型開發(fā)，尤其適合痔瘡高發(fā)病率且不能手術(shù)的老年患者[10]。

表3 橙皮苷實際測定含量

本課題組建立了橙皮苷栓的制備方法以及質(zhì)量評價體系，完成了栓劑的體外藥劑學(xué)實驗內(nèi)容。同時橙皮苷的動物用栓劑也已開始研發(fā)，以期通過動物實驗對橙皮苷栓的體內(nèi)藥效學(xué)進行進一步評價。