蓯蓉舒痙顆粒劑的薄層色譜鑒別

劉秀棉 ，洪麗婷 ，陳 丹 ，黃慶德 ，蔡 晶

（1.福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結(jié)合學院，福建 福州 350122）

蓯蓉舒痙顆粒復方由酒蓯蓉、丹參、赤芍等味藥組成，具有提高腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子表達，減輕氧化損傷，降低凋亡，改善神經(jīng)遞質(zhì)平衡的作用，臨床可用于改善帕金森病的肌強直等。其中酒蓯蓉中含有的苯乙醇苷類［1-2］，丹參中含有的丹參酮類［3］和丹酚酸 B［4］，芍藥中含有的芍藥苷［5］分別為各味藥抗帕金森病的主要活性成分。因此，實驗分別選擇酒蓯蓉中的松果菊苷、毛蕊花糖苷，丹參中的丹參酮ⅡA和丹酚酸B，芍藥中的芍藥苷作為其指標性鑒別成分，研究建立蓯蓉舒痙顆粒劑薄層色譜鑒別法，分別對組成顆粒劑的處方藥味酒蓯蓉、丹參、赤芍三味藥進行薄層色譜鑒別，排除陰性干擾，由此判斷顆粒劑的真?zhèn)?，實現(xiàn)整體質(zhì)量控制和有效監(jiān)管。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AR2140萬分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；XS205十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；Yoko-PN電動噴霧器（武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司）；ZF1-I型多功能紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）。

1.2 試藥 蓯蓉舒痙顆粒（自制，生產(chǎn)批號：2018 0422、20180423、20180424，以下簡稱顆粒 A、顆粒B、顆粒 C）；松果菊苷對照品（HPLC≥98%，批號：111670-201706）、毛蕊花糖苷對照品（HPLC≥98%，批號：111530-201713）、芍藥苷對照品（HPLC≥98%，批號：110736-201438）、丹參對照藥材（批號：1209 23-201615）均購自中國食品藥品檢定研究院；丹參酮ⅡA對照品（批號：D17091802）、丹酚酸B對照品（批號：D18011007）購自南京狄爾格醫(yī)藥科技有限公司；薄層層析用硅膠G（青島海洋化工有限公司）；聚酰胺薄膜（浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）；水為超純水；三氯甲烷、甲酸等其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 蓯蓉舒痙顆粒劑中酒蓯蓉的薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 稱取蓯蓉舒痙顆粒1 g，加甲醇20 mL，超聲提取15 min，濾過，濾液濃縮至近干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，即得。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別取松果菊苷對照品、毛蕊花糖苷對照品適量，各加甲醇分別制成每1 mL含1 mg松果菊苷的溶液作為松果菊苷對照品溶液，及每1 mL含1 mg毛蕊花糖苷的溶液作為毛蕊花糖苷對照品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備 取缺酒蓯蓉的蓯蓉舒痙顆粒陰性樣品，按顆粒劑及供試品溶液制備同法操作，制備成缺肉蓯蓉的陰性對照溶液。

2.1.4 薄層色譜分析 分別吸取松果菊苷對照品溶液、毛蕊花糖苷對照品溶液、三批供試品溶液、陰性對照品溶液各2 μL，點于同一塊聚酰胺薄層板上，以甲醇-醋酸-水（2∶1∶7）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。實驗結(jié)果表明：供試品色譜中，在與對照物質(zhì)相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。提示蓯蓉舒痙顆粒含有肉蓯蓉主成分松果菊苷、毛蕊花糖苷，組方含有肉蓯蓉。結(jié)果見圖1。

2.2 蓯蓉舒痙顆粒劑中丹參的薄層色譜鑒別

圖1 蓯蓉舒痙顆粒中酒蓯蓉薄層色譜鑒別圖

2.2.1 供試品溶液的制備 稱取蓯蓉舒痙顆粒1 g，加乙醇5 mL，超聲處理15 min，離心，取上清液，即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 取丹參對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取丹參酮ⅡA對照品、丹酚酸B對照品適量，加乙醇制成每1 mL分別含0.5 mg和1.5 mg的混合溶液，作為混合對照品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取缺丹參的蓯蓉舒痙顆粒陰性樣品，按顆粒劑及供試品溶液制備同法操作，制備成缺丹參的陰性對照溶液。

2.2.4 薄層色譜分析 分別吸取對照藥材溶液、丹參酮ⅡA與丹酚酸B混合對照品溶液、三批供試品溶液各20 μL，點于同一塊硅膠G薄層板上，使成條狀，整個展開過程以氨水進行氨熏處理。先以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4）為展開劑，展開，展至約4 cm，取出，晾干，再以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，展至約8 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，在紫外光燈（302 nm）下檢視。實驗結(jié)果表明：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。提示蓯蓉舒痙顆粒含有丹參主成分丹參酮ⅡA和丹酚酸B，組方含有丹參。結(jié)果見圖2。2.3 蓯蓉舒痙顆粒劑中赤芍的薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 稱取蓯蓉舒痙顆粒0.5 g，加 95%乙醇 10 mL，振搖 5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，即得。

2.3.2 對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3.3 陰性對照溶液的制備 取缺赤芍的蓯蓉舒痙顆粒陰性樣品，按顆粒劑及供試品溶液制備同法操作，制備成缺赤芍的陰性對照溶液。

圖2 蓯蓉舒痙顆粒中丹參薄層色譜鑒別圖

2.3.4 薄層色譜分析 分別吸取對照品溶液、供試品溶液各4 μL，點于同一塊硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。實驗結(jié)果表明：供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。提示蓯蓉舒痙顆粒含有赤芍主成分芍藥苷，組方含有赤芍。結(jié)果見圖3。

圖3 蓯蓉舒痙顆粒中赤芍薄層色譜鑒別圖

3 討 論

3.1 薄層色譜法是目前中藥鑒別最常用的方法，但是，由于薄層層析是一種“敞開”的分離系統(tǒng)，因此，在實際操作中，儀器、環(huán)境、溫度、濕度、樣品預處理等諸多因素的相互制約，往往會產(chǎn)生不理想的結(jié)果。實驗結(jié)果表明：在使用聚酰胺薄膜對蓯蓉舒痙顆粒酒蓯蓉TLC展開分離時，可在展開劑中加入酸抑制劑，克服斑點拖尾，避免日光直射斑點導致其分解。

3.2 蓯蓉舒痙顆粒丹參薄層鑒別中，為了讓丹酚酸B顯色更清晰，增加了氨熏及噴霧顯色；丹參顯色劑的選擇當中，曾比較了2%三氯化鐵乙醇溶液、5%三氯化鐵乙醇溶液及10%硫酸乙醇溶液，最后，根據(jù)顯色效果，選擇10%硫酸乙醇溶液為顯色劑；同時，實驗曾比較了圓形點樣與條狀點樣的分離效果，發(fā)現(xiàn)條狀點樣時樣品分離效果更好，斑點更集中，在有效的展距里，能分離出更多的組分。

3.3 建立的蓯蓉舒痙顆粒薄層色譜鑒別法結(jié)果提示：酒蓯蓉、丹參、赤芍三味藥的TLC色譜斑點清晰，在對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，方法重復性、穩(wěn)定性良好。蓯蓉舒痙顆粒為中藥復方制劑，組成較為復雜，因此酒蓯蓉及赤芍的薄層鑒別實驗，還可考慮增加對應(yīng)的對照藥材，從而更全面地對其進行質(zhì)量控制。