槲寄生聯(lián)合RIPOC對大鼠心肌保護作用

欒海蓉 董琦 代海兵 孫健 王得利

【摘要】 目的：探討槲寄生聯(lián)合遠隔缺血后適應(yīng)（RIPOC）對心梗大鼠心肌的保護作用。方法：56只健康成年SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為模型組（n=10）、槲寄生組（n=12）、RIPOC組（n=12）、聯(lián)合組（n=12）及對照組（n=10）。模型組、槲寄生組、RIPOC組及聯(lián)合組均建立急性心肌梗死動物模型，對照組只進行開胸。槲寄生組給予槲寄生有效提取物;RIPOC組進行RIPOC操作;聯(lián)合組給予槲寄生有效提取物+RIPOC操作;對照組、模型組與RIPOC組均給予等量0.9%氯化鈉溶液，均持續(xù)干預14 d。比較各組心功能指標、左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）、左心室壁厚度、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）含量。結(jié)果：模型組左心室射血分數(shù)（LVEF）、SOD及GSH-Px均明顯低于對照組，而左心室舒張末期內(nèi)徑（LVEDV）、左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESV）、LVMI、左心室壁厚度及MDA均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組LVEF、SOD及GSH-Px均高于模型組（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組LVEDV、LVESV、LVMI、左心室壁厚度、MDA均低于模型組（P<0.05）;聯(lián)合組GSH-Px和SOD水平均高于槲寄生組和RIPOC組，而MDA均低于槲寄生組和RIPOC組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：槲寄生、RIPOC均可改善心梗大鼠心功能，逆轉(zhuǎn)心肌肥厚和改善心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)，且槲寄生聯(lián)合RIPOC改善心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)效果更加顯著，兩者可以協(xié)同保護缺血性心臟，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 槲寄生 遠程缺血后適應(yīng) 心肌梗死模型

[Abstract] Objective： To investigate the protective effect of Viscum Coloratum combined with remote ischemic postconditioning （RIPOC） on myocardium of myocardial infarction rats. Method： A total of 56 healthy adult SD rats were divided into model group （n=10）， Viscum Coloratum group （n=12）， RIPOC group （n=12）， combination group （n=12） and control group （n=10） according to the random number table method. Animal models of acute myocardial infarction were established in the model group， Viscum Coloratum group， RIPOC group and combination group， while thoracotomy was performed only in the control group. The Viscum Coloratum group was treated with the effective extract of Viscum Coloratum. The RIPOC group was treated with RIPOC operation. The combination group was treated with the effective extract of Viscum Coloratum + RIPOC operation. The control group， the model group and the RIPOC group were given equivalent 0.9% Sodium Chloride Solution， and all of them continued to intervene for 14 days. The cardiac function index， left ventricular mass index （LVMI）， left ventricular wall thickness， superoxide （SOD）， glutathione peroxidase （GSH-Px） and malondialdehyde （MDA） in all group were compared. Result： Left ventricular ejection fractions （LVEF）， SOD and GSH-Px in the model group were significantly lower than those in the control group， while left ventricular end-diastolic diameter （LVEDV）， left ventricular end-systolic diameter （LVESV）， LVMI， left ventricular wall thickness and MDA were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. LVEF， SOD and GSH-Px in the Viscum Coloratum group， RIPOC group and the combination group were all higher than those in the model group （P<0.05）. LVEDV， LVESV， LVMI， left ventricular wall thickness and MDA in the Viscum Coloratum group， RIPOC group and the combination group were all lower than those in the model group （P<0.05）. GSH-Px and SOD in the combination group were higher than those in the Viscum Coloratum group and the RIPOC group， while MDA in the combination group were lower than those in the Viscum Coloratum group and the RIPOC group （P<0.05）. Conclusion： Viscum Coloratum and RIPOC can both improve cardiac function， reverse myocardial hypertrophy and improve myocardial oxidative stress response in rats with myocardial infarction， and the effect of Viscum Coloratum combined with RIPOC on myocardial oxidative stress response is more significant. They can coordinate to protect ischemic heart， which is worthy of promotion.

[Key words] Viscum Coloratum RIPOC Models of acute myocardial

First-authors address： Mudanjiang Medical College， Mudanjiang 157011， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.36.008

缺血性心臟病是心腦血管系統(tǒng)疾病死亡的重要因素。目前除了藥物治療，主要是經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）和冠狀動脈旁路移植術(shù)（冠脈搭橋術(shù)，CABG）。然而，血流的恢復會導致缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）損傷，反而加重心肌組織損傷，影響預后[1-4]。近年來，有人提出通過對遠隔組織器官采用短暫的間歇的缺血再灌注來減少靶器官的損傷，這是一種安全無創(chuàng)，簡單易行的方法。處理時期可以在心臟缺血前、中、后期。相對于遠隔缺血預適應(yīng)，遠隔缺血后適應(yīng)（remote ischemic postconditioning，RIPOC）更具有臨床應(yīng)用價值[5-9]。槲寄生（Viscum Coloratum）為桑寄生科槲寄生屬植物，是我國的傳統(tǒng)中藥，中國大部分省區(qū)均產(chǎn)?！吨袊幍洹?015版記載，槲寄生歸肝腎經(jīng)，具有祛風濕、補肝腎、強筋骨等作用，用于風濕痹痛、腰膝酸軟、筋骨無力等多種疾病的治療[10]?，F(xiàn)代藥理研究證明，槲寄生除了具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗病毒、降血壓、降血糖等作用，槲寄生有效提取物對心血管系統(tǒng)具有一定的保護作用，可通過舒張冠狀動脈血管等作用，改善缺血缺氧對心肌造成的損傷[11]。本研究通過建立大鼠心肌梗死模型，聯(lián)合應(yīng)用槲寄生有效提取物和RIPOC，探究兩種干預措施是否能起到協(xié)同保護心肌的作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗動物：健康成年清潔級SD大鼠56只，8周齡，雌雄各半，體重230～250 g，由牡丹江醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物合格證號KYXK（黑）2015007，所有大鼠飼養(yǎng)于在安靜的屏障環(huán)境中，可自由飲食飲水。本實驗通過牡丹江醫(yī)學院倫理學委員會批準。藥品和試劑：槲寄生中藥飲片，購自黑龍江省康達中藥飲片有限公司，符合《中華人民共和國藥典》2015版質(zhì)量標準。槲寄生有效提取物的制備方法：取槲寄生生藥4 kg，10倍量95%乙醇加熱回流1 h，過濾回收乙醇至無醇味，得到浸膏后層析分離干燥，最終得到紅色粉末[12]。烏拉坦（生產(chǎn)廠家：上海山浦化工有限公司，批號：20140602），用蒸餾水配成濃度20%溶液。青霉素（生產(chǎn)廠家：哈藥集團制藥總廠，批準文號：國藥準字H23021439，規(guī)格：80萬單位），丙二醛（MDA）試劑盒（批號20180131）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（批號20180206）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒（批號20180126）均購于南京建成生物工程生物公司。儀器：BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)、HX-100E小動物呼吸機（成都泰盟科技有限公司），小動物專用彩色超聲診斷儀（西門子ACUSON SEQUOIA 512）。

1.2 方法 56只SD大鼠隨機分為模型組（n=10）、槲寄生組（n=12）、RIPOC組（n=12）、聯(lián)合組（n=12）及對照組（n=10）。模型組、槲寄生組、RIPOC組及聯(lián)合組均建立急性心肌梗死動物模型，對照組只進行開胸。大鼠術(shù)前稱重，檢測尾動脈血壓。烏拉坦麻醉后仰臥位固定，使用灌胃器行氣管插管術(shù)，連接小動物呼吸機，給予機械通氣。啟動BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)，同步記錄大鼠心電圖和心率變化。心前區(qū)備皮，在第3～4肋間切開皮層，逐層分離至暴露心臟，可用開瞼器輔助便于觀察到心臟結(jié)構(gòu)，用6/0眼科無創(chuàng)縫合線結(jié)扎冠脈左前降支，左心前壁發(fā)紺變白，心電圖R波振幅增加，ST段升高，即為造模成功[13]。結(jié)扎后迅速清除胸腔內(nèi)余血并關(guān)胸縫合，術(shù)者應(yīng)在10 min內(nèi)完成手術(shù)以保證存活率。對照組只開胸不結(jié)扎。五組均給予青霉素（16萬單位/只）3 d后開始干預。槲寄生組灌胃給予槲寄生有效提取物，300 mg/kg，1次/d;RIPOC組進行RIPOC操作，在大鼠右后肢靠近腹股溝處纏繞止血帶6圈，5 min缺血，5 min再灌注，每天在同一時間共進行3個循環(huán);聯(lián)合組每天在給予槲寄生有效提取物30 min后進行RIPOC操作;對照組、模型組與RIPOC組灌胃等量0.9%氯化鈉溶液，均持續(xù)干預14 d。

1.3 觀察指標 干預14 d后，大鼠稱重并記錄體重（body weight，BW）后麻醉，仰臥位固定在手術(shù)臺上，用超聲檢測心功能指標，包括左心室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end-systolic volume，LVESV），左心室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end-diastolic volume，LVEDV），左心室射血分數(shù)（left ventricular ejection fractions，LVEF）。檢測完畢后迅速開胸取完整心臟，置于4 ℃0.9%氯化鈉溶液中，洗除心腔內(nèi)殘血，眼科剪依次剪去左右心房、右心室，濾紙吸干，稱取左心室重量（left ventricular weight，LVW），計算左室質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI），LVMI=LVW/BW，并測量左心室壁厚度。最后將心臟剪碎后，加入適量冷裂解液進行組織研磨勻漿，3 500 r/min離心10 min后取上清液，按試劑盒說明書檢測SOD和GSH-Px活性及MDA含量。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組心功能指標比較 模型組LVEF明顯低于對照組，而LVEDV、LVESV均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組的LVEF均高于模型組，而LVEDV與LVESV均低于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組各心功能指標兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 各組LVMI和左室壁厚度比較 模型組LVMI和左室壁厚度均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組LVMI和左室壁厚度均低于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組LVMI和左室壁厚度兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3 各組GSH-Px、SOD和MDA比較 模型組GSH-Px和SOD均明顯低于對照組，而MDA高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組GSH-Px和SOD水平均高于模型組，而MDA均低于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;聯(lián)合組GSH-Px和SOD水平均高于槲寄生組和RIPOC組，而MDA均低于槲寄生組和RIPOC組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

研究顯示，槲寄生作為一種常用中藥，對心血管系統(tǒng)的作用包括降低血壓、治療快速型心律失常、陣發(fā)性房顫與室性早搏、改善冠脈循環(huán)、增強心臟收縮力等。RIPOC是一種對遠端非缺血器官進行后處理的保護策略，是一種非常安全并且簡單易行的手段，在未來的臨床應(yīng)用中存在巨大的潛力。

急性心肌梗死發(fā)生后，心臟為了保證正常的收縮功能，心肌會發(fā)生代償性肥厚并擴張，調(diào)節(jié)大小形狀和功能，也就是心室重構(gòu)的過程[14-17]。本研究結(jié)果顯示，模型組LVEF明顯低于對照組，而LVEDV、LVESV均明顯高于對照組，（P<0.05），說明心肌梗死后有明顯的心室重構(gòu)過程，心功能損傷嚴重。槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組的LVEF均高于模型組，而LVEDV與LVESV均低于模型組（P<0.05）。說明槲寄生和RIPOC在改善心肌梗死大鼠的心功能和心室重構(gòu)中存在協(xié)同作用。

急性心肌梗死期間，心肌缺血缺氧，產(chǎn)生大量的自由基攻擊心肌細胞，造成細胞功能損傷。SOD和GSH-Px都是體內(nèi)常見的抗氧化酶，可以對抗自由基的侵害，此過程中兩者會被大量消耗。當機體自身的抗氧化機制不足以清除自由基時，脂質(zhì)過氧化最重要的產(chǎn)物MDA便會大量增多[18-20]。本研究中，模型組GSH-Px和SOD均明顯低于對照組，而MDA高于對照組（P<0.05）;槲寄生組、RIPOC組和聯(lián)合組GSH-Px和SOD水平均高于模型組，而MDA均低于模型組（P<0.05）。提示槲寄生和RIPOC在提高機體抗氧化能力方面，兩組同樣具有協(xié)同作用。聯(lián)合組GSH-Px和SOD水平均高于槲寄生組和RIPOC組，而MDA均低于槲寄生組和RIPOC組（P<0.05），提示RIPOC和槲寄生聯(lián)合應(yīng)用改善心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)更加有效。

綜上所述，槲寄生、RIPOC均可改善心梗大鼠心功能，逆轉(zhuǎn)心肌肥厚和改善心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)，且槲寄生聯(lián)合RIPOC改善心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)效果更加顯著，兩者可以協(xié)同保護缺血性心臟，值得推廣。

參考文獻

[1] Braunwald E，Kloner R A.Myocardial reperfusion：a double-edged sword？[J].J Clin Invest，1985，76（5）：1713-1719.

[2] Yellon D M，Hausenloy D J.Myocardial reperfusion injury[J].N Engl J Med，2007，357（11）：1121-1135.

[3] Prasad A，Stone G W，Holmes D R，et al.Reperfusion injury，microvascular dysfunction，and cardioprotection：the“dark side”of reperfusion[J].Circulation，2009，120（21）：2105-2112.

[4] Turer A T，Hill J A.Pathogenesis of myocardial ischemia-reperfUsion injury and rationale for therapy[J]. Am J Cardiol，2010，106（3）：360-368.

[5] Le Page S，Prunier F.Remote ischemic conditioning[J].J Cardiol，2015，66（2）：91-96.

[6]石向欣，賀玉曉，趙躍華，等.遠程缺血后適應(yīng)對心肌保護作用的研究進展[J].醫(yī)學綜述，2019，25（4）：722-727.

[7]蔣欽，向波，于濤，等.重復遠程缺血后適應(yīng)對急性缺血心肌中骨髓間充質(zhì)干細胞移植的影響[J].中華細胞與干細胞雜志，2016，6（2）：86-91.

[8] Andreka G，Vertesaljai M，Szantho G，et al.Remote ischaemic postconditioning protects the heart during acute myocardial infarction in pigs[J].Heart，2007，93（6）：749-752.

[9] Tang Y H，Yang J S，Xiang H Y，et al.PI3K-Akt/eNOS in remote postconditioning induced by brief pulmonary ischemia[J].Clin Ivest Med，2014，37（1）：26-37.

[10]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：373.

[11]張榮沭，沈雅香，苗術(shù)，等.槲寄生黃酮苷對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2010，30（12）：999-1001.

[12]何秀權(quán)，欒海蓉，劉清梅，等.槲寄生提取物抗缺血性心律失常作用的研究[J].哈爾濱醫(yī)學大學學報，2010，44（6）：519-523.

[13]賈茹，?；刍?，侯廣玉，等.心肌梗死大鼠模型制備方法的研究[J].中國繼續(xù)醫(yī)學教育，2019，11（7）：159-161.

[14]徐姝，張彥紅.PPARα激動劑非諾貝特對高血壓大鼠心室重構(gòu)的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2018，56（26）：34-37.

[15]吳小龍，孫勤暖，彭志平，等.阿司匹林對心肌肥厚大鼠左心室重構(gòu)的影響及其與炎癥因子的關(guān)系[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學學報，2018，40（6）：560-565.

[16]張霞，張聰，胡楚璇，等.卡維地洛預防高血壓大鼠心室重構(gòu)的效果及其機制分析[J].中國藥師，2019，22（3）：422-424.

[17] Hu J，Yan Y，Zhou Q，et al.Effects of renal denervation on the decelopment of post-maocardial infarction heart failure and cardiac autonomic nervous system in rats[J].Int J Candiol，2014，172（3）：414-416.

[18]張東風.丁苯酞聯(lián)合阿托伐他汀對急性腦梗死患者血流動力學及血清SOD、GSH-Px、NO水平的影響[J].臨床藥物治療雜志，2018，16（3）：37-41.

[19]錢桂鳳，李虹竹，趙瑋璇.火針膏肓穴對慢性疲勞綜合征大鼠血清SOD、MDA及GSH-Px的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2018，33（8）：3291-3294.

[20]宮健偉，孫喜靈，王超云，等.四君子湯對脾氣虛模型大鼠血清SOD，CAT和GSH-Px的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2017，28（1）：46-47.

（收稿日期：2019-07-04） （本文編輯：田婧）