正畸力作用下牙髓組織神經(jīng)生長因子的表達(dá)及其與疼痛的關(guān)系研究

趙紫婷 葉文成 李瑩

近年來，臨床日益重視關(guān)于正畸力作用下牙齒疼痛的研究。神經(jīng)生長因子（NGF）是一種生物活性分子，參與牙髓組織的生長與損傷后的修復(fù)[1]。研究發(fā)現(xiàn)，炎癥區(qū)域表達(dá)上調(diào)的NGF會(huì)影響感覺神經(jīng)元的化學(xué)表型[2-4]?；颊哒恿Τ跗谘浪杞M織存在炎癥反應(yīng)，NGF是否參與了正畸致痛尚無定論。基于此，本研究旨在探討正畸力作用下牙髓組織NGF的表達(dá)及其與疼痛的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2015年5月至2017年7月本院收治的口腔正畸患者26例，排除全身系統(tǒng)性疾病、近2個(gè)月內(nèi)服用過抗生素與免疫抑制劑等患者。其中男13例，女13 例；年齡 11~14（12.3±1.4）歲。26 例患者依據(jù)正畸計(jì)劃均需拔除上頜雙側(cè)第一前磨牙（52顆牙）并進(jìn)行固定矯治，上頜第一前磨牙均無齲病及牙周疾病。本研究獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或其家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 患者在安裝矯治器前均拔除左上頜第一前磨牙（對(duì)照組，26顆牙）。參考Derringer等[5]的正畸加力方法，患者配戴矯治器后，用直絲弓固定矯治器安裝在患者上頜牙列，第一磨牙粘帶環(huán)、雙側(cè)第二前磨牙之間所有牙齒粘托槽均為杭州新亞公司生產(chǎn)的PIM直絲弓托槽，0.014英寸NITI預(yù)成弓絲入槽結(jié)扎，右上頜第一前磨牙托槽偏近中粘貼，從而使該牙獲得50~100g（0.5~1 N）的頰向、遠(yuǎn)中向的扭轉(zhuǎn)力?；颊叻謩e在安裝矯治器后 1、3、7、15d（7、7、6、6 例）拔除右上頜第一前磨牙（觀察組，26顆牙）。拔除的上頜第一前磨牙進(jìn)行標(biāo)本制備。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 牙齒疼痛評(píng)估 應(yīng)用四點(diǎn)口述分級(jí)評(píng)分法(VRSs-4)問卷調(diào)查26例患者安裝矯治器后各時(shí)間段上頜第一前磨牙的疼痛程度，記錄其前1d夜間上頜第一前磨牙的疼痛程度，無疼痛、輕度疼痛、中度疼痛、重度疼痛分別評(píng)定為 1、2、3、4 分[6]。

1.3.2 牙髓組織NGF表達(dá)強(qiáng)度

1.3.2.1 標(biāo)本處理 應(yīng)用PBS（0.1mol/L、pH 7.2~7.4）沖洗標(biāo)本牙表面血污，根尖2 mm左右用咬骨鉗去除，然后用4%多聚甲醛固定，用0.5mol/L、pH 7.4的乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）脫鈣8周，正丁醇脫水后直接浸蠟、包埋，制作石蠟標(biāo)本，連續(xù)切片牙齒組織，厚度為4μm。

1.3.2.2 免疫組織化學(xué)染色和結(jié)果評(píng)判 應(yīng)用武漢博士德公司生產(chǎn)的DAB試劑盒及SABC試劑盒、兔IgG多抗NGF抗體，應(yīng)用SABC法染色，鏡下對(duì)DAB顯色進(jìn)行控制。滴加50~100μl一抗工作液，室溫孵育30min，用PBS沖洗切片5min，重復(fù)沖洗3次。DAB顯色液顯色5min，顯微鏡下控制反應(yīng)，蘇木精液復(fù)染細(xì)胞核1 min，脫水、透明、封片，顯微鏡下觀察。NGF染色陽性標(biāo)準(zhǔn)為有棕黃色顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核呈藍(lán)色[7]。在Nikon ECLIPSE TE 2000-U顯微鏡（日本Nikon公司）下對(duì)染色結(jié)果取像，在進(jìn)行密度掃描過程中經(jīng)Motie Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，檢測(cè)兩組牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞著色面積密度（AD）、平均光密度值（AOD）以反映NGF表達(dá)強(qiáng)度，分析牙髓組織NGF表達(dá)強(qiáng)度與牙齒疼痛程度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SAS 8.1統(tǒng)計(jì)軟件；計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用直線相關(guān)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AD與AOD比較見表1。

表1 兩組牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AD與AOD比較

由表1可見，兩組牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AD與AOD比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），觀察組安裝矯治器后1、3d牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AD與AOD均高于對(duì)照組（均P＜0.05），觀察組安裝矯治器后3d的牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AD與AOD均高于安裝矯治器后1d（均P＜0.05）。

2.2 牙髓組織NGF表達(dá)強(qiáng)度與牙齒疼痛程度的相關(guān)性分析見表2。

表2 牙髓組織NGF表達(dá)強(qiáng)度與牙齒疼痛程度的相關(guān)性分析

由表2可見，隨著牙齒疼痛程度的增強(qiáng)，牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AOD逐漸升高，即正畸力作用下牙髓組織NGF表達(dá)強(qiáng)度與牙齒疼痛程度呈高度正相關(guān)（r=0.867，P＜0.05）。

3 討論

患者口腔正畸治療初期普遍存在輕微的瞬時(shí)炎癥反應(yīng)，可能引發(fā)矯治器加力后幾天內(nèi)的不適[8]。研究表明，正畸治療初期，常規(guī)加力雖然不會(huì)改變牙髓組織，但卻會(huì)增強(qiáng)牙髓組織內(nèi)一些生物活性物質(zhì)的表達(dá)，如NGF等，調(diào)節(jié)血管反應(yīng)及疼痛反應(yīng)[9]。NGF是一種多功能多肽生長因子，屬于神經(jīng)營養(yǎng)素家族一員，在炎性疼痛中，NGF會(huì)引發(fā)疼痛，并維持疼痛狀態(tài)[10]，且牙髓組織NGF的表達(dá)強(qiáng)度會(huì)在牙齒機(jī)械損傷后發(fā)生相應(yīng)變化[11]。正畸力作為一種機(jī)械損傷，作用于牙齒后可能會(huì)改變牙髓組織的NGF表達(dá)。

牙髓神經(jīng)主要包括無髓C類纖維、少量有髓A類纖維，前者主要感受慢性鈍痛，缺乏明確的定位；后者主要感受急性銳痛，具有明確的定位[12]。研究發(fā)現(xiàn)，貓牙牙髓組織NGF受體不表達(dá)于恒牙牙髓血管壁中，而表達(dá)于未發(fā)育成熟的牙髓血管壁中；不表達(dá)于有髓神經(jīng)纖維中，而表達(dá)于無髓神經(jīng)纖維、大多數(shù)游離神經(jīng)末梢中，同時(shí)高表達(dá)于髓腔周邊的成纖維細(xì)胞中，具有特異性的分布特點(diǎn)[13]。本研究結(jié)果表明，觀察組安裝矯治器后1、3d牙齒疼痛程度、牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AD與AOD均高于對(duì)照組；隨著牙齒疼痛程度的增強(qiáng)，牙髓組織NGF染色陽性細(xì)胞AOD逐漸升高，即正畸力作用下牙髓組織NGF表達(dá)強(qiáng)度與牙齒疼痛程度呈高度正相關(guān)。這一結(jié)果與徐卿朝等[13]的研究結(jié)果相符，說明NGF可能在正畸力作用下參與調(diào)節(jié)牙髓疼痛。原因可能是在正畸加力初期，NGF具有較高的表達(dá)強(qiáng)度，提供了形成新生血管的良好條件，且通過NGF受體使感覺神經(jīng)元接受興奮性刺激，從而產(chǎn)生痛感[14]。