巢式聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)血清中HBV-DNA對(duì)治療乙肝的臨床意義

向芳菲

（廣州市第八人民醫(yī)院，廣東廣州 510060）

HBV（乙型肝炎病毒）感染是一種社會(huì)常見的健康問(wèn)題。有調(diào)查顯示：全球HBV感染的人群已經(jīng)高達(dá)20億人，每年死亡者將近100萬(wàn)人，多是由于肝癌、肝硬化或者肝功能衰竭死亡[1,2]。HBV病毒具有較強(qiáng)的感染性，極易轉(zhuǎn)化為慢性肝炎，肝硬化以及肝癌是疾病發(fā)展的終末期。隨著臨床對(duì)HBV病毒的不斷滲入研究，發(fā)現(xiàn)HBV-DNA檢測(cè)可對(duì)HBV病毒感染情況做出反映，是一種高敏感性、高特異度的指標(biāo)[3]。本文選定2017年10月-2018年10月本院收治的50例HBV患者研究，旨在提供一種準(zhǔn)確、有效的診斷方法。

1 資料與方法

1.1 基線資料 選取2017年10月-2018年10月本院收治的50例HBV患者，女性22例，男性28例，年齡25歲-75歲，平均年齡為（50.06±6.14）歲。

1.2 方法 nPCR檢測(cè)：采用PCR擴(kuò)增儀（型號(hào)：GA5700；生產(chǎn)企業(yè)：美國(guó)PE公司），取DNA提取液20 μL，置入離心管中（0.5 mL），加入動(dòng)物血清30 μL，搖勻，在100oC下煮沸。時(shí)間15 min，離心5 min，速率14,000 r/min，提取上清液5 μL，使基因作為PCR模板鏈。取模板液5 μL，置入PCR反應(yīng)管中，離心處理，在PCR擴(kuò)增儀中進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增之后基因溶液中取10 μL進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)，指示劑顯示1 cm時(shí)，可將紫外燈光放入，觀察熒光區(qū)帶。ELISA檢測(cè)：采用ELISA法檢測(cè)HBVM，試劑由上海新波生物技術(shù)有限公司提供，獲取的基因溶液置入ELISA試劑中展開檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果、HBV-DNA進(jìn)行FQ-PCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)對(duì)比ELISA檢測(cè)法、FQ-PCR檢測(cè)法、nPCR檢測(cè)法的陽(yáng)性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 25.0軟件展開數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，采用卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 分析HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果 HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)，1模板與4模板的陽(yáng)性率相對(duì)較高，1模板中HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性率與HBVM進(jìn)行ELISA法檢測(cè)的陽(yáng)性率相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），2模板中HBVDNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性率與HBVM進(jìn)行ELISA法檢測(cè)的陽(yáng)性率相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見表1。

2.2 分析HBV-DNA進(jìn)行FQ-PCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果 HBVDNA進(jìn)行FQ-PCR檢測(cè)，1模板與4模板的陽(yáng)性率相對(duì)較高，1模板中HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性率與HBVM進(jìn)行ELISA法檢測(cè)的陽(yáng)性率相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），2模板中HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性率與HBVM進(jìn)行ELISA法檢測(cè)的陽(yáng)性率相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見表2。

2.3 分析HBV-DNA進(jìn)行不同PCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果 nPCR檢測(cè)HBV-DNA的陽(yáng)性率相對(duì)較ELISA、FQ-PCR檢測(cè)的高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見表3。

表1 分析HBV-DNA進(jìn)行nPCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果

表2 分析HBV-DNA進(jìn)行FQ-PCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果

表3 分析HBV-DNA進(jìn)行不同PCR檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果

3 討論

HBV感染的基因型不同，生成的疾病譜也有差異，但存在一定規(guī)律，一般肝炎、肝硬化、肝癌的順序，檢出率最高的是C型，檢出率最低的是B型。檢測(cè)HBV病毒分型的方法不同，對(duì)臨床治療的指導(dǎo)意義也不同，但是由于分型檢測(cè)方法不完善，價(jià)格昂貴，反復(fù)性的測(cè)試患者不易接受。nPCR是一種改良的PCR檢測(cè)法，在106個(gè)基因組中可檢測(cè)、拷貝出一個(gè)病毒基因，有效彌補(bǔ)了單引物分辨率較低的不足，是一種質(zhì)量較高的PCR片段，具有較高的敏感性。本研究顯示：nPCR檢測(cè)HBV-DNA的陽(yáng)性率相對(duì)較ELISA、FQ-PCR檢測(cè)高（P＜0.05）。說(shuō)明nPCR檢測(cè)技術(shù)顯著優(yōu)于其他檢測(cè)技術(shù)，具有高敏感度、高特異性、高檢出率的特點(diǎn)，在HBV疾病的診斷、治療、預(yù)后中發(fā)揮了重要的指導(dǎo)意義，應(yīng)當(dāng)作為HBV疾病理想的診斷方法。

綜上所述：HBV疾病患者采納nPCR檢測(cè)，可有效提高診斷準(zhǔn)確率，為疾病的治療提供科學(xué)的診斷依據(jù)，值得臨床信賴并進(jìn)一步推廣。