飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)、體色及部分生化指標(biāo)的影響

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(天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)與養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384)

非洲王子魚Labidochromiscaeruleus隸屬于鱸形目、隆頭魚亞目、慈鯛科、鑷麗魚屬，是淡黑鑷麗魚的別稱。原產(chǎn)于非洲馬拉維湖，其體呈檸檬黃色，背鰭近邊緣處有黑色條紋，具有較高的觀賞價(jià)值，且易于飼養(yǎng)，因而廣受消費(fèi)者喜愛[1]。

在其養(yǎng)殖過程中，由于養(yǎng)殖環(huán)境與原生態(tài)環(huán)境的差異及飼料等原因，常導(dǎo)致其體色暗淡，影響其觀賞價(jià)值。因此，如何使其體色艷麗、提高其觀賞價(jià)值，已成為研究的熱點(diǎn)問題。

微藻是一類光合利用度較高的植物，可通過光合作用生產(chǎn)較多高附加值的產(chǎn)物，如多糖、色素等。藻多糖復(fù)合物具有免疫活性和抗氧化性，類胡蘿卜素具有提高魚體體色的作用[2]。裂壺藻Schizochytriumlimacinum是屬于真菌門的一類海洋真菌，其細(xì)胞內(nèi)含有大量有益的活性物質(zhì)，其中二十二碳六烯酸(DHA)的含量非常高，達(dá)到35%～40%[3]。已有研究表明，裂壺藻能有效提高大黃魚Larimichthyscrocea苗種的成活率[4]。鹽藻Dunaliellasalina含有豐富的β-胡蘿卜素，是迄今為止人類發(fā)現(xiàn)的β-胡蘿卜素含量最高的天然生物[5]，因而，鹽藻是一種優(yōu)秀的魚類增色劑。研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加鹽藻對(duì)卵形鯧鲹Trachinotusovatus具有顯著的增色作用[6]。小球藻Chlorellavulgaris含有豐富的活性物質(zhì)，它的光合效率高，含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素等，是一種十分重要的微藻資源[7]。在飼料中添加適當(dāng)含量的小球藻可促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)發(fā)育，提高機(jī)體的免疫能力[8]，小球藻作為水產(chǎn)養(yǎng)殖餌料已被廣泛應(yīng)用[9]。

目前，有關(guān)微藻對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)、體色和生化指標(biāo)的影響研究尚未見報(bào)道，為此，本試驗(yàn)中分別以裂壺藻、鹽藻和小球藻為飼料添加劑，研究了其對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)、體色和部分生化指標(biāo)的影響，旨在為非洲王子魚飼料的配制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用非洲王子魚購(gòu)于天津市精武鎮(zhèn)觀賞魚養(yǎng)殖基地，選擇3月齡非洲王子魚，運(yùn)送至天津農(nóng)學(xué)院循環(huán)水實(shí)驗(yàn)室后先進(jìn)行為期2周的暫養(yǎng)馴化。

1.2 方法

1.2.1 飼料的配制 以中山統(tǒng)一有限公司提供的非洲王子魚基礎(chǔ)飼料(粗蛋白質(zhì)為40.12%，粗脂肪為8.52%，粗灰分為9.36%，水分為7.42%)為底料，飼料底料經(jīng)粉碎后分別添加裂壺藻、鹽藻和小球藻，添加量均為1%，對(duì)照組不添加藻粉，在混勻機(jī)中充分混合后使用飼料制粒機(jī)(江蘇牧羊集團(tuán)牧MUZLM V4型)制成直徑為2.00 mm的沉性顆粒飼料，待其自然風(fēng)干后于冰箱(-20 ℃)中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 將非洲王子魚馴化2周后，挑選體型健壯、體表無(wú)傷、規(guī)格一致的魚(體長(zhǎng)為6.61 cm±0.13 cm，體質(zhì)量為8.76 g±0.51g)隨機(jī)分成4組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放30尾魚。試驗(yàn)期間水溫為(26.0±0.5)℃，pH為7.8 ± 0.2，投餌量約為體質(zhì)量的3%，每日9:00和16:00投喂，養(yǎng)殖周期為45 d。

1.2.3 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，將試驗(yàn)魚禁食24 h，用MS-222(40 mg/L)麻醉后，從每個(gè)缸中隨機(jī)取10尾魚，用紗布拭去體表水分，測(cè)定試驗(yàn)魚的體質(zhì)量、體長(zhǎng)、全長(zhǎng)和體高。增重率(%)、飼料效率(%)、特定增長(zhǎng)率(%/d)和肥滿度的(%)計(jì)算公式分別為

增重率=100%×(Wt-W0)/W0,

飼料效率=100%×(Wt-W0)/F,

特定生長(zhǎng)率=100%×(lnWt-lnW0)/t,

肥滿度=100%×Wt/L3。

其中：W0為試驗(yàn)初始魚體質(zhì)量(g)；Wt為試驗(yàn)終末魚體質(zhì)量(g)；t為養(yǎng)殖周期(d)；L為試驗(yàn)?zāi)~體長(zhǎng)(cm)；F為飼料攝入量干質(zhì)量 (g)。

1.2.4 非洲王子魚體表色度值的測(cè)定 在試驗(yàn)進(jìn)行的第15、30、45天時(shí)，從每缸隨機(jī)取10尾魚，用紗布拭去體表水分，用色彩色差儀(CR-400型)的探頭緊貼試驗(yàn)魚體側(cè)線上部皮膚，對(duì)魚體明度值(L*)、紅度值(a*)、黃度值(b*)等色度指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.5 非洲王子魚體內(nèi)總類胡蘿卜素含量的測(cè)定 養(yǎng)殖進(jìn)行到第15、30、45天時(shí)，從每缸隨機(jī)取5尾試驗(yàn)魚，用MS-222(40 mg/L)麻醉后，分別取試驗(yàn)魚體側(cè)線上部皮膚(含鱗片)、整個(gè)胸鰭、背鰭、尾鰭和背部肌肉，剪碎。參考陳曉明等[10]的方法并略做修改：用電子分析天平準(zhǔn)確稱取0.1 g組織，用丙酮定容至5 mL，放入超聲波清洗機(jī)低溫超聲波震蕩45 min后取出，4 ℃下以4000 r/min離心10 min，放入冰箱(4 ℃)中靜置24 h。

將所得的色素萃取液分別置于 1 cm比色皿中，以丙酮為空白對(duì)照管(比色皿加蓋以防止丙酮揮發(fā))，用 Thermo Spectronic UVmini-1240型紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，找出最大吸收峰處的波長(zhǎng)(448 nm)，在該波長(zhǎng)下測(cè)定各組色素萃取液的吸光度值。

總類胡蘿卜素含量(mg/kg)計(jì)算公式為

其中:A為吸光度值；K為常數(shù)(K=104)；V為提取液體積(mL)；E為摩爾消光系數(shù)(E=2500)；G為樣品質(zhì)量(g)。

1.2.6 部分免疫指標(biāo)的測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，將試驗(yàn)魚禁食24 h，用MS-222(40 mg/L)麻醉后，從每個(gè)缸中隨機(jī)取10尾魚，從尾部采血，4 ℃下以4000 r/min離心5 min，后取上清液。采血后的試驗(yàn)魚于冰盤上解剖取肝臟和腸道，將肝臟、腸道組織樣品放在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗清除血液，用濾紙吸干體表水分后稱重。按質(zhì)量體積比為1∶9(g∶mL)在組織塊中用移液管加入預(yù)冷勻漿介質(zhì)(0.85%的氯化鈉注射液)，于4 ℃下以4000 r/min在勻漿器中進(jìn)行勻漿，勻漿后15 min，取上清液備用。

肝臟、血清中的丙谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活力，以及腸道、肝臟、血清中的酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)活力的測(cè)定均采用南京建成生物研究所的試劑盒。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean ± S.D.) 表示，采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若差異達(dá)到顯著水平，則采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 投喂添加不同藻粉的飼料對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

從表1可見，各種試驗(yàn)魚存活率均為100%，在飼料中添加裂壺藻能顯著提高非洲王子魚的增重率、特定生長(zhǎng)率和飼料效率(P<0.05)，而添加鹽藻、小球藻均對(duì)非洲王子魚的生長(zhǎng)指標(biāo)均無(wú)顯著性影響(P>0.05)。

2.2 投喂添加不同藻粉的飼料對(duì)非洲王子魚體表色素指標(biāo)的影響

2.2.1 非洲王子魚皮膚、鰭條、肌肉中的總類胡蘿卜素含量的變化 從表2可見:在試驗(yàn)進(jìn)行到第15、30、45天時(shí)，裂壺藻組非洲王子魚的皮膚中總類胡蘿卜素含量均顯著高于其他3組(P<0.05)，其余3組之間總類胡蘿卜素含量均無(wú)顯著性差異(P>0.05);在試驗(yàn)進(jìn)行到第15、30天時(shí)，小球藻組非洲王子魚鰭條中總類胡蘿卜素含量最高，且顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，第45天時(shí)，各組間非洲王子魚鰭條中的類胡蘿卜素總含量均無(wú)顯著性差異(P>0.05);在試驗(yàn)進(jìn)行到第15、30天時(shí)，各試驗(yàn)組魚肌肉中總類胡蘿卜素含量與對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，第45天時(shí)，鹽藻組魚肌肉中類胡蘿卜素含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

表1投喂添加鹽藻、裂壺藻、小球藻的飼料對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

Tab.1EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisongrowthperformanceofLabidochromiscaeruleus

組別group增重率/%weight gain rate特定生長(zhǎng)率/(%·d-1)specific growth rate飼料效率/%feed efficiency肥滿度/%condition factor存活率/%survival對(duì)照control40.64±7.80a0.76±0.12a25.86±4.21a3.28±0.35a100裂壺藻Schizochytrium limaci-num54.03±3.68b0.96±0.05b33.26±2.57b3.50±0.46a100鹽藻Dunaliella salina44.23±1.16ab0.81±0.01ab27.71±0.51ab3.44±0.02a100小球藻Chlorella vulgaris51.11±5.34ab0.92±0.08ab32.37±3.53ab3.56±0.47a100

注：同列中標(biāo)有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，標(biāo)有相同小寫字母者表示組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，下同

Note:The means with different letters within the same column are significantly different among the groups at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, et sequentia

表2飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚皮膚、鰭條和肌肉中總類胡蘿卜素含量的影響

Tab.2 Effects of dietary Dunaliella salina, Schizochytrium limacinum and Chlorella vulgaris on carotenoid contents in skin，fin rays，and muscle of Labidochromis caeruleusmg/kg

2.2.2 非洲王子魚體表L*、a*、b*值的變化 從表3可見：除了第45天時(shí)，裂壺藻組非洲王子魚體表色度b*值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)外，其余在第15、30、45天時(shí)，各試驗(yàn)組試驗(yàn)魚體表的L*、a*、b*值與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

2.3 投喂添加不同藻粉的飼料后非洲王子魚部分生化指標(biāo)的變化

2.3.1 非洲王子魚血清、肝臟GOT、GPT活力的變化 從表4可見：添加不同藻粉后,試驗(yàn)魚血清中的GOT、GPT活力均顯著降低；肝臟中GOT活性顯著升高(P<0.05)，而肝臟中GPT活力4組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

2.3.2 非洲王子魚各組織AKP、ACP活力的變化 從表5可見：裂壺藻組肝臟中的AKP、ACP活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，鹽藻組肝臟中的ACP活力也顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；而血清和腸道組織中的AKP和ACP活力與對(duì)照相比，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表3飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚體表L*、a*、b*值的影響

Tab.3EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisonL*,a*,andb*valuesinLabidochromiscaeruleus

指標(biāo) index組別group15 d30 d45 d對(duì)照39.73±1.71a34.90±6.11a30.32±1.07abL*裂壺藻39.37±7.29a35.74±1.95a34.55±2.37a鹽藻38.09±2.47a34.39±7.58a29.69±2.83ab小球藻40.70±3.47a30.00±2.15a24.54±0.97b對(duì)照-2.98±0.20a-2.75±0.57a-2.68±0.29aba*裂壺藻-1.99±1.02a-2.11±0.28a-3.02±0.21b鹽藻-2.65±0.49a-2.17±0.82a-2.29±0.69ab小球藻-2.81±0.12a-1.73±0.15a-1.91±0.44a對(duì)照18.43±2.66a15.29±3.02a11.99±0.55bb*裂壺藻18.51±3.81a 17.36±1.89a16.17±0.74a鹽藻17.01±1.96a15.82±3.83a13.95±3.13ab小球藻18.94±1.89a14.34±0.57a11.64±0.28b

3 討論

3.1 飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)特性的影響

研究發(fā)現(xiàn)，在牙鲆Paralichthysolivaceus飼料中添加2%小球藻可提高魚的生長(zhǎng)及飼料利用率，同時(shí)能夠降低魚體的脂肪含量[11]。石西等[12]利用小球藻作為飼料蛋白源，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鯽Carassiusauratus表現(xiàn)出更好的生長(zhǎng)效果，分析原因，一方面可能是小球藻的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更為全面，富含鯽生長(zhǎng)所需的所有必需氨基酸，另一方面可能是小球藻中含有獨(dú)特的小球藻生長(zhǎng)因子(Chlorella growth factor，CGF)，能夠提高鯽抗氧化能力，增強(qiáng)免疫力，從而促進(jìn)了鯽的健康生長(zhǎng)。劉宏超等[13]對(duì)津新鯉Cyprinuscarpiovar. Jian的研究發(fā)現(xiàn)，在其飼料中添加0.80%～1.20%的裂壺藻可顯著提高津新鯉的生長(zhǎng)性能、抗氧化能力、非特異性免疫力和魚體的抗病力。對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰Ietaluruspunetaus的研究也發(fā)現(xiàn)了類似結(jié)果，添加裂壺藻粉不僅可以增加魚的體質(zhì)量及飼料轉(zhuǎn)化率，還可提高肌肉中DHA 和長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸的水平[14]。此外，焦建剛等[15]對(duì)南美白對(duì)蝦Penaeusvannamei的研究也證實(shí)，裂壺藻可有效降低其飼料系數(shù)，促進(jìn)其生長(zhǎng)，同時(shí)提高肌肉中蛋白質(zhì)及DHA含量。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究相類似，在飼料中添加1%裂壺藻后，非洲王子魚的增重率、特定生長(zhǎng)率和飼料效率均顯著高于對(duì)照組，其原因可能是裂壺藻中富含大量的有益活性物質(zhì)，尤其是DHA 含量極高，可達(dá)35%～40%[16]。而DHA作為許多魚類幼體的必需脂肪酸，直接關(guān)系到其生長(zhǎng)發(fā)育和存活[17]。

表4飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚血清、肝臟GOT、GPT活力的影響

Tab.4EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisonGOTandGPTactivitiesinserumandliverofLabidochromiscaeruleus

組別group血清 serum肝臟 liverGOT/(U·L-1)GPT/(U·L-1)GOT/(U·g-1 prot)GPT/(U·g-1 prot)對(duì)照118.91±5.38a79.54±24.85a178.51±15.29c309.02±85.58a裂壺藻61.34±6.78b35.82±16.79b815.12±88.12a341.25±44.84a鹽藻57.16±0.14b45.28±4.57b868.96±63.73a380.54±29.08a小球藻73.91±13.60b36.81±19.27b410.69±84.09b344.24±53.24a

表5飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚腸道、肝臟和血清中部分酶活力的影響

Tab.5EffectsofdietaryDunaliellasalina,SchizochytriumlimacinumandChlorellavulgarisonAKPandACPactivitiesindifferenttissuesofLabidochromiscaeruleus

組別group腸道intestinal tract肝臟liver血清serumAKP/(U·g-1 prot)ACP/(U·g-1 prot)AKP/(U·g-1 prot)ACP/(U·g-1 prot)AKP/(U·L-1)ACP/(U·L-1)對(duì)照138.19±15.47a576.93±94.46ab14.43±1.86b123.42±20.36b1.89±0.53a33.64±3.83a裂壺藻162.75±17.48a643.91±56.78ab28.79±4.65a270.43±59.53a2.26±0.44a40.84±5.44a鹽藻115.05±39.04a729.76±87.61a25.4±10.18ab279.41±68.93a2.20±0.54a35.10±4.55a小球藻100.76±22.16a537.70±80.52b15.47±5.47ab115.41±0.71b1.81±0.80a41.42±5.86a

3.2 飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚體色的影響

體色是評(píng)判非洲王子魚觀賞價(jià)值的重要標(biāo)準(zhǔn)，而體色是由類胡蘿卜素含量的多少?zèng)Q定的。微藻中含有各種多糖和大量的天然色素，對(duì)于增強(qiáng)水生動(dòng)物的體色具有重要作用[18-19]。陳家鑫[4]將裂壺藻用于大菱鲆Scophthalmusmaximus仔魚的培育，不但提高了仔魚的成活率，而且在仔魚的發(fā)育過程中未出現(xiàn)白化仔魚的現(xiàn)象，其色素細(xì)胞發(fā)育正常。本試驗(yàn)中，在飼料中添加1%裂壺藻的試驗(yàn)組非洲王子魚皮膚中類胡蘿卜素含量顯著高于其他3組，說(shuō)明對(duì)于非洲王子魚而言，裂壺藻具有良好的增色作用，與對(duì)大菱鲆的試驗(yàn)結(jié)果類似。方珍珍等[20]的研究發(fā)現(xiàn)，與辣椒紅相比，鹽藻對(duì)紅白錦鯉的著色效果更好。對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦Penaeusmonodon的研究也發(fā)現(xiàn)，鹽藻能顯著增色[21]。而本試驗(yàn)中，鹽藻對(duì)非洲王子魚增色效果不明顯，這可能與試驗(yàn)魚的種類、年齡、生理狀況和飼料有關(guān)。

魚類體表顏色往往采用肉眼觀察，因而較難準(zhǔn)確評(píng)判，為了建立較科學(xué)的分色評(píng)判系統(tǒng)，在測(cè)定類胡蘿卜素的基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)中測(cè)定了非洲王子魚體表的L*、a*、b*色度值。其結(jié)果顯示，試驗(yàn)進(jìn)行到第45天時(shí)裂壺藻組非洲王子魚的b*值顯著高于對(duì)照組，此時(shí)類胡蘿卜素含量也顯著升高，推測(cè)非洲王子魚體表b*值與其類胡蘿卜素含量可能密切相關(guān)，這與王磊等[22]對(duì)七彩神仙魚S.aequifasciata的研究結(jié)果一致。而其他時(shí)間段的類胡蘿卜素雖然也顯著高于對(duì)照組，但其體表b*值未達(dá)顯著性差異，其原因可能是由于非洲王子魚體表類胡蘿卜素含量積累到一定程度，才能使得體表b*值產(chǎn)生顯著性差異。

3.3 飼料中添加不同藻粉對(duì)非洲王子魚部分生化指標(biāo)的影響

谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶在氨基酸代謝過程中發(fā)揮著重要的作用。GOT、GPT主要存在于肝臟中，正常情況下血清中的活性較低，當(dāng)組織細(xì)胞受損時(shí)，這兩種酶會(huì)從細(xì)胞內(nèi)逸出，然后進(jìn)入血液，進(jìn)而活性升高，因此，血清中GOT和GPT活性可反映肝臟的損傷情況[23]。劉宏超等[13]對(duì)津新鯉的研究發(fā)現(xiàn)，飼料中裂壺藻添加量在0.8%～1.2%時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶活性最低。本試驗(yàn)與上述結(jié)果相類似。添加3種藻后非洲王子魚血清中的GOT、GPT活性均顯著降低，肝臟中的GOT活性升高，說(shuō)明3種藻均能減輕非洲王子魚肝臟的損傷，并減輕應(yīng)激反應(yīng)。

磷酸酶在蛋白酶的去磷酸化過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，AKP和ACP不僅參與一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收、運(yùn)輸，在生物體內(nèi)還起到重要的解毒作用。ACP、AKP能夠殺死外來(lái)入侵的病原體，并能通過修改病原表面分子來(lái)加速吞噬細(xì)胞的吞噬及異物的降解速度，在免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用[24-25]。裂壺藻、鹽藻藻粉作為添加劑加入飼料中投喂動(dòng)物，能夠加強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的非特異性免疫力。黃亮華等[26]的研究表明，裂壺藻能提高刺參的免疫機(jī)能，馮偉等[27]研究表明，裂壺藻可以提高對(duì)蝦的免疫機(jī)能。本試驗(yàn)中，飼料中添加了裂壺藻，試驗(yàn)魚的肝臟AKP、ACP活性顯著升高，說(shuō)明其肝臟的免疫力得到提高。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)中通過在飼料中添加3種不同藻粉連續(xù)投喂非洲王子魚45 d，研究結(jié)果表明：

(1)飼料中添加1%裂壺藻能有效提高非洲王子魚的生長(zhǎng)性能，而鹽藻、小球藻對(duì)非洲王子魚生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響。

(2)飼料中添加1%裂壺藻對(duì)非洲王子魚具有良好增色效果，而鹽藻、小球藻對(duì)非洲王子魚增色效果不明顯。

(3)3種藻對(duì)非洲王子魚肝臟均有保護(hù)作用；添加1%鹽藻、裂壺藻能夠提高其免疫力。