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2019-01-11 17:38:36盧琴羅青平張騰飛羅玲汪宏才王紅琳溫國(guó)元張蓉蓉張文婷邵華斌
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年23期
盧琴 羅青平 張騰飛 羅玲 汪宏才 王紅琳 溫國(guó)元 張蓉蓉 張文婷 邵華斌
摘要：禽致病性大腸桿菌?。ˋvian Pathogenic Escherichia coli，APEC）是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌性病原之一，給養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展帶來(lái)了嚴(yán)重危害。為研究APEC的致病性與耐藥性之間的關(guān)系，從毒力基因的分布、生物膜的形成能力、耐藥基因的分布等三個(gè)方面探討了生物膜的形成能力與毒力基因、耐藥基因在致病性中的作用，為后期研究禽大腸桿菌的致病機(jī)理及耐藥機(jī)制等提供理論基礎(chǔ)，并為開(kāi)展禽大腸桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查及監(jiān)測(cè)、防控禽大腸桿菌病的流行提供理論數(shù)據(jù)。
關(guān)鍵詞：禽致病性大腸桿菌?。ˋvian Pathogenic Escherichia coli，APEC）;生物膜;毒力基因;耐藥基因;致病性
中圖分類(lèi)號(hào)：R378.2+1? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：0439-8114（2019）23-0132-04
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.23.031? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：
Pathogenic effects of biofilm，virulence genes and drug resistance genes on APEC
LU Qin，LUO Qing-ping，ZHANG Teng-fei，LUO Ling，WANG Hong-cai，WANG Hong-lin，
WEN Guo-yuan，ZHANG Rong-rong，ZHANG Wen-ting，SHAO Hua-bin
（Institute of Animal Husbandry and Veterinary，Hubei Academy of Agricultural Scinences/Key Laboratory of Prevention and Control Agents for Animal Bacteriosis，Wuhan 430064，China）
Abstract： Avian Pathogenic Escherichia coli （APEC） is one of the major bacterial pathogens that endangers the development of the poultry industry， and has brought serious harm to the development of the poultry industry. In order to study the relationship between pathogenicity and drug resistance of APEC，the distribution of virulence genes， the biofilm formation ability and the distribution of drug resistance genes were discussed from three aspects，which were the distribution of virulence gene， the ability of biofilm formation and the distribution of drug resistance gene. The results provided a theoretical basis for the later study of the pathogenic mechanism and drug resistance mechanism of avian Escherichia coli， and carried out epidemiological investigation and surveillance of avian colibacillosis， and provided theoretical data for the prevention and control of avian Escherichia coli.
Key words： APEC; biofilm; virulence genes; drug resistance genes; pathogenicity
禽致病性大腸桿菌（Avian Pathogenic Escherichia coli，APEC）是引起雞、火雞及其他禽類(lèi)局部或全身性大腸桿菌病的病原，病理表現(xiàn)為心包炎、肝周炎、腹膜炎、氣囊炎、卵巢輸卵管炎、滑膜炎和敗血癥等癥狀，是目前嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的傳染病之一[1]。1885年德國(guó)小兒科醫(yī)師Escherich自小兒糞便首次發(fā)現(xiàn)大腸桿菌;1894年，Ligniers首次報(bào)道了雞大腸桿菌病，中國(guó)自1982年江蘇省首次報(bào)道該病以來(lái)，目前幾乎所有養(yǎng)禽區(qū)地均因感染禽致病性大腸桿菌造成不可忽視的經(jīng)濟(jì)損失[2]。
研究表明大腸桿菌的致病性與特定的血清型、噬菌體、耐酸堿能力、攝鐵、生物膜的形成能力等有關(guān)，而致病性強(qiáng)的菌株由于在臨床中耐藥性提高，嚴(yán)重影響中國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。而耐藥性增強(qiáng)與生物膜的形成能力、毒力基因、耐藥基因均具有相關(guān)性。
1? 生物膜與APEC致病性的關(guān)系
細(xì)菌生物膜（Bacterial biofilms）又稱(chēng)為生物膜，是單細(xì)胞生物體粘附在固體表面聚集為一個(gè)群落，分泌多糖蛋白、纖維蛋白、脂質(zhì)蛋白等，將自身包裹其中。細(xì)菌生物膜已經(jīng)被證明在許多細(xì)菌中存在，包括大腸桿菌、豬鏈球菌、嗜血桿菌和鴨疫里默氏桿菌等[3]。Lewis[4，5]經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)生物膜與細(xì)菌的耐藥性相關(guān)，當(dāng)細(xì)菌存在于生物膜內(nèi)，對(duì)抗菌劑的抵抗能力顯著增強(qiáng)。主動(dòng)外排系統(tǒng)是指大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)膜存在的能量依懶性蛋白質(zhì)外排泵，通過(guò)主動(dòng)外排作用，可將藥物從菌體內(nèi)排出，使到達(dá)作用靶位點(diǎn)的藥量減少，不足以發(fā)揮殺菌和抑菌作用。由主動(dòng)外排系統(tǒng)介導(dǎo)，阻止藥物在菌體內(nèi)積聚是細(xì)菌產(chǎn)生多重耐藥性的機(jī)制之一。OmpA參與合成外膜蛋白，與禽大腸桿菌的致病性有密切聯(lián)系，上述研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外對(duì)APEC的毒力基因檢測(cè)結(jié)果一致[6，7]。大腸桿菌的外膜對(duì)許多抗生素的通透性較低，形成屏障，阻礙抗菌藥物進(jìn)入菌體細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抗菌作用。大腸桿菌外膜上存在的多種外膜蛋白質(zhì)，對(duì)大多數(shù)疏水性藥物具有良好的通透性。生物膜陽(yáng)性菌株的致病力強(qiáng)于生物膜陰性菌株，這為臨床預(yù)防仔豬腹瀉病提供了理論依據(jù)[8]。生物膜是威脅人類(lèi)健康的殺手之一，根據(jù)CDC統(tǒng)計(jì)人類(lèi)約65%的細(xì)菌感染性疾病與生物膜形成有關(guān)，也有研究認(rèn)為約80%的細(xì)菌性疾病與生物膜有關(guān)[9，10]。細(xì)菌一旦形成生物膜，其耐藥性可增強(qiáng)100～1 000倍，能夠抵抗機(jī)體免疫力和抗生素的侵害引起反復(fù)感染，大腸桿菌能在口腔、尿道、生殖道、腸道形成生物膜導(dǎo)致反復(fù)感染[11-13]。
2? 毒力基因與APEC致病性的關(guān)系
大腸桿菌的致病性與毒力基因的關(guān)系已成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。Germon[14]、Huang[15]研究ibeA基因?qū)PEC的毒力作用，結(jié)果證明，敲除APEC-BEN2908菌株中的ibeA基因能導(dǎo)致毒力明顯下降。Kmet等[16]研究白嘴鴉大腸桿菌的致病性和耐藥性，結(jié)果表明與致病性相關(guān)的毒力因子為iutA、cvaC、iss、tsh、ibeA基因，內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因主要為CTX-M、CMY，喹諾酮類(lèi)耐藥基因?yàn)閝nrS、integrase1等，對(duì)氨芐西林、鏈霉素、環(huán)丙沙星呈現(xiàn)不同程度的耐藥。Mohamed等[17]對(duì)肉雞大腸桿菌的毒力因子和耐藥性關(guān)系研究，得出其主要的毒力因子為tsh、papC、colV和iss基因，96%的試驗(yàn)菌株對(duì)諾氟沙星高度耐藥。Maud等[18]研究表明ibeA能增加大腸桿菌對(duì)H2O2的抵抗力，能部分解釋ibeA在致病性菌株毒力的作用。喻華英等[19]證實(shí)細(xì)菌粘附結(jié)構(gòu)fimH基因和fliC基因是影響大腸桿菌形成生物膜的主要粘附結(jié)構(gòu)毒力基因，其次是大腸桿菌毒力因子KpsMTII基因，最后是外膜蛋白血紅素chuA基因。95%的大腸桿菌分離株可表達(dá)I型菌毛。fimH基因（Type 1 fimbria）為編碼1型菌毛粘附素基因，其作用為大腸桿菌菌毛介導(dǎo)結(jié)合受體結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌侵入各種宿主組織[20，21]。FliC是編碼鞭毛絲結(jié)構(gòu)蛋白基因，是鞭毛組成的基本亞基，能形成大腸桿菌的鞭毛結(jié)構(gòu)[22]。高清清[23]、Gao等[24]對(duì)SPF雞致病試驗(yàn)表明，介導(dǎo)沙門(mén)菌素?cái)z鐵的iroD基因和編碼氣桿菌素合成的iucD基因與APEC和UPEC致病性有較強(qiáng)的相關(guān)性。Lise等[25]證明敲除掉mliC基因后APEC菌株的毒力下降。iss基因存在于ColV質(zhì)粒上，其編碼的蛋白iss屬于外膜蛋白的一部分，與細(xì)菌抗補(bǔ)體作用有關(guān)，可增強(qiáng)大腸桿菌血清抗性[26，27]。iss在APEC中的檢測(cè)率更高，其可能是APEC的一個(gè)重要致病因子[28，29]，促使APEC能夠在宿主體內(nèi)迅速增殖。
3? 耐藥基因與APEC致病性的關(guān)系
對(duì)于大腸桿菌病的治療，一般采用β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)及磺胺類(lèi)藥物，故本研究以β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)及磺胺類(lèi)藥物的主要耐藥基因（β-內(nèi)酰胺類(lèi)TEM、CTX-M，四環(huán)素類(lèi)tetA、tetB，喹諾酮類(lèi)gyrA、gyrB，磺胺類(lèi)sul1、sul2）進(jìn)行研究，探討APEC毒力因子的致病作用是否與耐藥基因所占比重相關(guān)。武瑞兵等[30]根據(jù)耐藥表型檢測(cè)了耐四環(huán)素菌中tetA、tetB和tetC基因，結(jié)果表明tetA基因是所有四環(huán)素耐藥基因中最為流行的一種基因（占55%）;耐磺胺類(lèi)藥菌中sul1、sul2和sul3基因中sul2基因在耐磺胺異惡唑菌中的檢出率最高（占77%）;β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥基因中最流行的為T(mén)EM1基因（占73%）。四環(huán)素耐藥性主要由tetA和tetB基因編碼，這一發(fā)現(xiàn)已經(jīng)在分離自畜牧業(yè)生產(chǎn)和食用動(dòng)物的大腸桿菌中被證實(shí)[31]。張揚(yáng)等[32]的研究表明tetA和tetB基因也幾乎均勻地分布于15個(gè)ERIC型菌株中，說(shuō)明tetA和tetB基因在菌株間主要是水平傳播。肺炎克雷伯菌對(duì)喹諾酮類(lèi)耐藥與多種基因突變相關(guān)，最主要的是gyrA基因突變[33]。目前已發(fā)現(xiàn)的喹諾酮類(lèi)抗生素的耐藥基因主要包括gyrA、gyrB、qnrA1、qnrB、qnrS1、qeqA和aac（6，）Ib-Cr等[34-36]。有研究表明，動(dòng)物源性磺胺類(lèi)耐藥基因sulR（sul1、sul2、sul3）很有可能轉(zhuǎn)移到人的共生菌大腸桿菌中，并引起泌尿道感染[37]。有研究表明sul1與Ⅰ型整合子高度相關(guān)，近年來(lái)Ⅰ型整合子的檢出率不斷上升，整合子在細(xì)菌間的轉(zhuǎn)移又十分頻繁和廣泛，不僅可以在同種細(xì)菌間轉(zhuǎn)移，還在不同種細(xì)菌間轉(zhuǎn)移，sul1則通過(guò)整合子在菌群間傳播[38]。sul2主要位于質(zhì)粒上，質(zhì)粒作為可移動(dòng)元件在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移也十分頻繁，sul2隨著質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移而向外傳播。有研究表明sul1和sul2在磺胺類(lèi)耐藥菌株的產(chǎn)生中起重要作用[39-41]。細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素產(chǎn)生耐藥性主要機(jī)理是其產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases，ESBLs）編碼ESBLs的基因位于細(xì)菌攜帶的質(zhì)粒上，常參與細(xì)菌的多重耐藥?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的ESBLs基因主要包括TEM、SHV、CTX-M、OXA和其他型等[42]。Paterson等[43]的研究表明有75株受試菌種有57株擴(kuò)增出TEM型基因，29株擴(kuò)增出CTX-M型基因。中國(guó)已報(bào)道的基因型包括CTX-M-14、CTX-M-64、TEM-1型和SHV-2等，不同基因亞型菌株間的耐藥性差異及耐藥基因傳播機(jī)制等還需進(jìn)一步研究[44，45]。
在后期的試驗(yàn)中可結(jié)合特定的血清型、毒力基因的類(lèi)型、鐵離子攝取系統(tǒng)、噬菌體、生物膜的形成能力、動(dòng)物試驗(yàn)和耐藥基因及藥敏試驗(yàn)等去探討致病耐藥性增強(qiáng)與特定的血清型有沒(méi)有相關(guān)性，毒力基因的分布及研究中的哪種毒力基因在致病耐藥性中占主導(dǎo)作用，為全面闡明APEC毒力基因的致病機(jī)理和耐藥機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
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盧琴 羅青平 張騰飛 羅玲 汪宏才 王紅琳 溫國(guó)元 張蓉蓉 張文婷 邵華斌
摘要：禽致病性大腸桿菌?。ˋvian Pathogenic Escherichia coli，APEC）是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要細(xì)菌性病原之一，給養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展帶來(lái)了嚴(yán)重危害。為研究APEC的致病性與耐藥性之間的關(guān)系，從毒力基因的分布、生物膜的形成能力、耐藥基因的分布等三個(gè)方面探討了生物膜的形成能力與毒力基因、耐藥基因在致病性中的作用，為后期研究禽大腸桿菌的致病機(jī)理及耐藥機(jī)制等提供理論基礎(chǔ)，并為開(kāi)展禽大腸桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查及監(jiān)測(cè)、防控禽大腸桿菌病的流行提供理論數(shù)據(jù)。
關(guān)鍵詞：禽致病性大腸桿菌?。ˋvian Pathogenic Escherichia coli，APEC）;生物膜;毒力基因;耐藥基因;致病性
中圖分類(lèi)號(hào)：R378.2+1? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：0439-8114（2019）23-0132-04
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.23.031? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：
Pathogenic effects of biofilm，virulence genes and drug resistance genes on APEC
LU Qin，LUO Qing-ping，ZHANG Teng-fei，LUO Ling，WANG Hong-cai，WANG Hong-lin，
WEN Guo-yuan，ZHANG Rong-rong，ZHANG Wen-ting，SHAO Hua-bin
（Institute of Animal Husbandry and Veterinary，Hubei Academy of Agricultural Scinences/Key Laboratory of Prevention and Control Agents for Animal Bacteriosis，Wuhan 430064，China）
Abstract： Avian Pathogenic Escherichia coli （APEC） is one of the major bacterial pathogens that endangers the development of the poultry industry， and has brought serious harm to the development of the poultry industry. In order to study the relationship between pathogenicity and drug resistance of APEC，the distribution of virulence genes， the biofilm formation ability and the distribution of drug resistance genes were discussed from three aspects，which were the distribution of virulence gene， the ability of biofilm formation and the distribution of drug resistance gene. The results provided a theoretical basis for the later study of the pathogenic mechanism and drug resistance mechanism of avian Escherichia coli， and carried out epidemiological investigation and surveillance of avian colibacillosis， and provided theoretical data for the prevention and control of avian Escherichia coli.
Key words： APEC; biofilm; virulence genes; drug resistance genes; pathogenicity
禽致病性大腸桿菌（Avian Pathogenic Escherichia coli，APEC）是引起雞、火雞及其他禽類(lèi)局部或全身性大腸桿菌病的病原，病理表現(xiàn)為心包炎、肝周炎、腹膜炎、氣囊炎、卵巢輸卵管炎、滑膜炎和敗血癥等癥狀，是目前嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的傳染病之一[1]。1885年德國(guó)小兒科醫(yī)師Escherich自小兒糞便首次發(fā)現(xiàn)大腸桿菌;1894年，Ligniers首次報(bào)道了雞大腸桿菌病，中國(guó)自1982年江蘇省首次報(bào)道該病以來(lái)，目前幾乎所有養(yǎng)禽區(qū)地均因感染禽致病性大腸桿菌造成不可忽視的經(jīng)濟(jì)損失[2]。
研究表明大腸桿菌的致病性與特定的血清型、噬菌體、耐酸堿能力、攝鐵、生物膜的形成能力等有關(guān)，而致病性強(qiáng)的菌株由于在臨床中耐藥性提高，嚴(yán)重影響中國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。而耐藥性增強(qiáng)與生物膜的形成能力、毒力基因、耐藥基因均具有相關(guān)性。
1? 生物膜與APEC致病性的關(guān)系
細(xì)菌生物膜（Bacterial biofilms）又稱(chēng)為生物膜，是單細(xì)胞生物體粘附在固體表面聚集為一個(gè)群落，分泌多糖蛋白、纖維蛋白、脂質(zhì)蛋白等，將自身包裹其中。細(xì)菌生物膜已經(jīng)被證明在許多細(xì)菌中存在，包括大腸桿菌、豬鏈球菌、嗜血桿菌和鴨疫里默氏桿菌等[3]。Lewis[4，5]經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)生物膜與細(xì)菌的耐藥性相關(guān)，當(dāng)細(xì)菌存在于生物膜內(nèi)，對(duì)抗菌劑的抵抗能力顯著增強(qiáng)。主動(dòng)外排系統(tǒng)是指大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)膜存在的能量依懶性蛋白質(zhì)外排泵，通過(guò)主動(dòng)外排作用，可將藥物從菌體內(nèi)排出，使到達(dá)作用靶位點(diǎn)的藥量減少，不足以發(fā)揮殺菌和抑菌作用。由主動(dòng)外排系統(tǒng)介導(dǎo)，阻止藥物在菌體內(nèi)積聚是細(xì)菌產(chǎn)生多重耐藥性的機(jī)制之一。OmpA參與合成外膜蛋白，與禽大腸桿菌的致病性有密切聯(lián)系，上述研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)外對(duì)APEC的毒力基因檢測(cè)結(jié)果一致[6，7]。大腸桿菌的外膜對(duì)許多抗生素的通透性較低，形成屏障，阻礙抗菌藥物進(jìn)入菌體細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮抗菌作用。大腸桿菌外膜上存在的多種外膜蛋白質(zhì)，對(duì)大多數(shù)疏水性藥物具有良好的通透性。生物膜陽(yáng)性菌株的致病力強(qiáng)于生物膜陰性菌株，這為臨床預(yù)防仔豬腹瀉病提供了理論依據(jù)[8]。生物膜是威脅人類(lèi)健康的殺手之一，根據(jù)CDC統(tǒng)計(jì)人類(lèi)約65%的細(xì)菌感染性疾病與生物膜形成有關(guān)，也有研究認(rèn)為約80%的細(xì)菌性疾病與生物膜有關(guān)[9，10]。細(xì)菌一旦形成生物膜，其耐藥性可增強(qiáng)100～1 000倍，能夠抵抗機(jī)體免疫力和抗生素的侵害引起反復(fù)感染，大腸桿菌能在口腔、尿道、生殖道、腸道形成生物膜導(dǎo)致反復(fù)感染[11-13]。
2? 毒力基因與APEC致病性的關(guān)系
大腸桿菌的致病性與毒力基因的關(guān)系已成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。Germon[14]、Huang[15]研究ibeA基因?qū)PEC的毒力作用，結(jié)果證明，敲除APEC-BEN2908菌株中的ibeA基因能導(dǎo)致毒力明顯下降。Kmet等[16]研究白嘴鴉大腸桿菌的致病性和耐藥性，結(jié)果表明與致病性相關(guān)的毒力因子為iutA、cvaC、iss、tsh、ibeA基因，內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥基因主要為CTX-M、CMY，喹諾酮類(lèi)耐藥基因?yàn)閝nrS、integrase1等，對(duì)氨芐西林、鏈霉素、環(huán)丙沙星呈現(xiàn)不同程度的耐藥。Mohamed等[17]對(duì)肉雞大腸桿菌的毒力因子和耐藥性關(guān)系研究，得出其主要的毒力因子為tsh、papC、colV和iss基因，96%的試驗(yàn)菌株對(duì)諾氟沙星高度耐藥。Maud等[18]研究表明ibeA能增加大腸桿菌對(duì)H2O2的抵抗力，能部分解釋ibeA在致病性菌株毒力的作用。喻華英等[19]證實(shí)細(xì)菌粘附結(jié)構(gòu)fimH基因和fliC基因是影響大腸桿菌形成生物膜的主要粘附結(jié)構(gòu)毒力基因，其次是大腸桿菌毒力因子KpsMTII基因，最后是外膜蛋白血紅素chuA基因。95%的大腸桿菌分離株可表達(dá)I型菌毛。fimH基因（Type 1 fimbria）為編碼1型菌毛粘附素基因，其作用為大腸桿菌菌毛介導(dǎo)結(jié)合受體結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌侵入各種宿主組織[20，21]。FliC是編碼鞭毛絲結(jié)構(gòu)蛋白基因，是鞭毛組成的基本亞基，能形成大腸桿菌的鞭毛結(jié)構(gòu)[22]。高清清[23]、Gao等[24]對(duì)SPF雞致病試驗(yàn)表明，介導(dǎo)沙門(mén)菌素?cái)z鐵的iroD基因和編碼氣桿菌素合成的iucD基因與APEC和UPEC致病性有較強(qiáng)的相關(guān)性。Lise等[25]證明敲除掉mliC基因后APEC菌株的毒力下降。iss基因存在于ColV質(zhì)粒上，其編碼的蛋白iss屬于外膜蛋白的一部分，與細(xì)菌抗補(bǔ)體作用有關(guān)，可增強(qiáng)大腸桿菌血清抗性[26，27]。iss在APEC中的檢測(cè)率更高，其可能是APEC的一個(gè)重要致病因子[28，29]，促使APEC能夠在宿主體內(nèi)迅速增殖。
3? 耐藥基因與APEC致病性的關(guān)系
對(duì)于大腸桿菌病的治療，一般采用β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)及磺胺類(lèi)藥物，故本研究以β-內(nèi)酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)及磺胺類(lèi)藥物的主要耐藥基因（β-內(nèi)酰胺類(lèi)TEM、CTX-M，四環(huán)素類(lèi)tetA、tetB，喹諾酮類(lèi)gyrA、gyrB，磺胺類(lèi)sul1、sul2）進(jìn)行研究，探討APEC毒力因子的致病作用是否與耐藥基因所占比重相關(guān)。武瑞兵等[30]根據(jù)耐藥表型檢測(cè)了耐四環(huán)素菌中tetA、tetB和tetC基因，結(jié)果表明tetA基因是所有四環(huán)素耐藥基因中最為流行的一種基因（占55%）;耐磺胺類(lèi)藥菌中sul1、sul2和sul3基因中sul2基因在耐磺胺異惡唑菌中的檢出率最高（占77%）;β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物耐藥基因中最流行的為T(mén)EM1基因（占73%）。四環(huán)素耐藥性主要由tetA和tetB基因編碼，這一發(fā)現(xiàn)已經(jīng)在分離自畜牧業(yè)生產(chǎn)和食用動(dòng)物的大腸桿菌中被證實(shí)[31]。張揚(yáng)等[32]的研究表明tetA和tetB基因也幾乎均勻地分布于15個(gè)ERIC型菌株中，說(shuō)明tetA和tetB基因在菌株間主要是水平傳播。肺炎克雷伯菌對(duì)喹諾酮類(lèi)耐藥與多種基因突變相關(guān)，最主要的是gyrA基因突變[33]。目前已發(fā)現(xiàn)的喹諾酮類(lèi)抗生素的耐藥基因主要包括gyrA、gyrB、qnrA1、qnrB、qnrS1、qeqA和aac（6，）Ib-Cr等[34-36]。有研究表明，動(dòng)物源性磺胺類(lèi)耐藥基因sulR（sul1、sul2、sul3）很有可能轉(zhuǎn)移到人的共生菌大腸桿菌中，并引起泌尿道感染[37]。有研究表明sul1與Ⅰ型整合子高度相關(guān)，近年來(lái)Ⅰ型整合子的檢出率不斷上升，整合子在細(xì)菌間的轉(zhuǎn)移又十分頻繁和廣泛，不僅可以在同種細(xì)菌間轉(zhuǎn)移，還在不同種細(xì)菌間轉(zhuǎn)移，sul1則通過(guò)整合子在菌群間傳播[38]。sul2主要位于質(zhì)粒上，質(zhì)粒作為可移動(dòng)元件在細(xì)菌間轉(zhuǎn)移也十分頻繁，sul2隨著質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移而向外傳播。有研究表明sul1和sul2在磺胺類(lèi)耐藥菌株的產(chǎn)生中起重要作用[39-41]。細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素產(chǎn)生耐藥性主要機(jī)理是其產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases，ESBLs）編碼ESBLs的基因位于細(xì)菌攜帶的質(zhì)粒上，常參與細(xì)菌的多重耐藥?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的ESBLs基因主要包括TEM、SHV、CTX-M、OXA和其他型等[42]。Paterson等[43]的研究表明有75株受試菌種有57株擴(kuò)增出TEM型基因，29株擴(kuò)增出CTX-M型基因。中國(guó)已報(bào)道的基因型包括CTX-M-14、CTX-M-64、TEM-1型和SHV-2等，不同基因亞型菌株間的耐藥性差異及耐藥基因傳播機(jī)制等還需進(jìn)一步研究[44，45]。
在后期的試驗(yàn)中可結(jié)合特定的血清型、毒力基因的類(lèi)型、鐵離子攝取系統(tǒng)、噬菌體、生物膜的形成能力、動(dòng)物試驗(yàn)和耐藥基因及藥敏試驗(yàn)等去探討致病耐藥性增強(qiáng)與特定的血清型有沒(méi)有相關(guān)性，毒力基因的分布及研究中的哪種毒力基因在致病耐藥性中占主導(dǎo)作用，為全面闡明APEC毒力基因的致病機(jī)理和耐藥機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
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