鹽酸沃尼妙林應(yīng)用于家禽的研究進展

王 娟，栗棲鳳，劉桂蘭，李 梁，劉愛玲，呂 莉

(1.瑞普(天津)生物藥業(yè)有限公司，天津 300300；2.天津渤海農(nóng)牧產(chǎn)業(yè)聯(lián)合研究院有限公司，天津 300308；3.天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司，天津 300308)

沃尼妙林(Valnemulin)是截短側(cè)耳素(pleuromutilin)類的新一代動物專用半合成抗生素，屬于二萜烯類，與泰妙菌素同屬一類。沃尼妙林具有抗菌活性強，抗菌譜廣等特點，其可以通過結(jié)合病原微生物核糖體上的50S亞基，抑制病原微生物蛋白質(zhì)的合成，從而達到抗菌作用[1-2]。1984年，該藥由Sandoz公司首次合成，且主要用于豬細菌性疾病的防治[3]。1999年，歐盟批準了瑞士諾華公司的鹽酸沃尼妙林預(yù)混劑，商品名為Econor，主要用于預(yù)防和治療由豬痢疾短螺旋體感染引起的豬痢疾以及由肺炎支原體感染引起的豬地方性肺炎[4]。2004年1月歐盟批準增加了沃尼妙林的適應(yīng)癥，可用于預(yù)防結(jié)腸菌毛樣短螺旋體感染引起的豬結(jié)腸螺旋體病(豬結(jié)腸炎colitis)和由胞內(nèi)勞森菌引起的豬增生性腸炎(豬回腸炎ileitis)[5]。

關(guān)于鹽酸沃尼妙林，國內(nèi)外的專家學者在不同靶動物上開展了藥動學、藥效學、分布及代謝的若干研究，其中涉及到的動物有大鼠[6]、犬[6]、肉雞[7-8]、番鴨[9]、豬[10-11]和蛋雞[12]，并取得了一定的研究成果。目前該藥僅被批準用于豬和兔，尚未獲批應(yīng)用于家禽?；诖耍疚木望}酸沃尼妙林在家禽上的主要研究結(jié)果進行相關(guān)概述。

1 基礎(chǔ)信息

為保證沃尼妙林的穩(wěn)定性，臨床上一般常用其鹽酸鹽形式，即鹽酸沃尼妙林。鹽酸沃尼妙林的分子式為C31H53ClN2O5S，相對分子量為601.3，呈白色或淡黃色結(jié)晶性粉末狀，有引濕性，在水、無水乙醇中易溶，在叔丁基甲醚中不溶，比旋度為+15.5～+18°，pH值為3.0～6.0。鹽酸沃尼妙林對存放環(huán)境的要求較為嚴格，當光照或濕度較大時，其穩(wěn)定性較差，因此，需要在密封、避光、干燥條件下貯藏，其制劑一般采用包被技術(shù)[13]。

2 藥效學

鹽酸沃尼妙林的抗菌譜較廣，抗菌活性比較強，主要對金黃色葡萄球菌、鏈球菌等革蘭氏陽性菌、肺炎支原體、螺旋體等有較強抑制作用，但是對革蘭氏陰性菌，如大腸桿菌、沙門氏菌等抗菌活性較弱。

Hannan等[1]研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸沃尼妙林對豬肺炎支原體的MIC值為0.0005 μg/mL，對豬滑液支原體的MIC值為0.0001～0.00025 μg/mL；Karlsson M等[14]發(fā)現(xiàn)該藥對豬痢疾短螺旋體的MIC值為0.016～1 μg/mL。

多位學者通過對不同地區(qū)的雞毒支原體(Mycoplasmagalliscepticum，MG)進行分離后，測定其對不同藥物的敏感性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：泰樂菌素、泰妙菌素、多西環(huán)素是臨床防治支原體的高敏感性藥物[15-18]。另外，Jordan等[19]研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸沃尼妙林對不同MG分離株的MIC值<0.008 μg/mL，低于泰妙菌素、泰樂菌素、恩諾沙星及林可霉素/大觀霉素的MIC值，因此可知，鹽酸沃尼妙林在臨床防治支原體方面敏感性更高。隋兆峰等[20]在2013-2015年期間研究了從山東不同地區(qū)分離鑒定的33株MG，并對其耐藥性進行測定，結(jié)果顯示，鹽酸沃尼妙林、延胡索酸泰妙菌素、多西環(huán)素敏感性最高，MIC平均值分別為0.028、0.167和0.29 μg/mL。結(jié)合以上研究結(jié)果，綜合分析后認為鹽酸沃尼妙林可以用于預(yù)防及治療由MG感染引起的家禽慢性呼吸道疾病。

Jordan等[19]認為，對于預(yù)防性治療由MG引起的疾病，可以長期給予相對較低的劑量，飲水中的添加量為50～500 mg/L的鹽酸沃尼妙林時會有比較明顯的臨床效果，建議最佳添加量的范圍為100～300 mg/L。孟志敏等[21]通過體外抑菌試驗證實，鹽酸沃尼妙林與延胡索酸泰妙菌素均對雞毒支原體MG S6有抑制作用，且鹽酸沃尼妙林(MIC值為0.0075 μg/mL)的抑制作用優(yōu)于延胡索酸泰妙菌素(MIC值為0.015 μg/mL)；同時，其人工感染雞后的治療試驗結(jié)果顯示，鹽酸沃尼妙林治療雞慢性呼吸道病的效果優(yōu)于延胡索酸泰妙菌素，臨床推薦劑量為160 mg/L(以鹽酸沃尼妙林計)時，能明顯提高感染雞的成活率及平均增重，顯著降低氣囊的病理損傷程度及抗體檢出率。

Nan Z等[22]采用突變選擇窗(MSW)測定法研究了5種藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生抗藥性的傾向，結(jié)果顯示鹽酸沃尼妙林的MPC/MIC99比值最低。該指數(shù)越低，MSW越窄，說明鹽酸沃尼妙林在臨床使用過程中產(chǎn)生耐藥菌株的可能性越小，從而說明鹽酸沃尼妙林相較于其他抗支原體藥物更適合用于臨床上對MG的預(yù)防及治療。

雞滑液囊支原體病又稱傳染性滑膜炎，是由雞滑液囊支原體(Mycoplasmasynoviae，MS)所引起的蛋雞和肉雞的一種急性或慢性呼吸道和滑液囊傳染病。目前該病主要發(fā)生在肉雞和肉種雞上，蛋雞發(fā)生該病的幾率很小，死亡率和發(fā)病率不高，但是該病對肉雞的生產(chǎn)性能和蛋雞的產(chǎn)蛋率影響較大。石曉磊[23]通過微量稀釋法篩選敏感藥物時發(fā)現(xiàn)，MS分離株對酒石酸泰萬菌素、酒石酸泰樂菌素、鹽酸沃尼妙林等藥物最為敏感，認為藥物治療是控制已感染雞群的最佳方案。劉軼秋等[24]通過體外抑菌試驗表明，恩諾沙星與鹽酸沃尼妙林聯(lián)合表現(xiàn)出無相關(guān)作用，為臨床聯(lián)合用藥提供了指引。

3 藥動學

目前關(guān)于鹽酸沃尼妙林應(yīng)用于家禽體內(nèi)藥動學方面的報道有限，歐洲藥品評價局(European Medicines Agency，EMA)對鹽酸沃尼妙林在動物體內(nèi)的藥動學過程做了簡單說明：鹽酸沃尼妙林在動物體內(nèi)吸收迅速，分布廣泛，生物利用度接近100%。

據(jù)EMA報道，豬內(nèi)服給藥時，沃尼妙林血藥濃度達峰時間(Tmax)在1 ～ 4 h，血漿半衰期(t1/2β)為1.3～2.7 h；血漿藥物濃度與給藥劑量呈線性關(guān)系，存在肝腸循環(huán)，首過效應(yīng)明顯，而且給藥途徑對血漿濃度影響較大，同時沃尼妙林在肺組織中有較高的藥物濃度，一般高出血漿濃度幾倍，其發(fā)揮作用的靶器官主要為肺[6]。

鹽酸沃尼妙林在肉雞[7]、番鴨[9]、蛋雞[12]體內(nèi)的藥動學也有相關(guān)研究報道，三項研究均采用單劑量靜注、肌注、口服動物給藥，給藥劑量(以沃尼妙林計)分別為10、15和15 mg/kg.bw?？诜o藥后三者的藥動學數(shù)據(jù)如下：t1/2β分別為6.70±0.63、4.83±1.81、5.44±2.77 h，根據(jù)研究結(jié)果的消除半衰期可以看出，在雞鴨體內(nèi)，鹽酸沃尼妙林屬于快速消除藥物。Tmax分別為1.38±0.21、1.80±0.68、1.04±0.03 h，達峰濃度Cmax分別為0.81±0.08、0.12±0.02和1.0±0.3 μg/mL，與曾東平[25]給豬按10.5 mg/kg.bw口服鹽酸沃尼妙林包衣制劑時Tmax為1.70±0.04 h、Cmax為1.35±0.06 μg/mL相比，說明了鹽酸沃尼妙林在家禽和豬體內(nèi)的吸收速度相類似，但在豬體內(nèi)的吸收程度要比在家禽高。血藥濃度-時間曲線下面積AUC分別為6.12±0.67、1.05±0.17和1.05±0.17 ug·h/mL，絕對生物利用度F分別為：74.42%、36.68%、52.64%。由以上主要藥動學參數(shù)可以看出，鹽酸沃尼妙林在家禽體內(nèi)與豬體內(nèi)一樣吸收迅速，且分布廣泛，雖然在家禽體內(nèi)的生物利用度低于豬，但臨床使用效果較好。Wang R[7]和Sun F[12]等研究采用口服給藥研究時，鹽酸沃尼妙林藥時曲線出現(xiàn)雙峰/多峰現(xiàn)象，血藥濃度較低，但有效血藥濃度維持時間較長。

Xiao X等[26]通過體內(nèi)藥動藥效(PK/PD)同步模型來研究鹽酸沃尼妙林對MG的藥效作用特征。經(jīng)計算，最終推薦對于MIC90等于或低于0.024 mg/L的機體，可達到殺菌效果及消除MG效果的劑量濃度為12.4和18.3 mg·kg-1·d-1。

4 藥物殘留

關(guān)于鹽酸沃尼妙林在家禽體內(nèi)的藥物殘留情況，Rui W[27]、Sun J[9]、Sun F[12]等也開展了相關(guān)研究，三項研究中均采用多劑量口服給藥，給藥劑量(以沃尼妙林計)分別為10、15和15 mg/kg.bw，試驗動物分別為肉雞、番鴨、蛋雞。三者研究結(jié)論基本一致：鹽酸沃尼妙林在家禽各組織中的殘留分布不均，在組織分布中廣泛，尤其是肺臟中含量最高，是藥物作用的靶器官；各組織中的鹽酸沃尼妙林在4～12 h之間消除迅速，其殘留濃度高低順序為：肺>肝>腎>皮脂>肌肉。根據(jù)鹽酸沃尼妙林在家禽體內(nèi)的藥物動力學特征和組織中的殘留消除特點，對家禽多劑量(10～15 mg/kg·bw)口服鹽酸沃尼妙林后，均建議休藥期為2 d。

于倩倩等[28]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)建立了檢測豬肉樣品中鹽酸沃尼妙林殘留的方法，方法簡便迅速且穩(wěn)定準確，可為其它靶動物的肌肉殘留檢測提供一定的理論指導(dǎo)。畢言鋒等[29]通過給大鼠口服鹽酸沃尼妙林(20 mg/kg)，采集給藥前后尿液樣品，通過利用超高效液相色譜/四級桿-飛行時間質(zhì)譜(UPLC/Q-TOF MS)對大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進行分析，最終鑒定了5種代謝產(chǎn)物，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)該藥物是通過母核羥基化和側(cè)鏈硫醚鍵氧化產(chǎn)生代謝，同時表明，大鼠口服鹽酸沃尼妙林后，藥物在體內(nèi)可迅速代謝，母核羥基化是該藥物代謝的主要途徑。但是關(guān)于鹽酸沃尼妙林在家禽體內(nèi)代謝物的研究，目前尚無相關(guān)文獻報道。

5 毒理學

根據(jù)上述藥效、藥動學研究結(jié)果可以看出，口服鹽酸沃尼妙林制劑時，15 mg/kg.bw(以鹽酸沃尼妙林計)的給藥劑量對一般家禽是有效的。但此劑量下的動物組織的病理變化及更高劑量的安全性尚無系統(tǒng)的研究結(jié)果呈現(xiàn)。李朋朋[30]開展了鹽酸沃尼妙林在豬體內(nèi)的臨床療效和安全性研究，其靶動物安全性試驗結(jié)果表明，臨床推薦10倍劑量應(yīng)用時，對豬的采食量、日增重及血液生化指標有一定影響，但未達到顯著差異。

EMA報道[6]，豬每天拌料飼喂75 mg/kg.bw(以鹽酸沃尼妙林計)，連用28 d后觀察發(fā)現(xiàn)，豬的健康狀況良好、糞便無異常、增重正常且沒有觀察到任何毒性反應(yīng)。急性毒性研究結(jié)果顯示，鹽酸沃尼妙林毒性低，大鼠口服半數(shù)致死量(LD50)的范圍是1000～2000 mg/kg.bw，雌、雄小鼠的LD50分別是1482和1710 mg/kg.bw。鹽酸沃尼妙林中毒的明顯癥狀有活動量減少、豎毛、共濟失調(diào)、呼吸困難等。亞慢性毒性試驗結(jié)果顯示：給大鼠每日口服0、1、20、200 mg/kg.bw的鹽酸沃尼妙林，連用13周后發(fā)現(xiàn)，最高劑量組(200 mg/kg.bw)導(dǎo)致大鼠體重及食欲明顯下降，生化指標呈明顯異常變化，剖檢后可見肝損傷及甲狀腺濾泡上有增生。鹽酸沃尼妙林對兔的毒性較大，但毒理作用機理尚不清楚。由以上數(shù)據(jù)可以看出鹽酸沃尼妙林對動物的毒性可能具有種屬差異性。

Boxall等[31]應(yīng)用模型預(yù)測了鹽酸沃尼妙林在土壤、地下水中的環(huán)境濃度，從而評估該藥的環(huán)境風險，其結(jié)果表明鹽酸沃尼妙林不存在環(huán)境風險。

6 展 望

鹽酸沃尼妙林的抗菌活性較強，明顯優(yōu)于泰妙菌素、泰樂菌素等常用支原體防治藥物，作為一種優(yōu)良的動物專用抗生素，不僅能夠防治疾病，而且具有無毒、無殘留、無污染等優(yōu)點，其在家畜(豬)的臨床應(yīng)用效果已經(jīng)得到了廣泛認可。目前在家禽上的應(yīng)用雖然沒有獲批，但在家禽上的探索性研究，相關(guān)體內(nèi)和體外試驗結(jié)果均已確認了該藥對雞毒支原體、滑液囊支原體十分敏感，由雞毒支原體引發(fā)的慢性呼吸道疾病及滑液囊支原體引起關(guān)節(jié)炎的臨床療效也已經(jīng)通過試驗得到了確認。隨著防治家禽支原體藥物耐藥性的逐漸凸顯，鹽酸沃尼妙林在家禽上的合法使用也越來越被養(yǎng)殖者所期待！