σA蛋白表位在鴨和禽呼腸孤病毒感染中的血清學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)用

鴨呼腸孤病毒(Duck Reovirus,DRV)是呼腸孤病毒科正呼腸孤病毒屬的一員，基因組由10 個(gè)分節(jié)段的雙鏈RNA 構(gòu)成；DRV 目前分為經(jīng)典型番鴨呼腸孤病毒(Classical muscovy duck reovirus，C-MDRV)和新型呼腸孤病毒(New duck reovirus，N-DRV)兩類。C-MDRV 病，又稱為番鴨肝白點(diǎn)病，俗稱“白點(diǎn)病”或“花肝病”，主要病變特征表現(xiàn)為肝臟和脾臟腫大、出血，并出現(xiàn)大量針尖大小的壞死點(diǎn)。N-DRV 病，又稱“鴨出血性壞死性肝炎”，以肝臟不規(guī)則出血、壞死，心肌出血、脾臟腫大斑塊狀壞死為主要特征的疫病。各種品種鴨(如番鴨、半番鴨、麻鴨、北京鴨等)均可發(fā)生。目前對(duì)C-MDRV和N-DRV 的分子致病機(jī)理還不清楚。禽(雞)呼腸孤病毒(Avian reovirus，ARV)病，即雞呼腸孤病毒病，又稱雞病毒性關(guān)節(jié)炎，感染雞主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎和腱鞘炎，也可引起呼吸道病、腸道病、矮小綜合征等。禽類呼腸孤病毒病是目前危害養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的一種重要的傳染病。

與ARV 和哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒(Mammalian reovirus，MRV)相似：DRV 的基因組也分為3 個(gè)群：L 組群(L1～3)、 M 組群(M1～3) 和 S 組群 (S1～4)基因，它們分別編碼 λ、μ 和 σ 組蛋白。盡管 DRV 和ARV 有很多相似性，但它們?cè)诳乖?、宿主特異性、致病機(jī)理、電泳類型和基因編碼蛋白的種類方面存在差異。例如DRV 外殼蛋白σC 是由S4 基因片段第二個(gè)開放閱讀框編碼(810 nt)；而ARV 和MRV 是由S1 基因片段第三個(gè)開放閱讀框編碼(977 nt)，并且DRV 與ARV 的σC 蛋白的相似性只有21 %。

近期， 《Pathogens》 發(fā)表了對(duì) σA 蛋白表位的研究。σA 為呼腸孤的核衣殼蛋白，具有與dsRNA相結(jié)合的功能。σA 編碼基因組高度保守，例如，DRV 和ARVσA 基因同源性高達(dá)87 %～89 %。本研究以表達(dá)的DRVσA 為免疫原，免疫小鼠獲得抗σA 的5 株單克隆抗體；利用噬菌體展示和定點(diǎn)突變技術(shù)，鑒定兩個(gè)最小表位：56EAPYPG61 和341WVV/MAGLI/V347；其中第341 位的 V/M 和 347位的I/V 分別是可相互替換的必須氨基酸。斑點(diǎn)雜交技術(shù)、免疫熒光試驗(yàn)技術(shù)和序列分析結(jié)果證明，EAPYPG 和 WVV/MAGLI/V 是 DRV 和 ARV 共有交叉表位。以表達(dá)的EAPYPG 和WVV/MAGLI/V 為包被抗原建立的ELISA 方法(Epitope-ELISA)，DRV/ARV 感染的血清檢測(cè)結(jié)果為陽性，而SPF 鴨/ 雞陰性血清以及對(duì)其他禽類病原感染陽性血清檢測(cè)結(jié)果為陰性；該方法具有高度的特異性和敏感性。該表位Epitope-ELISA 技術(shù)可用于臨床DRV/ARV 感染的血清學(xué)監(jiān)測(cè)?？傊?，蛋白表位的研究不僅有助于對(duì)蛋白空間結(jié)構(gòu)的解析，還為血清學(xué)診斷方法的建立提供技術(shù)支撐。