泰國(guó)在有豬呼吸道疾病綜合征農(nóng)場(chǎng)中檢出豬圓環(huán)病毒3型

張愛(ài)瓊 ，梁海英，曾智勇 （編譯）

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

主持國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目1項(xiàng)，省廳級(jí)項(xiàng)目3項(xiàng)；參研貴州省農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項(xiàng)目5項(xiàng)，其他各類省廳(局)級(jí)項(xiàng)目13項(xiàng)；獲“貴州省科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)三等獎(jiǎng)”3項(xiàng)。先后發(fā)表各類學(xué)術(shù)論文180余篇，其中SCI論文3篇，一級(jí)學(xué)報(bào)論文12篇，核心期刊90余篇；參編養(yǎng)殖技術(shù)叢書3冊(cè)，參編專業(yè)類著作2冊(cè)，參編《畜牧獸醫(yī)行政管理學(xué)》（國(guó)家規(guī)劃教材）。

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV）是圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬的單鏈無(wú)囊膜DNA環(huán)狀病毒。PCV含有兩個(gè)主要的開放閱讀框ORF1和ORF2，分別編碼Rep復(fù)制蛋白和Cap衣殼蛋白。目前已知其有三種基因型：PCV1、PCV2和最近發(fā)現(xiàn)的PCV3。2016年，Phan等在美國(guó)各地區(qū)的哺乳仔豬、9～10周齡患有心肌炎或呼吸系統(tǒng)疾病的育肥豬中首次檢測(cè)出PCV3；幾乎同一時(shí)間，Palinski等也從患有豬皮炎腎炎綜合征、繁殖障礙的母豬組織樣品中檢測(cè)出了PCV3，證實(shí)了PCV3的存在以及在美國(guó)的流行。隨后，Shen、Ku、Zheng等先后報(bào)道在中國(guó)華南、山東等地豬場(chǎng)也檢出PCV3；Kwon等對(duì)韓國(guó)6個(gè)道的73個(gè)不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行PCV3檢測(cè)，檢出率較高；此外，Stadejek、Faccini、Tochetto等分別報(bào)道在波蘭、意大利、巴西的豬場(chǎng)中檢測(cè)出PCV3。這些報(bào)道表明：PCV3在許多國(guó)家和地區(qū)存在，已經(jīng)遍及美洲、亞洲及歐洲。豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）是影響全球豬業(yè)的主要呼吸道疾病，該疾病的特征是豬只生長(zhǎng)和飼料效率降低，臨床癥狀包括咳嗽、呼吸困難、發(fā)熱和厭食，多種病原體（PRRSV、PCV2和SIV）共同感染是導(dǎo)致PRDC的主要原因。介于PCV3在世界范圍內(nèi)的廣泛流行且導(dǎo)致的臨床癥狀與PRDC有相似之處，Kedkovid 等對(duì)泰國(guó)患有PRDC的農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行PCV3鑒定，確定PRDC感染豬群中是否有PCV3的存在。

Kedkovid等研究的樣本來(lái)自朱拉隆功大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室（CU-VDL）的組織收集庫(kù)，所有樣本均在2017年7月和9月從泰國(guó)巴真府的3000頭母豬群收集，包括新鮮冷凍組織、福爾馬林固定的石蠟包埋（FFPE）組織樣品、臨床上健康和顯示PRDC相關(guān)跡象的豬血清樣品以及20頭母豬1～4胎次的血清樣品。使用Palinski先前公開的引物進(jìn)行PCV3的PCR檢測(cè)及全基因的擴(kuò)增；通過(guò)將FFPE組織樣品進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色以及用LK003的肺組織樣品進(jìn)行原位雜交（ISH）來(lái)進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，其中ISH是將PCR DIG標(biāo)記混合物靶向PCV3 ORF1的引物制備地高辛配基（DIG）探針，引物序列 F1：5′-ATACTGCAGGCATCTTCTCCG-3′，F(xiàn)2 ：5′-TATTGTGGAGTGTGGAGGCAGT-3′（ 預(yù) 擴(kuò) 增片段大小336 bp），并以PCV3陰性豬（通過(guò)PCR鑒定）的肺組織切片和沒(méi)有DIG探針的LK003肺組織切片的ISH用作對(duì)照。最后對(duì)檢測(cè)結(jié)果使用GraphPad Prism 5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

研究結(jié)果表明：從8頭顯示PRDC相關(guān)臨床體征的豬組織（肺和淋巴結(jié)）樣品中檢測(cè)出有5頭PCV3呈陽(yáng)性（LK000-LK004）。PCV3陽(yáng)性動(dòng)物的常見(jiàn)肉眼病變包括紅肺、硬肺、氣管支氣管和腹股溝淋巴結(jié)腫大；顯微鏡檢查病變?yōu)橹夤荛g質(zhì)性肺炎、淋巴結(jié)壞死和淋巴結(jié)組織細(xì)胞增生，其中LK003顯示出最嚴(yán)重的病變，肺泡腔中的細(xì)胞碎片嚴(yán)重積聚并且單核細(xì)胞呈彌漫性的肺泡間隔增厚，類似于增殖性和壞死性肺炎（PNP），其他豬只沒(méi)有觀察到PNP相關(guān)病變。Kedkovid等通過(guò)PCR技術(shù)對(duì)PCV3基因組進(jìn)行擴(kuò)增與測(cè)序，從PRDC感染的農(nóng)場(chǎng)豬群中鑒定出泰國(guó)PCV3株（PCV3/Thailand/PB01/17），GenBank登記號(hào)為MG310152，并且對(duì)其全基因進(jìn)行分析，結(jié)果顯示泰國(guó)PCV3株與韓國(guó)PCV3/KU-1602菌株核苷酸同源性最高為99.60%。在該農(nóng)場(chǎng)PRDC感染的豬中檢測(cè)出PCV3呈陽(yáng)性的情況下，收集5～18周期臨床健康豬和PRDC相關(guān)臨床體征的豬血清樣品用于PCV3的PCV3檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示受PRDC影響的豬PCV3感染率和PCV3病毒滴度與臨床健康豬相比更高。通過(guò)對(duì)血液樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)PRDC 感染豬（60%，15/25）中PCV3 病毒血癥的發(fā)生率顯著高于臨床健康豬（28%，7/25）。

總的講，在受PRDC影響的泰國(guó)農(nóng)場(chǎng)豬群中鑒定出PCV3，與臨床健康豬相比，受PRDC影響的豬表現(xiàn)出更高的PCV3感染率和更高的PCV3病毒滴度，這些結(jié)果證實(shí)了泰國(guó)受PRDC感染的農(nóng)場(chǎng)中存在PCV3。這是泰國(guó)第一份關(guān)于PCV3的報(bào)告，也是首個(gè)在農(nóng)場(chǎng)受PRDC感染的豬群中對(duì)PCV3感染的研究。在感染PRDC后PCV3的發(fā)病機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究闡明，對(duì)于PCV3的致病性和可能帶來(lái)的危害還應(yīng)開展更大規(guī)模的研究。