高海拔地區(qū)不同羊肚菌菌株比較試驗(yàn)

王永元 曹秀文 * 李巖龍 徐寅 湯鈺

（1白龍江林管局林業(yè)科學(xué)研究所，甘肅蘭州730070；2甘肅白龍江森林生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家定位觀測(cè)研究站，甘肅舟曲746300）

在分類學(xué)上羊肚菌（Morchella spp.）隸屬于子囊菌亞門(mén)（Ascomycotina）盤(pán)菌綱（Discomycetes）盤(pán)菌目（Pezizales）羊肚菌科（Morchellacea）[1-2]。羊肚菌屬是世界上著名的大型真菌之一，分布廣泛，根據(jù)Boudier分類系統(tǒng)，羊肚菌分為4組（真生組、開(kāi)裂組、假真生組和紙質(zhì)組），2亞組（肉質(zhì)亞組、半肉質(zhì)亞組），3族（高族、圓族和普通族）[3]。據(jù)現(xiàn)有研究資料統(tǒng)計(jì)，中國(guó)目前報(bào)道的羊肚菌約有20多種[4]，主要分布在西南地區(qū)的云南省、四川省及西北地區(qū)的陜西省、甘肅省、寧夏回族自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū)等[5]。主要種類有羊肚菌、硬羊肚菌（Morchella rigida）、寬圓羊肚菌（M.robusta）、肋脈羊肚菌（M.costata）、普通羊肚菌（M.vulgarris）、粗腿羊肚菌（M.crassipes）、褐赭羊肚菌（M.umberina）、紫變羊肚菌（M.purpurassens）、尖頂羊肚菌（M.conica）、小羊肚菌（M.deliciosa）、離柄羊肚菌（M.semilibera）、高頂羊肚菌（M.elata）、花園羊肚菌（M.horitensis）、開(kāi)裂羊肚菌（M.distans）、黑脈羊肚菌（M.angusticeps）[6]。

羊肚菌又稱羊肚菜、草笠竹、羊蘑、羊肚蘑，是一種珍貴的美味食用菌和藥用菌[1，4，7]。從羊肚菌的子實(shí)體外表或菌絲體外表無(wú)法鑒別菌株的優(yōu)良性，通過(guò)菌絲培養(yǎng)試驗(yàn)可以初步篩選出菌絲生長(zhǎng)速度快、生長(zhǎng)旺盛、菌核形成多的菌株，但只有通過(guò)出菇試驗(yàn)才能夠篩選出適應(yīng)性強(qiáng)和遺傳性能穩(wěn)定的優(yōu)良菌株[1，8]。這對(duì)羊肚菌在甘南地區(qū)及高海拔地區(qū)實(shí)現(xiàn)商業(yè)化栽培和穩(wěn)定性出菇具有重要的意義。

為了探索高海拔地區(qū)羊肚菌栽培技術(shù)并選育出優(yōu)良菌株，試驗(yàn)選擇在白龍江林業(yè)管理局林業(yè)科學(xué)研究所沙灘試驗(yàn)站進(jìn)行了出菇試驗(yàn)。白龍江沙灘試驗(yàn)站位于甘肅南部，甘南藏族自治州舟曲縣境內(nèi)，是甘肅重要的森林生態(tài)屏障。該區(qū)位屬于長(zhǎng)江水系嘉陵江支流的白龍江上、中游，海拔2370 m，北緯33°42′9.43″，東經(jīng)104°9′41.80″，氣候以北溫帶高寒濕潤(rùn)為主，大地構(gòu)造以強(qiáng)烈侵蝕切割形成的西部高山峽谷地貌為主，屬秦嶺褶皺帶西端，年降水量448.9～911.6 mm，年平均氣溫4.3～5.7℃。植被類型主要以云、冷杉等亞高山針葉林為主[9]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株

通過(guò)在甘肅南部各地區(qū)采集野生羊肚菌進(jìn)行活體分離，獲得了多個(gè)羊肚菌菌株，并在高海拔不同地區(qū)進(jìn)行了試驗(yàn)栽培，其中部分羊肚菌菌株表現(xiàn)優(yōu)良。為了在較廣闊的范圍內(nèi)對(duì)羊肚菌菌株進(jìn)行篩選，選擇試驗(yàn)的菌株還有來(lái)自甘肅和四川廣泛栽培的菌株及低海拔低緯度栽培的昆明菌株。

其中選取13個(gè)具有代表性菌株，有甘肅和四川廣泛栽培的菌株1#、2#、3-1、青川1#，有昆明栽培的以孢子分離獲得的菌種（Ma和Mb），有在甘肅南部野外采集分離的菌種L-1、6-3、12#、13#、14#、LLG-3、BSG-16。以上菌株均通過(guò)試管的形式保藏在甘肅省白龍江林業(yè)管理局林業(yè)科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)室。具體見(jiàn)表1。

1.1.2 試驗(yàn)培養(yǎng)基

（1）母種培養(yǎng)基為加富PDA培養(yǎng)基[10]：馬鈴薯200 g（煮汁），葡萄糖20 g，瓊脂15～20 g，麩皮60 g（浸出液），自來(lái)水1000 mL，自然pH。

制作方法：將土豆削片煮沸（土豆片用玻璃棒戳破即可）過(guò)濾取汁，麩皮加適量水浸泡1 h以上過(guò)濾取浸出液，加入上述配料，裝入容器，在121℃高壓滅菌45 min，做成斜面培養(yǎng)基或平板培養(yǎng)基備用。

表1 供試羊肚菌菌株

（2）原種、栽培種培養(yǎng)基為全麥培養(yǎng)基[11]：小麥75%，木屑10%，麩皮6%，棉籽殼5%，細(xì)土3%，石膏1%。料含水量65%，pH7。料拌勻后裝入玻璃瓶，在121℃高壓滅菌45 min，冷卻后備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 羊肚菌菌絲生長(zhǎng)特性試驗(yàn)

用0.5孔徑的打孔器取大小相同供試菌株塊分別接種在直徑為10 cm的平板培養(yǎng)基上，隨機(jī)編號(hào)，每個(gè)菌株做5個(gè)重復(fù)。分別置于15℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天定時(shí)記錄測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)勢(shì)、顏色變化、滿皿時(shí)間（長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿的天數(shù)）、菌核形成時(shí)間及數(shù)量。

1.2.2 不同光照強(qiáng)度對(duì)羊肚菌菌絲、菌核及色素形成影響

同1.2.1取供試菌株接種在直徑為10 cm的平板培養(yǎng)基上，隨機(jī)編號(hào)。每個(gè)菌株做5個(gè)重復(fù)，分別置于光照強(qiáng)度為0 lx、200 lx、400 lx、500 lx，15℃恒溫培養(yǎng)。每天定時(shí)記錄測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度、菌核形成情況及顏色變化。

1.2.3 不同培養(yǎng)溫度對(duì)供試羊肚菌菌株菌絲生長(zhǎng)影響

同1.2.1取供試菌株接種在直徑為10 cm的平板培養(yǎng)基上，分別置于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃的6個(gè)溫度的恒溫培養(yǎng)箱，隨機(jī)編號(hào)，每個(gè)菌株做5個(gè)重復(fù)。每天定時(shí)記錄測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)勢(shì)、顏色變化、滿皿時(shí)間（長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿的天數(shù)）。

1.2.4 供試羊肚菌菌株高海拔地區(qū)出菇試驗(yàn)

將供試羊肚菌菌株接種在栽培種瓶裝培養(yǎng)基上，待菌絲長(zhǎng)滿菌種瓶并有菌核形成后，選擇適宜的時(shí)間播種到大棚內(nèi)（大棚為遮陽(yáng)鋼架棚）。沙灘試驗(yàn)站海拔較高，選擇10月中旬播種[12]，播種時(shí)表層覆薄土，20 m2（即1個(gè)床面）為一個(gè)重復(fù)，每個(gè)菌株3個(gè)重復(fù)。各菌株播種量為每瓶播2 m2。其中菌株Ma、Mb為孢子分離獲得的菌株，播種時(shí)按1∶1混合，播種量為每瓶混合菌種播2 m2。播種后進(jìn)行立袋處理，并進(jìn)行溫、濕度管理。觀察菌絲生長(zhǎng)情況（通過(guò)立袋吃料觀察菌絲強(qiáng)弱）、氣生菌絲發(fā)生情況、原基形成情況、抗病性、出菇情況及產(chǎn)量。綜合分析各菌株的出菇性能和穩(wěn)定性。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試羊肚菌菌株在PDA培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)特性比較

從表2可以看出，在15℃恒溫及相同的培養(yǎng)基條件下，各菌株的菌絲生長(zhǎng)情況略有差異。其中菌株1#、2#、青川1#、L-1、12、13、14、6-3菌絲生長(zhǎng)旺盛、生長(zhǎng)速度快、菌絲較濃密且緊貼培養(yǎng)基平面。菌株LLG-3、BSG-16菌絲生長(zhǎng)速度稍弱、氣生菌絲旺盛，沒(méi)有緊貼培養(yǎng)基平面。通過(guò)對(duì)比分析菌株L-1、1#、青川1#、6-3、12#、13#、14# 菌絲生長(zhǎng)旺盛，有明顯的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。

表2 供試羊肚菌菌株在PDA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況（培養(yǎng)溫度15℃）

2.2 光照強(qiáng)度對(duì)供試羊肚菌菌株菌絲、菌核及色素形成的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，光照強(qiáng)弱對(duì)于菌絲生長(zhǎng)速度沒(méi)有明顯的影響。菌絲在無(wú)光照條件下為灰白色，較稀疏，形成少量的近白色小顆粒狀菌核，后經(jīng)光照處理菌核變多且顏色逐漸加深變?yōu)辄S褐色（表3），表明光照強(qiáng)度對(duì)菌絲、菌核顏色的加深及菌核的形成具有重要的作用。青川1#、L-1、1#、2#的菌核形成情況見(jiàn)圖1。

表3 在不同光照強(qiáng)度下供試羊肚菌菌株菌絲、菌核顏色變化及菌核形成情況（15℃）

圖1 部分菌株菌核形成情況

2.3 不同培養(yǎng)溫度下供試羊肚菌菌株菌絲生長(zhǎng)情況

結(jié)果表明在相同培養(yǎng)溫度下供試羊肚菌菌株菌絲生長(zhǎng)速度差異較小，不同培養(yǎng)溫度同一羊肚菌菌株菌絲生長(zhǎng)速度差異較明顯。一般溫度升高菌絲生長(zhǎng)速度隨之加快，但溫度過(guò)高則菌絲生長(zhǎng)速度變緩甚至停滯。在15～20℃時(shí)，各菌株菌絲生長(zhǎng)都較旺盛，有利于菌絲生長(zhǎng)及菌核形成，特別是菌株L-1、1#、青川1#、6-3、12#、13#、14#等表現(xiàn)出菌絲生長(zhǎng)速度快、菌絲致密、生長(zhǎng)旺盛等優(yōu)點(diǎn)（表4）。

2.4 供試羊肚菌菌株高海拔地區(qū)出菇試驗(yàn)結(jié)果

從表5可以看出，部分羊肚菌菌株在高海拔地區(qū)出菇試驗(yàn)中菌絲生長(zhǎng)良好，但出菇表現(xiàn)不佳、原基形成少、甚至不出菇，而部分菌株在高海拔地區(qū)出菇表現(xiàn)優(yōu)異，可以選擇作為高海拔地區(qū)羊肚菌栽培的優(yōu)良菌株。試驗(yàn)結(jié)果表明L-1、1#、青川1#、6-3等菌株菌絲生長(zhǎng)旺盛、原基形成多、抗病性強(qiáng)、產(chǎn)量相對(duì)較高，其出菇性能和穩(wěn)定性適宜作為在高海拔地區(qū)栽培的優(yōu)良菌株。L-1、青川1#出菇情況見(jiàn)圖2。

表4 不同培養(yǎng)溫度供試羊肚菌菌株菌絲生長(zhǎng)速度、菌核顏色變化及菌核形成情況

圖2 出菇情況

表5 供試羊肚菌菌株在高海拔地區(qū)栽培試驗(yàn)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

供試羊肚菌菌株在不同培養(yǎng)溫度下菌絲生長(zhǎng)略有差異，有些表現(xiàn)耐高溫、有些表現(xiàn)耐低溫，但各菌株的最適生長(zhǎng)溫度為15～20℃。溫度過(guò)高時(shí)容易引起菌絲顏色加深、生長(zhǎng)緩慢或停止生長(zhǎng)、甚至發(fā)生菌絲自溶等現(xiàn)象。所以不論在羊肚菌菌種培養(yǎng)還是栽培階段一定要控制好最高溫度。

在不同光照和溫度條件下培養(yǎng)時(shí)，供試羊肚菌菌株的菌核形成情況略有差異，綜合分析菌核形成能力較強(qiáng)的菌株有L-1、1#、青川1#、3-1、6-3、12#、13#、14#。菌核形成多一定程度上表示菌株的抗逆性和抗污染能力較強(qiáng)，對(duì)于栽培時(shí)可靠性、穩(wěn)定性有重要的意義。

供試羊肚菌菌株在高海拔地區(qū)的出菇試驗(yàn)表明，實(shí)驗(yàn)室中菌絲生長(zhǎng)、菌核形成表現(xiàn)優(yōu)良的菌株，在出菇方面不一定很好。由此可見(jiàn)，羊肚菌栽培成功的關(guān)鍵不僅取決于土壤因素和環(huán)境因素。由于高海拔地區(qū)環(huán)境較極端、冬季時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)、氣候變化劇烈，所以不是所有的菌株都能實(shí)現(xiàn)出菇和高產(chǎn)[7]。因此在高海拔地區(qū)栽培羊肚菌時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行相應(yīng)的適生菌株的選育和栽培試驗(yàn)，有利于確保在高海拔地區(qū)羊肚菌栽培的可靠性和穩(wěn)定性。

試驗(yàn)表明，菌株L-1的菌絲生長(zhǎng)、菌核形成、抗病性、出菇穩(wěn)定性和產(chǎn)量等方面都具有優(yōu)勢(shì)，是適宜在高海拔地區(qū)栽培推廣的優(yōu)良菌株。