醫(yī)學(xué)實驗室不同檢測人員檢測結(jié)果的可比性探討

盧紅玉 董家書*

（1 南寧市第六人民醫(yī)院檢驗科，廣西 南寧 530003；2 廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院檢驗科，廣西 柳州 545005）

實驗室人員可比性試驗是按照預(yù)先規(guī)定的條件，由兩個或多個檢驗人員對相同的試驗樣品進(jìn)行檢測，識別實驗室檢驗人員存在的問題與確定實驗室檢驗人員能力。是判斷和監(jiān)控實驗室檢驗人員能力的有效手段之一。特別是新入職人員，可用比對試驗的結(jié)果來監(jiān)測培訓(xùn)的效果，決定是否予以相應(yīng)的授權(quán)。人員比對也是人員能力評估的一項重要的評估內(nèi)容。為了評價人員間檢測結(jié)果的可比性，需對人員檢測結(jié)果進(jìn)行可比性實驗，也是CNAS-CL02《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的要求[1]，也是國家認(rèn)可委評審專家進(jìn)入現(xiàn)場評審時，現(xiàn)場實驗內(nèi)容中的一部分。由此可見，人員檢測結(jié)果比對是一項重要的實驗室活動?，F(xiàn)將本實驗室部分可比性試驗，按專業(yè)敘述如下。

1 人員比對項目

1.1 臨床基礎(chǔ)檢驗專業(yè)：新鮮血液細(xì)胞學(xué)涂片分類計數(shù)；新鮮尿液有形成分顯微鏡檢查；形態(tài)學(xué)顯微攝像照片考核；女性分泌物顯微鏡檢查；血小板手工計數(shù)。

1.2 臨床免疫學(xué)檢驗專業(yè)：同一項目2人以上操作的比對。

1.3 臨床微生物學(xué)檢驗專業(yè)：新鮮臨床標(biāo)本涂片顯微鏡檢查比對；抑菌圈測量；細(xì)菌分離鑒定。

1.4 基因診斷（PCR）實驗室：每年至少比對1次。定性項目檢測人員比對；定量項目檢測人員比對。

2 人員比對標(biāo)本的選取、比對流程和判斷標(biāo)準(zhǔn)

2.1 臨床基礎(chǔ)檢驗

2.1.1 血液細(xì)胞學(xué)涂片：每6個月選取5份血液細(xì)胞分析新鮮標(biāo)本，要求含中性桿狀粒細(xì)胞、中性分葉核粒細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞，其中1份含有晚幼紅細(xì)胞，另1份含少量未成熟白細(xì)胞。由3名有經(jīng)驗人員分類，取均值作為靶值，將每人結(jié)果與靶值進(jìn)行比較[2-3]，結(jié)果在WS/T246-2005[4]《白細(xì)胞分類計數(shù)參考方法》附錄B范圍內(nèi)為合格。各類細(xì)胞5份有4份合格為通過。

2.1.2 尿液有形成分：每6個月用5份新鮮尿液標(biāo)本各10 mL，用標(biāo)準(zhǔn)離心管按1000轉(zhuǎn)/分離心5 min，棄去上層，留取管底0.2 mL作為人員比對材料。各自涂片并蓋上要求規(guī)格的蓋玻片[5]鏡檢，各自報告鏡檢結(jié)果。以1名實驗室最有經(jīng)驗者的結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，其他人員結(jié)果分別與其比較，結(jié)果陽性不能為陰性，陰性不能為陽性，陽性在1個量級內(nèi)為符合，符合率≥80%[6]為合格。

2.1.3 形態(tài)學(xué)顯微照片：每6個月由組長挑選室間質(zhì)評或電子圖譜等的寄生蟲/尿沉渣/血液細(xì)胞電子圖片各15張，參比人員獨立判斷箭頭所指物質(zhì)或細(xì)胞名稱，填入答題卡上交組長。判斷標(biāo)準(zhǔn)：寄生蟲/尿沉渣/血液細(xì)胞圖片與正確結(jié)果相符≥80%[7]為通過。

2.1.4 血小板（PLT）手工計數(shù)人員比對：每6個月由組長隨機選取儀器檢測后的患者新鮮標(biāo)本5份（要求PLT直方圖峰正常、PLT結(jié)果后無標(biāo)記），另用血常規(guī)標(biāo)本采集管換裝（對于參加比對的人員來說為盲樣）。由操作人員從標(biāo)本稀釋開始到結(jié)果報告獨立完成。與儀器結(jié)果比較，相對偏差≤15%[8]或絕對偏差≤20×109/L為合格。5份有4份滿足要求為比對通過。

2.1.5 女性分泌物顯微鏡檢查比對：每6個月用5份女性分泌物標(biāo)本進(jìn)行比對，標(biāo)本要求新鮮采集。比對人員各自涂片鏡檢，記錄結(jié)果，與1名經(jīng)驗豐富者檢測的結(jié)果為參照。霉菌、滴蟲、線索細(xì)胞、革蘭陰性雙球菌的檢測結(jié)果陽性不能出現(xiàn)陰性，陰性不能出現(xiàn)陽性，清潔度、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞可上下1個計量級。符合率≥80%為合格。

2.2 臨床免疫學(xué)檢驗：每半年選取2份陰性臨床標(biāo)本（其中1份其他標(biāo)志物最好陽性）和3份陽性臨床標(biāo)本，以及試劑盒陰陽性對照、空白、弱陽性質(zhì)控物同時檢測，陰陽性檢測符合率≥80%為合格[9]。

2.3 臨床微生物檢驗

2.3.1 抑菌圈測量[10]：從分離培養(yǎng)18～24 h的血平板上，挑選單個菌落直接在無菌管中用無菌生理鹽水制成接種物，將濁度調(diào)整為0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛龋臃N物在15 min內(nèi)接種MH平板。用無菌棉簽蘸取菌液在管內(nèi)壁上方旋轉(zhuǎn)擠壓，將多余菌液擠去，在平板上均勻涂布，最后用棉簽涂布平板四周邊緣1圈，靜置3～5 min，將紙片分片器置于培養(yǎng)皿上，平穩(wěn)而全面按下柱塞并釋放紙片，檢查紙片是否貼穩(wěn)。將貼好紙片的平板置35 ℃培養(yǎng)箱孵育16～18 h。每位工作人員用游標(biāo)卡尺測量藥敏試驗的抑菌圈直徑，每個抑菌圈測量3次，記錄結(jié)果。所得數(shù)據(jù)采用方差分析，如結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，則用t檢驗分析。判斷：直徑差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3.2 顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查人員比對[11]：選取一般細(xì)菌、抗酸桿菌和真菌檢查的臨床涂片標(biāo)本各5份，進(jìn)行涂片染色鏡檢。比較工作人員間的符合率，符合率≥80%為合格。

2.3.3 培養(yǎng)結(jié)果判讀和結(jié)果報告比對：選取5份臨床培養(yǎng)標(biāo)本，不同工作人員對標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行判讀和報告，人員間5份有4份結(jié)果一致為滿足要求。

2.4 PCR實驗室

2.4.1 定性項目：選取3份陽性（低、中、高各1份）和2份陰性標(biāo)本，進(jìn)行提取DNA和上樣擴增，嚴(yán)格按相應(yīng)項目的SOP操作。陰陽相符為比對通過。

2.4.2 定量項目：選取3份陽性（低、中、高各1份）和2份陰性標(biāo)本，進(jìn)行提取DNA和上樣擴增，嚴(yán)格按相應(yīng)的SOP操作。比對人員與參比人員比，至少有4份樣本的偏倚≤7.5%。

3 人員比對意義

3.1 質(zhì)量改進(jìn)：實施人員比對，能發(fā)現(xiàn)影響結(jié)果可比性的一些關(guān)鍵因素。如PLT人工計數(shù)沖池后的靜置時間不足、非PLT顆粒的區(qū)分有的未掌握；形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)差[12]、平時培訓(xùn)又不足；人員操作未嚴(yán)格按規(guī)定程序進(jìn)行；所用設(shè)備未經(jīng)校準(zhǔn)；耗材質(zhì)量欠佳等?？傊?，認(rèn)真分析比對過程中的每一個環(huán)節(jié)，找出影響結(jié)果的關(guān)鍵點，采取有效的措施進(jìn)行控制，從而提高檢測結(jié)果質(zhì)量，實現(xiàn)人員間檢測結(jié)果的可比性。

3.2 實驗室認(rèn)可必備：現(xiàn)場評審時，實驗室需提供人員比對資料，還需進(jìn)行現(xiàn)場人員比對實驗，提供原始數(shù)據(jù)和比對結(jié)果、結(jié)論。這樣，平時的比對相當(dāng)于現(xiàn)場比對的演練。通過比對，發(fā)現(xiàn)問題，解決問題，進(jìn)而在平時工作中少出問題，現(xiàn)場實驗時有底氣。

4 總 結(jié)

人員檢測結(jié)果的可比性，是實驗室質(zhì)量要求。具體如何實施，對于一些實驗室來說有些迷惘，需要考慮比對哪些項目，標(biāo)本選取要求，比對周期，判斷標(biāo)準(zhǔn)等。本實驗室在經(jīng)歷了ISO15189實驗室認(rèn)可的3次現(xiàn)場評審，積累了一定的經(jīng)驗，比對流程也經(jīng)歷了一定的完善。人員比對，能發(fā)現(xiàn)人員存在的問題，流程存在的問題，儀器設(shè)備、耗材存在的問題，針對問題采取改進(jìn)措施和有效手段進(jìn)行控制，達(dá)到提升檢測結(jié)果質(zhì)量的目的。