豬圓環(huán)病毒病的臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室診斷方法及其防控

孫學(xué)愷

摘要：豬圓環(huán)病毒病是全世界普遍存在的危害養(yǎng)豬業(yè)的一種主要疫病，在我國(guó)也是影響?zhàn)B豬三大疫病中的一種，近幾年該病在我國(guó)的發(fā)病率呈不斷升高的趨勢(shì)。豬感染圓環(huán)病毒后，會(huì)嚴(yán)重?fù)p害機(jī)體免疫系統(tǒng)功能，引起免疫抑制，容易出現(xiàn)免疫失敗，發(fā)生嚴(yán)重的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)疾病，從而使豬發(fā)生繁殖障礙，飼料利用率下降，且病死率升高等，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失?，F(xiàn)概述豬圓環(huán)病毒病的防控措施。

關(guān)鍵詞：豬;圓環(huán)病毒病;臨床癥狀;剖檢變化;實(shí)驗(yàn)室診斷;藥物治療;免疫預(yù)防

中圖分類號(hào)：S858.28?? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：2095-9737（2019）11-0114-02

1 臨床癥狀

1.1 仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合癥

病豬主要是生長(zhǎng)發(fā)育不良，機(jī)體日漸消瘦，貧血、黃疸，呼吸困難，腹股溝淋巴結(jié)發(fā)生腫大，腹瀉。部分病豬出現(xiàn)咳嗽，甚至發(fā)生中樞神經(jīng)異常死亡。還能夠繼發(fā)感染豬瘟、巴氏桿菌病、鏈球菌病、附紅細(xì)胞體病等。

1.2 豬皮炎和腎病綜合癥

通常是保育豬和生長(zhǎng)育肥豬發(fā)生，病豬主要癥狀是皮膚出現(xiàn)圓形或者形狀不規(guī)則的隆起，呈紅色至紫色深淺不同，但中央呈黑色，一般先是后腿、腹部皮膚出現(xiàn)病變，之后擴(kuò)散至胸肋和耳部，并逐漸融合形成大的斑塊或者條帶。病豬癥狀輕時(shí)能夠自行康復(fù)，但嚴(yán)重時(shí)會(huì)呈現(xiàn)跛行，體溫升高，食欲廢絕。

1.3 繁殖障礙

妊娠母豬感染后通常會(huì)發(fā)生流產(chǎn)或者容易產(chǎn)出木乃伊胎、死胎，斷奶前病死率升高。

1.4 呼吸道綜合癥

生長(zhǎng)育肥豬感染圓環(huán)病毒2型（PCV2）后，往往會(huì)導(dǎo)致呼吸道感染病原微生物以及混合感染，從而出現(xiàn)呼吸道綜合癥。

1.5 腸炎

豬感染PCV2后，會(huì)導(dǎo)致肉芽腫性腸炎，主要癥狀是腹瀉，機(jī)體消瘦。

1.6 中樞神經(jīng)系統(tǒng)疫病

豬群感染PCV2后，新生仔豬會(huì)出現(xiàn)先天性震顫。

2 剖檢變化

2.1 淋巴結(jié)

病死豬全身淋巴結(jié)都發(fā)生程度不同的增生、腫大，且質(zhì)地變硬，外表有充血、出血或者化膿性病變，切面呈黃白色、白色或者灰白色，其中肺門、頜下、縱隔、腹股溝以及腸系膜淋巴結(jié)發(fā)生明顯病變。

2.2 主要臟器

病死豬肝臟顏色發(fā)暗，發(fā)生腫大、硬化，質(zhì)地變脆，小葉間出現(xiàn)結(jié)締組織增生;脾臟呈肉樣變化，明顯腫大;肺臟發(fā)生腫脹、氣腫、水腫，表現(xiàn)散布有不同數(shù)量、不同大小的土褐色實(shí)變，間質(zhì)變寬，質(zhì)地變硬如橡皮，尖葉、心葉、中間葉、后葉前下部會(huì)出現(xiàn)融合性支氣管肺炎的病變，呈灰紅色或者淡灰色，病變處有明顯界限，如同“肉樣”，嚴(yán)重時(shí)呈“胰樣變”;腎臟呈灰白色，發(fā)生水腫，有時(shí)被膜下存在白色的壞死灶。

2.3 消化道

病死豬的胃黏膜發(fā)生水腫，并存在非出血性潰瘍，腸壁尤其是結(jié)腸、回腸變薄，腸道內(nèi)存在大量清亮的液體，結(jié)腸和盲腸黏膜發(fā)生充血和出血。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒分離及電鏡觀察

取病變組織制成10%的懸液，按每毫升添加100 IU青霉素、100 μg鏈霉素，混合均勻后放入4℃離心機(jī)中，以3000 r/min的速度進(jìn)行20 min離心，取上清液在Dulac細(xì)胞中接種。經(jīng)過(guò)6 h用D-葡萄糖胺（300 mmol/L ）在37℃條件下處理30 min，繼續(xù)培養(yǎng)72～96 h，對(duì)增殖病毒的細(xì)胞反復(fù)進(jìn)行3次凍融，收集細(xì)胞病毒液再次接種細(xì)胞進(jìn)行6次傳代。取第6代細(xì)胞病毒液反復(fù)進(jìn)行3次凍融，添加5 mg/mL Tritionl14，在37℃下處理30 min，以3000 r/min進(jìn)行30 min離心，取上清液放入離心管（有30%蔗糖墊）中，以4500 r/min進(jìn)行3 h離心，傾去上清液，加入0.01 mmol/L pH值為8.0的ET緩沖液進(jìn)行吹打，收集病毒，使用乙酸雙氧鈾負(fù)染色后置于電鏡下觀察。

3.2 間接免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)

取第6代細(xì)胞病毒液在細(xì)胞玻片接種，置于37℃條件下進(jìn)行24～72 h培養(yǎng)，取出后使用丙酮進(jìn)行10 min固定;接著在細(xì)胞玻片上滴加PCV2抗體，置于37℃下進(jìn)行溫育，經(jīng)過(guò)60 min使用0.15 mol/L PBS溶液進(jìn)行3次沖洗，自然晾干;然后加入抗豬免疫球蛋白熒光抗體，再置于37℃下進(jìn)行溫育，經(jīng)過(guò)60 min再使用0.15 mol/L PBS溶液進(jìn)行3次沖洗，自然晾干后放在熒光顯微鏡下觀察。同時(shí)，要設(shè)置豬PCV2抗體陰性血清對(duì)照組以及細(xì)胞對(duì)照組。

3.3 間接免疫過(guò)氧化物酶技術(shù)

在96孔微量培養(yǎng)板上接種PK-15細(xì)胞，長(zhǎng)成單層后添加經(jīng)過(guò)10倍稀釋的待檢豬血清，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間吸干并進(jìn)行洗滌，在每孔中添加50 μL HRP標(biāo)記的兔抗豬IgG（1000倍稀釋），置于30℃下進(jìn)行孵育，經(jīng)過(guò)15 min再次吸干洗滌，然后添加50 μL底物溶液，最后終止反應(yīng)，使用顯微鏡觀察，如果看到棕色感染細(xì)胞即判定為陽(yáng)性。

4 防控措施

4.1 藥物治療

豬感染后抵抗力下降，腸道系統(tǒng)等功能減弱，可取10 mL黃芪多糖注射液和1瓶3萬(wàn)IU豬白細(xì)胞干擾素充分混合后肌肉注射， 3～10日齡每頭用量為1 mL，斷乳仔豬每頭用量為2 mL，育肥豬每頭用量為4 mL，每天用藥1次，連續(xù)注射3天，以提高機(jī)體抵抗力。如果病豬伴發(fā)高熱、腹瀉、咳嗽，還要在藥液中添加頭孢唑林鈉、林可霉素以及維生素B12，實(shí)際用量按照說(shuō)明書確定，混合均勻后再進(jìn)行肌肉注射，每天用藥1次，連續(xù)注射3天。

另外，病豬可配合使用中藥治療，取150 g黃芪，茵陳、板藍(lán)根各20 g，連翹、黨參、金銀花各50 g，25 g甘草，每次添加1000 mL水煎煮1 h，共進(jìn)行3次煎煮，按體重給病豬服用1 mL/kg藥液，每天用藥1次，連續(xù)服用3～5天。

4.2 免疫預(yù)防

我國(guó)使用的PCV2疫苗都是病毒滅活苗，主要是給健康仔豬、后備母豬以及經(jīng)產(chǎn)母豬接種。新生仔豬通常選擇3～4周齡進(jìn)行首免，經(jīng)過(guò)3周再加強(qiáng)免疫1次，每頭注射1 mL;后備母豬在配種前進(jìn)行2次基礎(chǔ)免疫，注意具有3周的間隔，且產(chǎn)前1個(gè)月還要進(jìn)行1次加強(qiáng)免疫，每頭注射2 mL;經(jīng)產(chǎn)母豬采取跟胎免疫，即產(chǎn)前1個(gè)月進(jìn)行1次接種，每頭注射2 mL;其他成年豬采取普免，進(jìn)行2次基礎(chǔ)免疫，具有3周的間隔，之后每6個(gè)月進(jìn)行1次免疫，每頭注射2 mL。