呋喃唑酮代謝物在食品檢測(cè)中的研究新進(jìn)展

徐 駿 ，劉 坤 ，李 丹 ，陳 晨 ，任崢峰 ，張 文

（1.吉林省安信食品技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司；2.吉林省食品所，吉林長(zhǎng)春130118）

由于呋喃唑酮便宜、耐性好、抗菌效果好,所以現(xiàn)階段亂用現(xiàn)象比較明顯。為了減少這種亂象的發(fā)生,對(duì)食品進(jìn)行呋喃唑酮檢測(cè)是很有必要的。呋喃唑酮本身對(duì)人體沒有毒害,而其代謝產(chǎn)物通過毒理學(xué)研究表明對(duì)人體有毒害作用,這類物質(zhì)具有致癌、致突變作用。因此，研究呋喃唑酮的檢測(cè)新進(jìn)展是很有意義的[1]。

1 食品檢測(cè)中呋喃唑酮代謝物的研究新進(jìn)展

據(jù)報(bào)道，現(xiàn)在研究食品中呋喃唑酮代謝物的檢測(cè)，比較常用的方法有酶聯(lián)免疫法、熒光免疫快速檢測(cè)試劑卡法、膠體金免疫層析法、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒法、酶標(biāo)抗原直接競(jìng)爭(zhēng) ELISA方法、單克隆抗體和膠體金免疫層析試紙條法等。

隨著研究的不斷深入，對(duì)食品檢測(cè)中的呋喃唑酮代謝物的檢測(cè)方法也在不斷地發(fā)展進(jìn)步，李春生和他的團(tuán)隊(duì)建立了一種快速檢測(cè)呋喃唑酮代謝物殘留的方法。試驗(yàn)用呋喃唑酮代謝物的衍生物與牛血清白蛋白的偶聯(lián)物免疫小鼠，利用單克隆抗體技術(shù)制備雜交瘤細(xì)胞，用間接和間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行篩選。單克隆細(xì)胞株誘生腹水后，經(jīng)純化即為單克隆抗體，用于膠體金標(biāo)記，制備呋喃唑酮代謝物膠體金免疫層析試紙條。融合后得到2株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株，其中，4G3純化后的抗體效價(jià)達(dá)到1:100萬，對(duì)CPAOZ的 50%抑制質(zhì)量濃度為 1.7μg/L，親和常數(shù) Ka=1.6×109L/mol。該抗體制備的膠體金試紙條的檢測(cè)限為4μg/L，與其他 3種硝基呋喃代謝物的衍生物 CPAHD、CPSEM和CPAMOZ均不存在交叉反應(yīng)，對(duì)樣品的檢測(cè)與高效液相色譜結(jié)果一致。他們研制出了抗呋喃唑酮代謝物特異性單克隆抗體，并研制了以單抗為基礎(chǔ)的膠體金免疫層析試紙條，能夠?qū)崿F(xiàn)呋喃唑酮代謝物殘留的快速、靈敏的檢測(cè)[2]。

史曉亞等研究了呋喃唑酮代謝物間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫的檢測(cè)方法。他們利用活化酯法將卵清蛋白和半抗原連接成為包被原，對(duì)包被原和單克隆抗體的稀釋倍數(shù)，封閉液濃度、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間、酶標(biāo)二抗孵育時(shí)間和顯色反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，得到了較好的指標(biāo)，并進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià)，得到的結(jié)果較好。結(jié)果表明，最佳條件為包被原和單克隆抗體稀釋倍數(shù)分別為800倍和6400倍，封閉液是 1%脫脂乳，競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間是60 min，辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠二抗孵育時(shí)間是45min，顯色時(shí)間是 15min。這種方法特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確性、精密度和重現(xiàn)性均良好，可用于動(dòng)物源性食品中呋喃唑酮代謝物的快速篩查[3]。

趙義良等研究出了免疫熒光檢測(cè)的技術(shù),他們研發(fā)了一種快速檢測(cè)呋喃唑酮代謝物的試劑卡。具體的研究?jī)?nèi)容如下：他們利用EDC介導(dǎo)偶聯(lián)抗體,因?yàn)殇B熒光微球具有下列優(yōu)點(diǎn)：持續(xù)穩(wěn)定性好，不易受干擾，強(qiáng)度大，把它作為熒光標(biāo)記物。通過優(yōu)化銪熒光微球與單抗之間的用量，改善試劑卡的顯色梯度，把試劑卡的靈敏度提高。通過研究他們得到了如下結(jié)論：這種試劑卡對(duì)呋喃唑酮代謝物的檢出限低，存儲(chǔ)時(shí)間長(zhǎng)；檢測(cè)結(jié)果安全可靠。所以，呋喃唑酮代謝物試劑卡可以用來作為食品中呋喃唑酮代謝物的檢測(cè)，為食品安全提供保障[4]。

2 展望

近年來，我們研究了很多在食品檢測(cè)中的呋喃唑酮代謝物的殘留測(cè)定，但開發(fā)的這些方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。所以，今后研究時(shí)要開發(fā)出更為合適的檢測(cè)方法，多研究其機(jī)理，探討更為簡(jiǎn)便可行的檢測(cè)方法和前處技術(shù)，為食品安全研究提供有效的幫助。