葛根總黃酮口服脂質(zhì)體的制備方法

梁璐，刁磊

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，吉林吉林132000）

葛根屬于豆科植物，是野葛的干燥根。葛根有解肌退熱、解酒毒、生津止渴等功效，可以用于日常食用如燉雞肉時加入，葛根總黃酮具有對抗心肌缺血缺氧性損傷，擴張冠狀血管，提高血流量等功能[1]。將葛根總黃酮制成口服脂質(zhì)體可提高葛根總黃酮在體內(nèi)的生物利用度，提高葛根的利用價值。

1 實驗儀器與材料

紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）。葛根總黃酮（成都德思特生物技術(shù)有限公司）。葛根素標準品（成都瑞芬思生物科技有限有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 葛根總黃酮口服脂質(zhì)體的制備

精密稱取磷脂250 mg、膽固醇20.83 mg、葛根總黃酮25 mg于燒杯中并用35mL的乙醇溶解作為油相備用。將盛有10 mLPBS緩沖溶液的燒杯放到（55℃，600romin-1）磁力攪拌器上，用注射器吸取適量全部溶解的油相，緩慢勻速的將油相注入到水相PBS液面下。待脂質(zhì)體形成后繼續(xù)加熱攪拌以除去有機溶劑，即得[2]。

2.2 葛根總黃酮口服脂質(zhì)體包封率的測定

2.2.1 繪制標準曲線

稱取葛根素標準品10mg，用95%乙醇溶解并定容至100mL容量瓶的刻度線，振蕩混勻使100mL容量瓶里的標準溶液濃度為 0.1mg/mL。用移液管分別移取 1.4mL、2.4mL、3.4mL、4.4mL、5.4mL的標準溶液于5只10mL標好序號的容量瓶內(nèi)，定容至10mL刻度線的溶液為95%乙醇?？瞻讓φ諡檫m量的95%乙醇溶液，依次將配制好的溶液適量倒入石英比色皿中，用紫外可見分光光度計將檢測波長調(diào)至250nm，按容量瓶中溶液濃度大小進行測定。根據(jù)記錄結(jié)果，橫坐標為5只容量瓶中溶液濃度，測定得到的吸光度為縱坐標繪制標準曲線。經(jīng)測定可知標準曲線方程為y=55.14x－0.017，R2=0.998。由標準曲線可知葛根總黃酮標準溶液濃度在上述0.014～0.054mg/mL的范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系。

2.2.2 口服脂質(zhì)體中葛根總黃酮含量測定

使用移液管移取2.0 mL葛根總黃酮口服脂質(zhì)體于10 mL容量瓶中，并用8.0 mL的乙醇溶液定容至容量瓶的刻度線，超聲振蕩進行破乳，以乙醇溶液作為空白對照，將樣品溶液和對照溶液在250nm檢測波長下進行紫外檢測。將檢測后得到的吸光度值代入標準曲線方程計算可得出總黃酮濃度，再次計算可得出M總。計算可知，M總為0.425mg。

2.2.3 葛根總黃酮口服脂質(zhì)體包封率的測定

將裁剪好的透析袋放入適量的PBS緩沖溶液中，沸水浴15min進行活化。

用注射器吸取2 mL葛根總黃酮口服脂質(zhì)體，注入到活化好的透析袋中。將密封好的透析袋放入加有300 mL PBS緩沖溶液的燒杯內(nèi)，使用磁力攪拌器進行透析4h，待透析結(jié)束后，PBS緩沖溶液為空白對照，用注射器吸取適量的透析外液用250 nm檢測波長測定吸光度值，根據(jù)標準曲線方程計算得游離的總黃酮的濃度計算M游。

脂質(zhì)體包封率 =〔（M總-M游/M總）〕×100%[3]

代入上述公式可得，包封率為33.75%。

2.3 質(zhì)量考察

2.3.1 形態(tài)觀察

用玻璃棒蘸取適量的脂質(zhì)體溶液于載玻片中心，然后將載玻片放到顯微鏡下觀察?？砂l(fā)現(xiàn)樣品溶液為澄清透明，稀釋后在暗室條件下可發(fā)現(xiàn)藍色乳光。顯微鏡觀察到的口服脂質(zhì)體為類球狀較為規(guī)則，外層有磷脂雙分子層。

2.3.2 穩(wěn)定性考察

取適量的樣品溶液于玻璃瓶中，將其在室溫條件下放置一個月然后觀察其形態(tài)變化。觀察可得經(jīng)放置一個月后的葛根總黃酮口服脂質(zhì)體包封率有輕微下降，溶液出現(xiàn)輕微渾濁現(xiàn)象。制備的脂質(zhì)體穩(wěn)定性較好。

3 結(jié)論

葛根總黃酮溶解性較差，實驗前需先測試一下溶解度。本試驗采用乙醇注射法制備出了葛根總黃酮口服脂質(zhì)體，以包封率為評價指標。制備過程中要注意油相往水相注射時的速度要緩慢行，不宜過快。實驗制備的脂質(zhì)體穩(wěn)定性還有待加強，因此，各個因素還需要進一步考察。