快速測試片在微生物中的應(yīng)用

□ 李 靜 許壽丹 通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司南京分公司

微生物快速測試片具有良好的測試效果，測試技術(shù)在測量過程中有更多的優(yōu)勢，產(chǎn)品的使用檢品相對較小，且易于儲存，便于攜帶和使用，測試技術(shù)也不需要消耗大量資金，不需要浪費(fèi)大量的資源，也不會在檢測過程中產(chǎn)生大量的污染物，可以減少對環(huán)境的污染。微生物快速測試片還可接種多種細(xì)菌，進(jìn)而縮短檢測時間，抑制細(xì)菌繁殖。下面進(jìn)行詳細(xì)闡述。

1 以濾紙為載體的測試片

1.1 菌落總數(shù)測試片

一般來說，該類測試片是以濾紙為主要測試載體的測試片，在測試過程中，需要首先篩選出密度相對均勻、吸附能力較好且白色的濾紙，將其裁剪到統(tǒng)一規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)（4.0×5.0 cm）。之后，檢測人員需要將氯化三苯四氮唑加入無菌培養(yǎng)標(biāo)本中，將裁剪好的濾紙浸泡在其中，保證測試環(huán)境的干燥性，并對浸泡的濾紙進(jìn)行密封保存。氯化三苯四氮唑作為一種氧化還原劑，當(dāng)其與氫接觸后，就會產(chǎn)生紅色點(diǎn)狀物，即三苯甲酯。因此，只需要觀察濾紙上出現(xiàn)的紅色點(diǎn)狀物，就可以確定細(xì)菌的數(shù)量。但是需要格外注意的是，要防止氯化三苯四氮唑在使用過程中用量過大，進(jìn)而抑制細(xì)菌的生長，最終不利于微生物的準(zhǔn)確檢測。在檢測過程中，要將其放到37 ℃的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)16～18 h，之后觀察濾紙上出現(xiàn)紅色點(diǎn)狀物的數(shù)量，操作完成后對其進(jìn)行焚燒處理[1]。

1.2 大腸菌群測試片

大腸桿菌測試片在中國疾病控制和預(yù)防中心得到了廣泛應(yīng)用,在食品微生物檢測中應(yīng)用，可以提高檢測的準(zhǔn)確性：通過糞大腸桿菌的研究試驗(yàn)，相關(guān)人員確定了科學(xué)的生產(chǎn)工藝，與傳統(tǒng)的測試結(jié)果比較后證明了腸道菌群測試檢測合格率為95%。用乳糖、蛋白胨、膽鹽、氯化三苯四氮唑和瓊脂在pH 6.8～7.0、115 ℃高溫滅菌15 min，60 ℃條件下浸泡，55 ℃下干燥。待測液體加入之中，37 ℃下培養(yǎng)16～18 h即可觀察檢測結(jié)果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紙上的紅斑周圍有一圈黃色的光暈，即為陽性。如果紅斑周圍有一個紫藍(lán)色的暈，則認(rèn)為是陰性。若紅色斑點(diǎn)接觸酸性樣品后會變黃，培養(yǎng)后不會出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，為陰性。在片劑法的試驗(yàn)中，應(yīng)做好培養(yǎng)液的制備。為了保證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，應(yīng)考慮生物酶的作用，用滅菌過的濾紙吸收培養(yǎng)基中的溶液。在纖維的膨脹作用下，細(xì)菌大量生長繁殖。氯化三苯四氮唑還原為紅色后，形成紅色細(xì)菌。產(chǎn)生黃色光暈后，細(xì)粒會分解乳糖，產(chǎn)生酸性物質(zhì)，使指示劑變黃。除此之外，使用氯化三苯四氮唑或瓊脂粉時，應(yīng)控制用量，太多或太少都會影響測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法

根據(jù)細(xì)菌會產(chǎn)生某些代謝健康物質(zhì)或代謝物的特點(diǎn)，建立了一種大腸菌群、大腸桿菌紙片熒光法。將待測細(xì)菌所需的營養(yǎng)物質(zhì)、酶底物和抑菌化合物放在紙上，檢測大腸菌和大腸桿菌產(chǎn)生的相關(guān)酶的活性，以達(dá)到計(jì)數(shù)目的。現(xiàn)有的兩種測試片分別可以檢測人腸桿菌和大腸桿菌，在37 ℃下培養(yǎng)24 h后在365 nm熒光燈下觀察結(jié)果，最小檢出量可達(dá)0～4 CFU/mL[2]。

2 菌落總數(shù)測試片

2.1 霉菌、酵母菌測試片

試驗(yàn)片含霉菌和酵母生長所需營養(yǎng)素，并添加了抗生素抑制細(xì)菌生長，在接種后將其置于21～25 ℃的環(huán)境下培養(yǎng)3～5天，之后對其細(xì)菌總量進(jìn)行計(jì)數(shù)。一般來說，酵母菌落特征為菌落小，邊緣清晰，顏色均勻，灰綠色至藍(lán)綠色，菌落向下。而霉菌菌落的特征為菌落大，邊緣模糊，中間暗，顏色不均勻，苦艾平坦。

2.2 大腸菌群、大腸桿菌檢測紙片

該試驗(yàn)片含有改進(jìn)的VRB培養(yǎng)基和糖苷指示劑。大多數(shù)大腸桿菌可產(chǎn)生B糖苷酶，它與培養(yǎng)基中的指示劑發(fā)生反應(yīng)，在大腸桿菌菌落周圍產(chǎn)生藍(lán)色沉淀。覆蓋在表面的薄膜可以保留發(fā)酵乳糖產(chǎn)生的氣體，形成藍(lán)色和深藍(lán)色菌落，并與氣泡連接。大腸菌群在測試片上產(chǎn)生酸，指示燈變?yōu)橹邪导t色。大腸菌群是指紅色菌落周圍有氣泡的菌落。因此，該測試片可以確定大腸桿菌和大腸菌群的數(shù)量：藍(lán)色和紅色有氣泡的菌落是大腸菌群，藍(lán)色有氣泡的菌落是大腸桿菌。

3 結(jié)語

總而言之，快速測試片已廣泛應(yīng)用于微生物檢測中。通過實(shí)踐證明，使用快速測試片可以提高檢測的質(zhì)量和效率，且不會產(chǎn)生二次污染，操作簡單，但該檢測方法也有一些缺點(diǎn)，很容易受到外部因素的影響，測試人員必須有專業(yè)技術(shù)，確保測試條件符合要求，而且需要控制試劑的用量，為了保證濾紙的質(zhì)量，如果濾紙上有孔，則很容易隱藏補(bǔ)救措施。