食品中金黃色葡萄球菌定量檢測能力驗證結果與探析

□ 劉家慧 四川省內江市食品藥品檢驗檢測中心

1 引言

實際檢測食品中的金黃色葡萄球菌時，必須嚴格遵循法律規(guī)定與標準，逐步提高檢測水平與監(jiān)測質量。一般情況下，檢驗人員會利用科學的鑒定系統(tǒng)完成盲菌的鑒定及分型工作，反復對比檢測與鑒定結果后，明確被檢測食品中的金黃色葡萄球菌數(shù)量。能力驗證是一種客觀的實驗方法，是控制試驗室準確度及精確度的重要途徑，有利于修正實驗室檢測中可能存在的誤差。為此，文章以能力驗證為核心，對食品中的金黃色葡萄球菌定量檢測及結果進行了分析。這不僅可以改善實驗室工作質量，也可提高實驗室的檢測水平[1]。

2 檢測材料與方法

2.1 材料

實際進行能力驗證時，選取由我國研究院統(tǒng)一發(fā)放的6個金黃色葡萄球菌樣品，分為1～6進行編號，6個金黃色葡萄球菌樣品均為肉眼可見的球狀，顏色為白色；選取6袋質量為25 g的奶樣品，按照同樣的方式進行編號，同一編碼的金黃色葡萄球菌樣品及奶樣品為一組。配置所需的培養(yǎng)基：無菌生理鹽水、BP瓊脂平板、顯色培養(yǎng)基、血瓊脂平板、革蘭氏染色液、腦心浸出液肉湯BHI與凍干兔血漿等。

2.2 方法

實際實驗過程中，應嚴格遵循相關標準與要求，將稀釋液從金黃色葡萄球菌樣品瓶中取出，取出的稀釋液應嚴格控制在225 mL，然后將其與稀釋液一同放置于均質袋內，直至其完全溶解，然后將稀釋液與奶樣品均勻混合，逐一按照編號統(tǒng)一處理6組樣品。本次研究以平板計數(shù)方式為核心對樣品進行檢測，根據(jù)對金黃色葡萄球菌盲樣的評估，盡量選擇稀釋度范圍較大一些，盡量使同一稀釋度3個平板上的菌落在20～200 CFU。每個稀釋度吸取1 mL均液以0.3、0.3、0.4 mL接種量分別加入到3個BP瓊脂平板上。在實驗過程中要注意的是：新配置的BP瓊脂平板有水珠，應放置于生物安全柜吹干或者放在25～50 ℃培養(yǎng)箱中烘干，計數(shù)時菌落不會蔓延；涂布時用一次性塑料涂布棒，注意不要觸及平板邊緣，計數(shù)時菌落清晰便于計數(shù)；涂布后，靜置10 min，待樣液完全吸收后再倒置于36 ℃下培養(yǎng)45～48 h。結合研究目的選擇與實驗研究相符的樣品勻液，合適的樣品混合液有利于加快稀釋速度，然后吸取1 mL的樣品勻液，注意所選樣品勻液稀釋度不同，將0.3 mL樣品勻液直接放入金黃色葡萄球菌顯示培養(yǎng)基中，緩慢攪拌，均勻后停止。金黃色葡萄球菌的靈敏度會直接影響實驗結果，為此，可反復對比其靈敏度，從而提高實驗結果的準確性，確保其精準、可行[2]。

3 結果與討論

據(jù)本次實驗得出，不同稀釋度的平板當中，菌落數(shù)存在較大差異。一般情況下，金黃色葡萄球菌菌落呈球狀，顏色不一，大致表現(xiàn)為從灰到黑的過渡，表面有濕潤現(xiàn)象，較為光滑。未實驗之前，需以冷凍的形式保存金黃色葡萄球菌，以免損傷樣品，影響實驗結果的準確性。但是，這種保存方式仍舊會對菌株造成一定損傷，致使菌落形態(tài)與金黃色葡萄球菌菌落出現(xiàn)差異，不再以球狀出現(xiàn)，而是呈不規(guī)則形態(tài)。受到干擾菌的影響，6組樣品均出現(xiàn)不同程度的透明圈，計數(shù)難度大幅提升。位于低稀釋度平板中的金黃色葡萄球菌的顏色會發(fā)生變化，以緩慢的速度從紫色向紅色轉變，其余細菌的顏色也會發(fā)生變化，但并不固定。

就上述分析可知，初期，金黃色葡萄球菌的分離并不復雜。要想明確結果，必須基于菌落計數(shù)進行規(guī)范的操作與詳細的計算。不同編碼樣品的金黃色葡萄球菌基本一致，未出現(xiàn)明顯差異。平板具有成本低、耗時長的特征，作為一種保守的培養(yǎng)基，存在特異性過低的問題。要想獲得準確、可行的實驗結果，必須進行補充性實驗，從而達成有效區(qū)分菌落形態(tài)的目的。不同的培養(yǎng)基靈敏性也不同。顯色培養(yǎng)基具備十分明顯的優(yōu)勢，不僅可以簡化操作，還可節(jié)約實驗時間。分離培養(yǎng)不會對檢驗人員提出過高的要求，利用基本的手段即可完成檢測。同時，可進行多次實驗，避免假陰性問題，提升結果的準確性。

4 結語

綜上所述，實驗涉及的金黃色葡萄球菌菌落數(shù)十分接近，這是在驗證后反復比對得出的結果。實驗過后，培養(yǎng)基顏色全部發(fā)生變化，均為十分鮮明的紅色，顯色狀態(tài)良好。需要注意的是，干擾菌會直接影響典型菌落的辨識度，尤其是在稀釋度較低的平板上，干擾菌出現(xiàn)了大面積的透明圈。因此，后續(xù)的檢驗過程中，應慎重選擇平板，避免菌落出現(xiàn)互相干擾的問題。提高菌落的辨識度，有效區(qū)分金黃色葡萄球菌及其他菌落。