射頻消融術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌患者外周血免疫細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子水平的影響研究*

侯 麗 宋曉丹

肝癌屬于消化系統(tǒng)的腫瘤之一，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)，其中原發(fā)性肝癌患者高發(fā)病年齡段在40～50歲，且男性發(fā)病率較女性高，其具體致病原因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[1]。目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，原發(fā)性肝癌的發(fā)病與環(huán)境因素、接觸黃曲霉素等化學(xué)致癌物質(zhì)、病毒性肝炎及肝硬化等密切相關(guān)[2-4]。原發(fā)性肝癌約有＞50%的患者首發(fā)癥狀以肝區(qū)疼痛為表現(xiàn)，其原因主要源于癌細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，增大肝包膜張力[5-6]。原發(fā)性肝癌患者外周血免疫細(xì)胞亞群水平多降低，而細(xì)胞因子水平升高。大量研究表明，原發(fā)性肝癌患者進(jìn)行射頻消融術(shù)療法可顯著提高患者外周血免疫細(xì)胞亞群水平，降低細(xì)胞因子水平，且臨床效果明確[7-10]。為此，本研究旨在探析原發(fā)性肝癌患者進(jìn)行射頻消融術(shù)后對(duì)患者外周血細(xì)胞因子水平和免疫細(xì)胞亞群水平的影響作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年8月至2015年6月巴彥淖爾市醫(yī)院收治的100例原發(fā)性肝癌患者，其中男性64例，女性36例；年齡30～71歲，平均年齡(52.3±2.4)歲；乙肝表面抗原(HbsAg)陽(yáng)性70例，HBsAg陰性30例；同時(shí)伴有不同程度的肝硬化80例，癌細(xì)胞直徑2.1～5.0 cm。根據(jù)隨機(jī)數(shù)表法將100例患者分為對(duì)照組和觀察組，每組50例。觀察組中男性32例，女性18例；年齡30～71歲，平均年齡(52.4±2.4)歲；其中HBsAg陽(yáng)性35例，HBsAg陰性15例；癌細(xì)胞直徑2.1～5.0 cm。對(duì)照組中男性32例，女性18例；年齡30～71歲，平均年齡(52.3±2.3)歲； HBsAg陽(yáng)性35例，HBsAg陰性15例；癌細(xì)胞直徑2.1～5.0 cm。兩組患者的性別、平均年齡、合并HBsAg陽(yáng)性、肝硬化程度以及癌細(xì)胞直徑等臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。所有病例均符合本研究的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病科學(xué)會(huì)制定的原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]；②經(jīng)肝組織穿刺病理學(xué)活檢或甲胎蛋白、影像學(xué)檢查確診。

(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重肝、心和腎功能不全者；②精神病或不合作者；③處于哺乳期或孕產(chǎn)期的女性。

1.3 儀器與試劑

采用邁德S-1500型腫瘤射頻治療儀(上海邁德醫(yī)療科技有限公司)；血清T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)采用Cantoll流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)；Platinum ELISA型人酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)試劑盒(美國(guó)eBioscience公司)；Accute TBA-40FR型全自動(dòng)生化分析儀(日本東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會(huì)社)，Somatom歡悅雙增強(qiáng)型全身CT螺旋機(jī)[西門子(中國(guó))有限公司]。

1.4 治療方法

(1)觀察組。采用射頻消融術(shù)，先予以腹部CT掃描，確認(rèn)進(jìn)針深度、穿刺方向及腫瘤部位；常規(guī)消毒鋪巾后，局部麻醉予以2%利多卡因，在預(yù)設(shè)射頻靶點(diǎn)予以22 G的Chiba針為導(dǎo)引針，穿刺時(shí)注意避開(kāi)膽管及主要血管的較大分支部位，再次進(jìn)行CT確認(rèn)靶點(diǎn)部位的導(dǎo)引針位置，局部切開(kāi)穿刺點(diǎn)部位0.3 cm，射頻電極針順導(dǎo)引針穿刺途徑刺入靶點(diǎn)位置，CT掃描確定射頻電極針尖在靶點(diǎn)部位后，將電極子針推出，癌細(xì)胞周圍0.5～1.0 cm的正常肝組織均為電極子針覆蓋部位，射頻消融治療儀設(shè)置瓦控模式，輸出功率100 W，當(dāng)阻抗超限熱凝時(shí)自動(dòng)停止，對(duì)于多個(gè)或較大病灶，予以多次射頻消融術(shù)治療；術(shù)后予以常規(guī)心電監(jiān)護(hù)及吸氧、禁食水8 h、預(yù)防性采用抗生素(1 d)、止血及保肝療法。

(2)對(duì)照組。進(jìn)行肝動(dòng)脈化學(xué)栓塞法治療，治療后收集外周靜脈血4 ml分別置入干燥管，用ELISA法檢測(cè)IL-6、IL-10、TNF-α及TGF-β血清濃度。采集2 ml外周血乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)抗凝劑，分別采集100μl抗凝血，分別加入20μl二色標(biāo)記的單克隆抗體CD3-FITC/CD16+CD56-PE 20μl和三色標(biāo)記的單克隆抗體CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5，混勻充分，避光室溫染色30 min，由多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物(Percp)充分處理后予以檢測(cè)。

1.5 觀察與評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察比較兩組治療后的外周血免疫細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和NK細(xì)胞指標(biāo)，以及兩組細(xì)胞因子血清IL-1β、TNF-α、IL-6及和IL-10水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件系統(tǒng)分析所有數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后外周血免疫細(xì)胞亞群核細(xì)胞因子水平比較

(1)兩組患者治療前外周血免疫細(xì)胞亞群指標(biāo)和細(xì)胞因子水平比較，其結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后1個(gè)月觀察組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK細(xì)胞等指標(biāo)水平顯著高于對(duì)照組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.078，t=5.916，t=5.996，t=3.216；P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組治療后1個(gè)月外周血免疫細(xì)胞亞群水平比較(x-±s)

表2 兩組治療后1個(gè)月外周血免疫細(xì)胞亞群水平和細(xì)胞因子水平比較(x-±s)

表3 觀察組不同性別患者治療1個(gè)月后對(duì)外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平的評(píng)估比較(x-±s)

表4 觀察組不同性別患者治療1個(gè)月后對(duì)細(xì)胞因子水平的評(píng)估比較(x-±s)

(2)觀察組治療后CD8+細(xì)胞水平、血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的檢測(cè)水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.745，t=8.422，t=7.373，t=10.432，t=8.884；P＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.2 觀察組不同性別患者治療前后對(duì)外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平比較

(1)觀察組中男性、女性治療前外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療1個(gè)月后男性患者CD4+、CD4+/CD8+指標(biāo)水平顯著高于女性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.448，t=3.684；P＜0.05)；男性患者的CD8+、CD3+和NK細(xì)胞水平顯著低于女性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.163，t=3.512，t=2.285；P＜0.05)，見(jiàn)表3。

(2)觀察組不同性別患者治療1個(gè)月后對(duì)細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平的比較，其差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.208，t=0.434，t=0.546，t=0.701；P＞0.05)，見(jiàn)表4。

2.3 觀察組不同年齡患者治療前后對(duì)外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平比較

(1)觀察組中年齡≤55歲和年齡＞55歲的患者治療前外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后1個(gè)月患者年齡≤55歲的CD4+、CD8+、NK細(xì)胞指標(biāo)水平顯著高于年齡＞55歲的患者，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.188，t=4.123，t=4.146；P＜0.05)，見(jiàn)表5。

(2)觀察組年齡≤55的患者細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10以及TNF-α指標(biāo)水平顯著低于年齡＞55歲的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.671，t=2.121，t=2.607，t=2.592；P＜0.05)，見(jiàn)表6。

3 討論

癌細(xì)胞可經(jīng)由各種途徑逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視，而肝癌細(xì)胞可通過(guò)肝癌組織周圍的微環(huán)境改變及修飾自身表面抗原逃脫機(jī)體的免疫攻擊及識(shí)別，進(jìn)而出現(xiàn)癌細(xì)胞免疫逃逸[12-13]。機(jī)體的抗腫瘤效應(yīng)主要通過(guò)介導(dǎo)機(jī)體T細(xì)胞免疫來(lái)發(fā)揮作用，特別是CD4+T細(xì)胞駕到的免疫殺傷作用在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要功能[14-15]。大部分肝癌患者存在免疫抑制，細(xì)胞免疫功能降低，外周血常發(fā)生NK細(xì)胞數(shù)量降低及T淋巴細(xì)胞亞群紊亂，機(jī)體免疫尤其是細(xì)胞免疫的降低是肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展的主要原因[16-17]。

表5 觀察組不同年齡患者治療后1個(gè)月對(duì)外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平比較(x-±s)

表6 觀察組不同年齡患者治療后1個(gè)月對(duì)細(xì)胞因子水平比較(x-±s)

本研究探析對(duì)原發(fā)性肝癌患者進(jìn)行射頻消融術(shù)對(duì)其外周血細(xì)胞因子水平及免疫細(xì)胞亞群的影響，研究結(jié)果顯示：治療前兩組患者外周血免疫細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療1個(gè)月后觀察組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK細(xì)胞等指標(biāo)水平顯著高于對(duì)照組；而觀察組的CD8+細(xì)胞水平顯著低于對(duì)照組；觀察組的血清IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-10的檢測(cè)水平顯著低于對(duì)照組，與鄧俊等[18]的研究結(jié)果大體一致。

射頻消融術(shù)的基本原理：①經(jīng)由針型電極輸出高頻射頻波，促使組織內(nèi)離子出現(xiàn)快速振動(dòng)摩擦產(chǎn)熱，局部溫度可達(dá)90～120 ℃，靶區(qū)癌細(xì)胞出現(xiàn)熱凝固性壞死及變性，癌細(xì)胞周圍血管閉塞凝固，進(jìn)而避免出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，殺死癌細(xì)胞的目的；②射頻消融術(shù)治療后機(jī)體抗腫瘤免疫功能顯著提高，主要源于射頻消融術(shù)可直接殺死惡性腫瘤，消除或減輕腫瘤負(fù)荷，促使腫瘤緩解免疫抑制，有助于機(jī)體恢復(fù)免疫功能；經(jīng)滅活的腫瘤留在機(jī)體內(nèi)，形成腫瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞，增強(qiáng)細(xì)胞的免疫功能；③射頻消融術(shù)為熱凝固治療，產(chǎn)生熱效應(yīng)，暴露腫瘤細(xì)胞表面抗原簇，或改變腫瘤抗原，促使腫瘤的抗原性增強(qiáng)；④腫瘤的熱療原位滅活產(chǎn)生熱休克蛋白，尤其是HSP70，參與向T細(xì)胞呈遞腫瘤抗原，激發(fā)T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的機(jī)體細(xì)胞免疫。射頻消融術(shù)本身產(chǎn)生熱量可引發(fā)局部炎癥反應(yīng)，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。

本研究結(jié)果顯示，CD4+、CD3+及CD4+/CD8+水平均有升高，而CD8+水平降低，表明經(jīng)射頻消融術(shù)治療后顯著改善了機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，抗腫瘤免疫功能顯著提高；而經(jīng)射頻消融術(shù)后患者的外周血細(xì)胞因子水平降低，表明機(jī)體抑炎作用顯著提高[19-20]。在單獨(dú)對(duì)觀察組患者年齡、性別進(jìn)行觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)，男性CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平變化更明顯，而NK細(xì)胞水平明顯上升，提示男性在射頻消融治療后改善情況優(yōu)于女性。在不同年齡的研究中發(fā)現(xiàn)，年齡≤55歲的患者CD4+、CD8+及NK細(xì)胞指標(biāo)水平顯著高于年齡＞55歲的患者；年齡≤55歲的患者IL-10、IL-6、TNF-α以及IL-1β指標(biāo)水平顯著低于年齡＞55歲的患者。進(jìn)一步提示年齡≤55歲的患者射頻消融術(shù)治療后免疫系統(tǒng)改善情況更好，細(xì)胞因子水平改善更明顯，治療效果更好。

原發(fā)性肝癌患者進(jìn)行射頻消融術(shù)可顯著提高其外周血免疫細(xì)胞亞群水平，降低細(xì)胞因子水平，且射頻消融術(shù)對(duì)年齡55歲及55歲以下、男性患者T細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平改變程度更明顯。