不同采摘時間干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油的GC-MS分析

姜坤妤，余 蘭

遵義醫(yī)學院藥學院，遵義 563000

黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsispilosula(Franch.) Nannf.、素花黨參CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.) L.T.Shen或川黨參CodonopsistangshenOliv.的根[1]，是我國常用的一種傳統(tǒng)補益類中藥，其性味甘平，主歸脾、肺二經，具有補中益氣、健脾益肺、養(yǎng)血生津之功效，臨床上常用于脾肺氣虛、食少倦怠、中氣不足、面色萎黃、心悸氣短、熱病傷津等癥，主產于山西、甘肅、陜西、四川、湖北等地[2-7]。黨參中主要含有糖類、苷類、生物堿類、甾醇類、揮發(fā)油、三萜類、倍半萜內酯類等成分；具有調節(jié)血糖、促進造血機能、保肝、抗?jié)?、抗輻射、抗缺氧、增強機體免疫功能、降壓、延緩衰老及調節(jié)胃腸運動等多種藥理作用[8-11]。隨著現代農業(yè)和科學技術的發(fā)展，黨參的應用更加的廣泛，從藥品到食品，乃至于化妝品。

道真洛龍黨參產于貴州省遵義市道真縣洛龍鎮(zhèn)，是川黨參的生態(tài)型變種，是貴州省著名的特有藥材，質量優(yōu)良。目前關于道真洛龍黨參揮發(fā)油的研究未見報道，筆者采用氣相色譜-質譜聯用技術首次對道真洛龍黨參揮發(fā)油的化學成分進行了研究，以期為道真洛龍黨參資源的進一步開發(fā)利用提供依據。

1 儀器與材料

GC6890/MS5973型氣相色譜-質譜聯用儀(Agilent公司，美國)，AL204電子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)，電子調溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)，正己烷(成都市科龍化工試劑廠，色譜純)，無水硫酸鈉(重慶川江化學試劑廠，分析純)，實驗用水為雙蒸水。

不同采摘時間道真洛龍黨參來源見表1，經遵義醫(yī)學院楊建文教授鑒定為桔?？浦参飳冱h參Codonopsispilosula的干燥的和新鮮的根。

表1 不同采摘時間道真洛龍黨參樣品來源信息Table 1 Information of Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取

取干燥的道真洛龍黨參粉碎，過60目篩，按照《中國藥典》2015年版方法提取揮發(fā)油[12]，精密稱取粉末160 g置于圓底燒瓶中，加入10倍體積蒸餾水，浸泡1 h,按照《中國藥典》2015年版方法提取揮發(fā)油[12]，每次提取8 h，(提取器中揮發(fā)油量不再增加)。用適量正己烷洗脫揮發(fā)油，充分搖勻靜止后，取油層。然后，無水硫酸鈉干燥，用正己烷定容至3 mL,過0.45 μm微孔濾膜后，得供試品。取新鮮的道真洛龍黨參，洗凈切成薄片，按照《中國藥典》2015年版方法提取揮發(fā)油[12]，精密稱取250 g置于圓底燒瓶中，提取出的揮發(fā)油的量相當于160 g干道真洛龍黨參提取出揮發(fā)油量的1/6，用正己烷定容至0.5 mL,剩余提取步驟與干道真洛龍黨參相同。

2.2 色譜條件

Phenomenex ZB-5MSi石英毛細管色譜柱(250 μm×30 m,0.25 μm)；載氣為高純度氦氣；載氣流量為1.0 mL/min；進樣量1.0 μL；分流比30∶1；進樣口溫度250 ℃；程序升溫：初始溫度80 ℃，以6.5 ℃/min升至180 ℃，接著以1 ℃/min升溫至195 ℃，最后以20 ℃/min升溫至280 ℃，保持6 min。

2.3 質譜條件

離子源為EI源；電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；四級桿溫度150 ℃；溶劑延遲4 min，掃描范圍m/z30～500。

2.4 數據處理

樣品中各揮發(fā)油成分用計算機與Wiley7，NIST05標準質譜數據庫檢索匹配，統(tǒng)計匹配度大于90%的化學成分。采用峰面積歸一化法定量分析各組分相對百分含量。

3 結果與分析

3.1 色譜柱優(yōu)化

實驗共考察了DB-5石英毛細管色譜柱(250 μm×60 m,0.25 μm)、hp-5MS石英毛細管色譜柱(250 μm×30 m,0.25 μm)和ZB-5MSi石英毛細管色譜柱(250 μm×30 m,0.25 μm)對干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分離效果的影響；結果表明，干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分在ZB-5MSi石英毛細管色譜柱有著良好的分離效果。

3.2 不同采摘時間干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分析

按2.1，2.2和2.3所述方法，分別獲得干、鮮道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分總離子流色譜圖，如圖1所示。結果表明，實驗選定的條件能夠對干、鮮道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分進行分離鑒定。樣品S1～S5中鑒定出的揮發(fā)油成分數依次為32、52、22、26、40個。樣品S6～S8中鑒定出的揮發(fā)油成分數依次為28、14、15個。

3.3 不同采摘時間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分析

對不同采摘時間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分匹配度>90%的成分進行分析鑒定(見表2)。結果表明，樣品S1～S5中共有揮發(fā)油成分7個，分別為肉豆蔻酸，亞油酸，棕櫚酸，棕櫚酸甲酯，二十烷，亞油酸甲酯，角鯊烯。這7個共有揮發(fā)油成分占樣品S1～S5的總比率分別為75.78%、84.88%、72.11%、72.28%、73.61%。由此可以看出，5個不同采摘時間干道真洛龍黨參共有揮發(fā)油成分含量大致相同，其余含量較低成分有所差異。棕櫚酸和亞油酸是含量最高的兩種成分，兩者在樣品S1～S5中占揮發(fā)油成分總量依次為56.14%、72.35%、52.92%、45.02%、55.09%。其中，樣品S2中這兩種成分總含量最高。亞油酸甲酯和亞油酸具有抗炎作用[13]。棕櫚酸和亞油酸有較強的抗氧化作用[14-16]。亞油酸還具有降低人體血液中膽固醇和血脂的作用。由此推測，不同采摘時間干道真洛龍黨參的抗氧化、抗炎、降血脂及降膽固醇能力有所不同。

圖1 不同采摘時間道真洛龍黨參揮發(fā)油的總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatogram of volatile oils in Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times注：1.肉豆蔻酸；2.棕櫚酸甲酯；3.棕櫚酸；4.亞油酸甲酯；5.亞油酸；6.二十烷；7.角鯊烯。Note:1.myristic acid;2.methyl hexadecanoate;3.palmitic acid;4.octadecadienoic acid,methyl ester;5.linoleic acid;6.eicosane;7.squalene.

3.4 不同采摘時間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類的分析比較

對樣品S1～S5中的揮發(fā)油成分進行分類，見表3。結果表明樣品S1～S5揮發(fā)油中均含有脂肪酸、脂肪酸酯、烷烴、烯烴、烯醇類，其中脂肪酸是樣品S1～S5中相對峰面積最大的成分(樣品S1～S5中脂肪酸的相對峰面積依次是59.77%、76.75%、55.96%、53.00%、57.01%)，脂肪酸酯次之(樣品S1～S5中脂肪酸酯的相對峰面積依次是19.69%、11.57%、17.53%、23.57%、21.30%)，再者是烷烴(樣品S1～S5中烷烴的相對峰面積依次是6.05%、2.95%、17.71%、8.19%、9.13%)。3類主要揮發(fā)油成分占樣品S1～S5的相對峰面積依次為85.26%、91.27%、91.20%、84.76%、87.44%。對不同采摘時間干道真洛龍黨參中的揮發(fā)油成分進行分類可見3類主要揮發(fā)油成分脂肪酸、脂肪酸酯和烷烴占樣品S1～S5的相對峰面積均在80%以上。其中，樣品S2中這3類主要揮發(fā)油成分總含量最高。

表2 不同采摘時間干道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分和相對峰面積Table 2 Volatile oil components and relative peak area of dried Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

續(xù)表2(Continued Tab.2)

續(xù)表2(Continued Tab.2)

序號No.保留時間tR(min)化合物Compound相對峰面積Relative peak area(%)S1S2S3S4S57633.277(11Z,13Z)-11,13-十六烷基乙酸酯(11Z,13Z)-11,13-Hexadecadienylacetate-0.25---7733.344N-(2-三氟甲基苯)-3-吡啶甲酰胺肟 Pyridine-3-carbox-amide,oxime,N-(2-trifluoromethylphenyl)-----0.327833.441十六烷 Hexadecane-0.326.71-0.467933.44610-甲基-二十烷 10-methyl-Eicosane0.98----8033.452三十六烷 Hexatriacontane----0.688133.976油醇 (Z)-9-Octadecen-1-ol--1.60--8234.057(3E,12Z)-1,3,12-非鄰二烯-5,14-二醇(3E,12Z)-1,3,12-Nonadecatriene-5,14-diol----0.928334.0635-(3-十一烷基-2-環(huán)氧乙烷基)戊酸甲酯Methyl 5-(3-un-decyl-2-oxiranyl)pentanoate---0.83-8434.359二十四烷 Tetracosane----1.968534.365二十七烷 Heptacosane-0.25---8634.5492,2′-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)2,2′-Methyle-nebis(6-tert-butyl-4-methylphenol)----1.328734.7162-甲基-z,z-3,13-十八二烯醇 2-Methyl-Z,Z-3,13-octadec-adienol--2.38--8834.759二乙基甲基硼烷 Diethylmethylborane0.630.03---8934.7702-辛基環(huán)丙烷辛醛 2-Octylcyclopropaneoctanal----0.909034.9542-(十四氧基)-乙醇 Ethanol,2-(tetradecyloxy)--0.07---9135.083二十八烷 Octacosane1.600.253.13-0.559235.083三十烷 Triacontane--5.36-3.589335.0897-己基-十二烷 Tridecane,7-hexyl--0.36---9435.699(8Z)-14-甲基-8-十六烯-1-醇 (8Z)-14-Methyl-8-hexade-cen-1-ol-0.11---9535.785草酸異丁酯 Oxalic acid,isobutyl hexadecyl ester3.62----9635.818二十三烷 Tricosane---1.58-9735.823二十一烷 Heneicosane-0.54---9836.001(1-辛基十二烷基)-環(huán)己烷 (1-octyldodecyl)-Cyclohexane0.47----9936.1047-環(huán)己基-二十烷 7-Cyclohexylicosane--1.17--10036.617二十烷 Eicosane0.810.240.950.371.7110136.6189-辛基-十七烷 9-Octylheptadecan---1.30-10236.623二十二烷 Docosane-0.25-1.84-10337.26614β-孕烷 14-.BETA.-PREGNA0.640.22---10437.3301-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-4-(1h-吡咯-1-基)-哌啶1-(5-trifluoromethyl-2-pyridyl)-4-(1H-pyrrol-1-yl)-Piperidine1.06----10537.471芥酸酰胺 Erucylamide3.87----10637.671蒽-9,10-醌,1-(3-羥基-3-苯基-1-三嗪基)-Anthra-9,10-quinone,1-(3-hydrohy-3-phenyl-1-triazenyl)-----0.1610737.909角鯊烯 Squalene4.491.821.604.452.4410838.2985-甲基-3-正丙基-2-[Z-(1,2,3,3-四氘)-1-丁烯基]吡嗪 5-methyl-3-n-propyl-2-[Z-(1,2,3,3-tetradeuterio)but-1-enyl]pyrazine---0.56-10939.8697-己基-十二烷 Tridecane,7-hexyl---0.39--

注：“-”未檢測到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

表3 不同采摘時間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類和相對峰面積Table 3 Types and relative peak area of volatile oil components of dried Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

注：“-”未檢測到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

3.5 不同采摘時間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分析

對不同采摘時間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分匹配度>90%的成分進行分析鑒定，見表4。結果表明，鮮道真洛龍黨參含量最高的揮發(fā)油成分為角鯊烯，角鯊烯具有抗腫瘤、抗氧化的作用[17-19]，占樣品S6～S8的比率分別為29.05%、41.93%、28.09%。由此可以看出，3個不同采摘時間鮮道真洛龍黨參共有揮發(fā)油成分含量具有一定差異，樣品S7中共有成分含量最高，其余成分的含量具有較大差異。例如，棕櫚酸在占樣品S6～S8的比率分別為5.52%、0%、38.24%。說明鮮道真洛龍黨參受采摘時間影響較明顯。由于實驗采用的是新鮮道真洛龍黨參，因此樣品中的水分含量將直接影響含量對比結果，采摘時間不同,光照、溫度、濕度等因素都會有明顯變化,從而影響樣品中的水分含量，進一步影響棕櫚酸等其余揮發(fā)油成分在樣品S6～S8的比率。樣品S6中主要特有成分為雙環(huán)己烷(4.28%)和14-甲基十五烷酸甲酯(11.08%)；S7中主要特有成分為正癸烯(3.69%)，十七烷(3.12%)，十九烷(6.21%)，二十三烷(7.72%)，17-十六烷基四三烏頭烷(4.83%)；S8中主要特有成分為三十四烷(3.31%)和二十六烷(2.57%)。

表4 不同采摘時間鮮道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分和相對峰面積Table 4 Volatile oil components and relative peak area of fresh Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

續(xù)表4(Continued Tab.4)

序號NO.保留時間tR(min)化合物Compound相對峰面積Relative peak area(%)S6S7S83634.360十八烷 Octadecane-9.012.103735.083二十三烷 Tricosane-7.72-3835.085二十六烷 Hexacosane--2.573935.370二十四烷 Tetracosane0.31--4035.60211-[(三甲基硅基)氧]-,雙(0-甲基肟),(5-β,11-β.)-孕烷-3,20-二酮 11-[(trimethylsilyl)oxy]-,bis(O-methyloxime),(5.beta.,11.be-ta.)-Pregnane-3,20-dione1.83--4135.818三十四烷 Tetratriacontane--3.314235.92517-十六烷基四三烏頭烷17-hexadecyl-Tetratriacontane-4.83-4336.61211-丁基-二十二烷 11-butyl-Docosane1.53--4436.617二十烷 Eicosane2.73-1.724537.909角鯊烯 Squalene29.0541.9328.094638.5892-溴代十二烷 2-Bromododecane0.71--

注：“-”未檢測到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

3.6 不同采摘時間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類的分析比較

對樣品S6～S8中的揮發(fā)油成分進行分類，見表5。結果表明，樣品S6～S8揮發(fā)油中均含有脂肪酸酯、烷烴、烯烴類。樣品S6中揮發(fā)油成分共有11類物質，主要含有1種脂肪酸類(5.52%),3種脂肪酸酯類(22.85%)，11種烷烴類(18.84%),4種烯烴類(40.89%)；樣品S7中揮發(fā)油成分共有3類物質，主要含有7種烷烴類(41.53%)，6種烯烴類(56.05%)；樣品S8中揮發(fā)油成分共有6類物質，主要含有1種脂肪酸類(38.24%),3種脂肪酸酯類(18.05%)，6種烷烴類(13.04%),3種烯烴類(30.04%)。這幾類主要揮發(fā)油成分占樣品S6～S8的相對峰面積依次為88.10%、97.58%、99.37%。

表5 不同采摘時間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類和相對峰面積Table 5 Types and relative peak area of volatile oil components of fresh Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

注：“-”未檢測到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

對不同采摘時間鮮道真洛龍黨參中的揮發(fā)油成分進行分類可見樣品中主要揮發(fā)油成分占樣品S6～S8的相對峰面積均在80%以上。

4 討論

綜上，干道真洛龍黨參中主要揮發(fā)油成分為棕櫚酸、亞油酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸甲酯、亞油酸甲酯和角鯊烯等。鮮道真洛龍黨參中主要揮發(fā)油成分為角鯊烯、亞油酸甲酯、棕櫚酸、14-甲基十五烷酸甲酯和1-檸檬烯等。11月中旬采摘的干、鮮道真洛龍黨參(樣品S2與樣品S7)共有揮發(fā)油成分含量最高，可為干、鮮道真洛龍黨參的采摘提供一定理論基礎。采摘時間對干、鮮道真洛龍黨參主要揮發(fā)油成分的影響均不大，但對其余揮發(fā)油成分有一定的影響。其原因在于采摘時間不同,光照、溫度、濕度都會有變化,從而影響干、鮮道真洛龍黨參一部分揮發(fā)油成分的含量。

干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分以脂肪酸、脂肪酸酯、烷烴、烯烴類為主。揮發(fā)油中含量較高成分有棕櫚酸、亞油酸、亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯和肉豆蔻酸。鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分以脂肪酸、脂肪酸酯、烷烴、烯烴類為主。揮發(fā)油中含量較高成分有角鯊烯、1-檸檬烯、花柏烯、棕櫚酸和亞油酸甲酯等。干道真洛龍黨參與鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分的種類差別不大但含量有明顯差異。說明道真洛龍黨參在干燥過程中部分揮發(fā)油成分由于受熱而發(fā)生了轉化?？赡苁窍N、烷烴類成分轉化成了脂肪酸及脂肪酸酯類成分。

干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分的存在對于評價干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油整體功效及驗證其抗氧化、抗腫瘤和抗炎作用等可能具有重要的研究意義，也存在一定的藥用價值，故應予適當保留或開發(fā)。不同采摘時間干、鮮道真洛龍黨參所含化學成分的闡明也能為道真洛龍黨參藥材藥用多元化、藥材炮制及采摘時間等多方面的進一步開發(fā)研究提供一定實驗依據和參考。