消化系統(tǒng)腫瘤與MTHFR基因多態(tài)性相關(guān)研究

程筱雯，李　潔，徐元宏

亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)在代謝葉酸的生理過程中發(fā)揮著重要作用。MTHFR 基因突變會導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境發(fā)生紊亂，包括DNA復(fù)制、甲基化修飾等發(fā)生異常，MTHFR基因第4外顯子的C677T位點(diǎn)的突變是最常見的，是引起編碼酶缺乏或活性下降的最常見原因。已有報道[1-2]表明由于MTHFR 基因C677T突變可導(dǎo)致編碼酶活性下降、DNA甲基化異常，從而促進(jìn)癌癥發(fā)生。MTHFR 基因的多態(tài)性與結(jié)直腸癌、胃癌及肝癌等多種消化系統(tǒng)惡性腫瘤的易感性聯(lián)系緊密[2-4]。該研究旨在了解消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者群體MTHFR基因C677T位點(diǎn)的基因多態(tài)性的頻數(shù)分布差異，并分析年齡、性別、體重指數(shù)(body mass index, BMI)對MTHFR 基因C677T位點(diǎn)遺傳多態(tài)性發(fā)生頻率的影響。

1　材料與方法

1.1病例資料選取安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院干部病房外科2016年11月～2017年9月收住院且確診的消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者42例，其中男29例，女13例，年齡44～89歲。

1.2標(biāo)本類型外周全血(EDTA-K2抗凝)。

1.3儀器實時熒光定量PCR儀(Roche Cobas z480);芯片雜交儀(上海百傲)。

1.4試劑MTHFR基因型檢測試劑盒(上海百傲)。

1.5檢驗方法定性PCR+基因芯片法。實驗流程嚴(yán)格按試劑盒說明書操作步驟進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析，運(yùn)用單樣本Kolmogorov-Smirnov法進(jìn)行擬合優(yōu)度檢驗和頻數(shù)統(tǒng)計尋找優(yōu)勢基因型，運(yùn)用χ2檢驗研究性別對基因型頻率的影響，運(yùn)用單因素方差分析(One-Way ANOVA)分別研究年齡和BMI對基因型頻率的影響。

2　結(jié)果

2.1消化系統(tǒng)惡性腫瘤MTHFRC677T的基因型分布情況本研究中檢測MTHFR基因677位點(diǎn)的3種不同基因型，結(jié)果檢出野生型純合子CC型13例(30.95%)，突變雜合子型CT型24例(57.14%)，突變純合子型TT型5例(11.91%)；運(yùn)用單樣本Kolmogorov-Smirnov法進(jìn)行擬合優(yōu)度檢驗尋找優(yōu)勢基因型，結(jié)果顯示，χ2=2.469，P<0.001，說明三種基因型出現(xiàn)頻率不服從均勻分布，存在優(yōu)勢基因，對三種基因型進(jìn)行頻數(shù)統(tǒng)計顯示，CT型為優(yōu)勢基因型，占總數(shù)的57.14%。

2.2性別、年齡、BMI對MTHFR基因C677T遺傳多態(tài)性的影響運(yùn)用χ2檢驗研究性別對基因型的影響，運(yùn)用One-Way ANOVA分別研究年齡和BMI對基因型的影響，結(jié)果可以認(rèn)為在本次研究的42例消化道惡性腫瘤患者，MTHFR C677T 的3種不同基因型在不同性別、年齡和體重指數(shù)的發(fā)生頻率方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

3　討論

MTHFR是調(diào)節(jié)葉酸代謝的關(guān)鍵酶，葉酸代謝障礙會導(dǎo)致DNA低甲基化，而DNA的低甲基化則與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。MTHFR基因677位點(diǎn)存在遺傳多態(tài)性：野生型純合CC型，突變雜合CT型和突變純合TT型，多項對MTHFR基因多態(tài)性與人類腫瘤相關(guān)性的研究[5-6]顯示，MTHFR基因677位點(diǎn)的基因多態(tài)性與胃癌、結(jié)直腸癌等多種消化系統(tǒng)惡性腫瘤的易感性存在密切聯(lián)系，不過研究結(jié)果卻有所不同，有報道提示高T677T基因頻率發(fā)生食管癌的風(fēng)險遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于C677C型，認(rèn)為MTHFR T677T基因型可能是食管癌的一個易感因素，而另有研究[7]認(rèn)為MTHFR C677T基因多態(tài)性可能與新疆哈薩克族與漢族食管癌的易感性無關(guān)。本次研究中以安徽地區(qū)消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者為研究對象，發(fā)現(xiàn)MTHFR基因677T位點(diǎn)的基因型以CT型為優(yōu)勢基因型，且具有統(tǒng)計學(xué)意義，與已有報道不盡相同，多數(shù)研究結(jié)果顯示TT型是癌癥患者的主要型別，同時本研究初步得到的結(jié)論是性別、年齡和BMI可能不是MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因遺傳多態(tài)性發(fā)生頻率的主要影響因素，出現(xiàn)這種差異，筆者認(rèn)為可能與種族和地域的差異有關(guān)。接下來的研究方向就是擴(kuò)大樣本量，建立正常對照以進(jìn)一步驗證本次研究結(jié)果，同時收集流行病學(xué)相關(guān)資料，增加飲食習(xí)慣等環(huán)境因素分析、對化療藥物敏感性及患者生存率的分析，深入研究MTHFR基因677位點(diǎn)基因多態(tài)性與消化系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生的相關(guān)性?；蚨鄳B(tài)性也可能造成不同個體對同一種藥物出現(xiàn)不同反應(yīng)，所以基因多態(tài)性及多基因的聯(lián)合檢測對于制定個體化治療方案勢在必行[8]。

精準(zhǔn)醫(yī)療是未來醫(yī)學(xué)發(fā)展的方向，對基因多態(tài)性與疾病的相關(guān)性及其機(jī)理進(jìn)行深入研究，對于不同疾病的預(yù)防及個體化治療均具有重要指導(dǎo)意義。