靈芝紅景天復(fù)方制劑對(duì)小鼠的抗疲勞作用

譚曉宇 楊 勇 王科斯 Hee-Do Hong Mi Jang Young-Ran Song 張慶鎬 劉麗萍

(延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫教研室，吉林 延吉 133002)

疲勞是一種亞健康狀態(tài)，也是多種疾病的并發(fā)癥，糖尿病、肝臟、腎臟疾病都會(huì)產(chǎn)生易疲勞狀態(tài)，疲勞狀態(tài)可以導(dǎo)致機(jī)體免疫力低下，從而引起條件致病菌侵襲〔1～3〕。目前，人們對(duì)疲勞這一癥狀的關(guān)注度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，并未對(duì)此做任何應(yīng)對(duì)措施，但是經(jīng)調(diào)查，全球大約有35%的人群都處在疲勞狀態(tài)〔4～6〕，疲勞的改善和預(yù)防應(yīng)該被得到重視。靈芝是一種藥用真菌，主要成分有靈芝三萜、靈芝多糖和甾醇類物質(zhì)，靈芝可以抗疲勞、延年益壽、扶正固本、維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)平衡，且對(duì)呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有調(diào)節(jié)作用〔7〕。紅景天是中國(guó)傳統(tǒng)藥材，在我國(guó)種類繁多，有七十多種，中國(guó)早在多年前就有應(yīng)用紅景天潤(rùn)肺補(bǔ)腎的記載，有抗疲勞、抗氧化、增強(qiáng)免疫等作用〔8〕。目前以靈芝、紅景天為主要成分的復(fù)方制劑抗疲勞作用的研究還未見報(bào)道，因此本研究通過檢測(cè)小鼠力竭游泳時(shí)間及小鼠體內(nèi)血尿素氮、血乳酸、血乳酸脫氫酶、肝糖原、肌糖原等指標(biāo)考察靈芝紅景天復(fù)方制劑(CEO)對(duì)小鼠的抗疲勞的作用，并且還通過檢測(cè)血漿中丙二醛(MDA)含量，探究靈芝紅景天復(fù)方制劑是否可通過抗氧化的方式達(dá)到抗疲勞的目的。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料 CEO由韓國(guó)食品研究院提供；清潔級(jí)昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，購(gòu)自大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；糖原檢測(cè)試劑盒、乳酸檢測(cè)試劑盒、乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒、尿素氮檢測(cè)試劑盒、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成有限公司。

1.2動(dòng)物分組 本實(shí)驗(yàn)采用昆明種小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組；CEO低劑量組；CEO中劑量組；CEO高劑量組。灌胃劑量分別為50、100、200 mg/kg，灌胃周期28 d。

1.3力竭游泳時(shí)間檢測(cè) 灌胃小鼠CEO復(fù)方制劑，第21天，對(duì)小鼠進(jìn)行預(yù)游泳，讓小鼠適應(yīng)游泳環(huán)境，每只小鼠預(yù)游泳5 min，第28天，在末次給藥后，休息30 min，在小鼠尾中部系上鉛絲，鉛絲重量為小鼠體重的7%，在水深30 cm、恒定水溫 (25±1)℃的游泳箱里進(jìn)行力竭游泳實(shí)驗(yàn)，小鼠沉入水中10 s，不能上浮到水面即為力竭，記錄力竭時(shí)間。

1.4生化指標(biāo)測(cè)定 灌胃小鼠CEO復(fù)方制劑28 d，末次給藥30 min后，在水深30 cm、恒定水溫(25±1)℃的環(huán)境下進(jìn)行無負(fù)重游泳90 min，用吹風(fēng)機(jī)吹干小鼠，休息1 h后眼球取血于1.5 ml離心管(含肝素)中，5 000 r/min、4℃，離心10 min得血漿，-20℃保存，待用。 取血后立即將小鼠頸椎脫臼處死，取其腓腸肌、肝臟，在生理鹽水中漂洗去除表面血液，用濾紙吸干，儲(chǔ)存到-80℃冰箱中保存待用。用尿素氮試劑盒、乳酸脫氫酶試劑盒、乳酸試劑盒、MDA試劑盒檢測(cè)血漿中尿素氮、乳酸脫氫酶、乳酸、MDA含量。用糖原試劑盒檢測(cè)肝臟、腓腸肌中糖原含量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用Prism3.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1力竭游泳時(shí)間檢測(cè)結(jié)果 與對(duì)照組〔(3.20±0.42)min〕相比，CEO中劑量組〔(4.88±0.89)min〕和CEO高劑量組〔(5.25±1.56)min〕力竭游泳時(shí)間顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CEO低劑量組〔(4.07±1.24)min〕與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2血乳酸與血乳酸脫氫酶檢測(cè)結(jié)果 與對(duì)照組相比，CEO中劑量組和CEO高劑量組血乳酸含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CEO低劑量組、CEO中劑量組、CEO高劑量組血乳酸脫氫酶含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 各組小鼠血乳酸及乳酸脫氫酶含量

與對(duì)照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

2.3血尿素氮檢測(cè)結(jié)果 與對(duì)照組〔(0.30±0.03)mmol/L〕相比，CEO中劑量組〔(0.26±0.02)mmol/L〕和CEO高劑量組〔(0.25±0.02)mmol/L〕血尿素氮含量明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CEO低劑量組〔(0.29±0.03)mmol/L〕與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.4肝糖原和肌糖原檢測(cè)結(jié)果 與對(duì)照組相比，CEO低劑量組和CEO中劑量組肝糖原含量有明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；CEO低、中、高劑量組肌糖原含量均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

與對(duì)照組比較：1)P<0.01

2.5血漿中MDA檢測(cè)結(jié)果 與對(duì)照組〔(10.73±1.87)mmol/L〕相比，CEO中劑量組〔(7.28±2.64)mmol/L〕血漿中MDA含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CEO低劑量組〔(8.97±2.27)mmol/L〕和CEO高劑量組〔(10.84±1.88)mmol/L〕與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

運(yùn)動(dòng)耐力的強(qiáng)弱是反映機(jī)體抗疲勞的直觀方法，是衡量機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力的綜合指標(biāo)〔9,10〕。CEO物組小鼠游泳時(shí)間顯著增加，并且隨著藥物濃度的提高，游泳時(shí)間也相對(duì)延長(zhǎng)。機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)，會(huì)首先通過分解糖類來提供能量，當(dāng)糖代謝不足以維持機(jī)體運(yùn)動(dòng)所需能量時(shí)，機(jī)體才會(huì)分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生能量，蛋白質(zhì)分解最終產(chǎn)物就是尿素氮，所以血液中尿素氮的含量可以反映機(jī)體的能量?jī)?chǔ)備情況，從而評(píng)估機(jī)體抗疲勞能力〔11〕。本研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)后給藥CEO小鼠的血尿素氮含量明顯減低，并且隨劑量增高，血尿素氮含量降低。

乳酸是糖類物質(zhì)無氧酵解時(shí)生成的丙酮酸與氫結(jié)合后產(chǎn)生的一種代謝廢物。乳酸的大量積累，會(huì)使肌肉收縮，血管受到壓迫，組織供氧不足。乳酸脫氫酶可以使乳酸中的氫解離，重新還原成丙酮酸，所以機(jī)體的抗疲勞能力與血乳酸含量成反比，而與乳酸脫氫酶含量成正比〔12〕。CEO中劑量組和高劑量組的血乳酸含量顯著降低，三個(gè)劑量藥物組的血乳酸脫氫酶均顯著增高，說明CEO可以通過增加血乳酸脫氫酶，使血乳酸降解為丙酮酸，產(chǎn)生抗疲勞的效果。糖原是機(jī)體的能量?jī)?chǔ)備，血液中游離糖分含量增多時(shí)，體內(nèi)單糖就會(huì)合成糖原，主要有肝糖原和肌糖原兩種。在血糖不足時(shí)，肝糖原先分解成單糖供能，維持糖類物質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡。機(jī)體在高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)下，肌糖原也會(huì)進(jìn)行分解提供能源，但肌糖原不能直接分解為葡萄糖，而是先產(chǎn)生乳酸，隨血液循環(huán)到肝臟后，轉(zhuǎn)變成肝糖原再發(fā)揮作用。CEO三個(gè)劑量組的肌糖原含量均顯著增高；低劑量組和中劑量組的肝糖原含量顯著增加，這說明CEO可以顯著增加小鼠體內(nèi)糖原儲(chǔ)存量。

生物體中，不飽和脂肪酸被過量的氧自由基攻擊會(huì)產(chǎn)生過氧化脂質(zhì)，MDA是過氧化脂質(zhì)的最終代謝產(chǎn)物，其含量與細(xì)胞受自由基氧化破壞的成正比，生物膜損傷會(huì)抑制三磷酸腺苷(ATP)釋放，導(dǎo)致能量供應(yīng)不足，最終引起機(jī)體疲勞狀態(tài)的產(chǎn)生〔13～15〕。本實(shí)驗(yàn)說明CEO可以保護(hù)細(xì)胞不被氧自由基破壞，防止生物膜被損傷，避免機(jī)體產(chǎn)生疲勞狀態(tài)。