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    楊梅葉中花色苷提取工藝優(yōu)化

    2018-12-20 09:04:00胡明華
    中國食物與營養(yǎng) 2018年11期
    關(guān)鍵詞:葉中緩沖溶液花色

    金 茜,趙 特,胡明華

    (遵義師范學(xué)院,貴州遵義 563006)

    花色苷是目前清除氧自由基和脂質(zhì)過氧化的抑制劑之一[1-9],是一種天然色素,在歐美等國家已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和保健食品行業(yè)[10-11]。提取花色苷的方法有雙水相法、超聲波法、微波法、酶解法等[12-14]等。本試驗(yàn)以恒溫水浴震蕩器為輔助儀器,采用溶劑提取法進(jìn)行花色苷的提取,為楊梅葉資源綜合利用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    儀器:SHIMADZU AUX220 電子天平,日本島津;T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;TGL-16G離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠制造;SHA-B恒溫水浴震蕩器,金壇市科析儀器有限公司;FW135中草藥粉碎機(jī),天津市泰斯特儀器有限公司;ZK-82B真空干燥箱,天津天有利科技有限公司;pHS-3C型精密算度計(jì),上海大普儀器有限公司。

    試劑:無水乙醇(AR)、混合磷酸鹽緩沖溶液(pH=6.86)、氯化鉀(AR)、濃鹽酸(AR)、乙酸鈉(AR)、pH1.0氯化鉀緩沖溶液、pH4.5乙酸鈉緩沖溶液,所有試劑均購自成都試劑廠。

    1.2 材料

    楊梅葉,2016年6月—2017年1月采摘于遵義,洗凈后晾干或低溫烘干,粉碎,避光保存。

    1.3 楊梅葉中花色苷的提取方法

    準(zhǔn)確稱取一定量的楊梅葉粉末,以80%的乙醇為提取劑,鹽酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%,在60℃的恒溫水浴震蕩器里浸提60min,于5 000r/min離心10min。

    1.4 花色苷最大吸收光譜的測(cè)定

    提取液用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行光譜掃描,測(cè)定楊梅葉中花色苷的最大吸收波長(zhǎng)。由圖1可知,楊梅葉花色苷在520~550nm之間有明顯的吸收峰,在538nm處有最大吸收,故其最大吸收波長(zhǎng)為538nm。

    圖1 楊梅葉花色苷特征吸收光譜

    1.5 pH示差法測(cè)定花色苷含量

    在不同的pH條件下,花色苷會(huì)表現(xiàn)出不同的結(jié)構(gòu),當(dāng)pH=1.0時(shí),花色苷以有色的黃烊鹽正離子的形式存在;當(dāng)pH=4.5時(shí),則以無色半酮縮醛形式存在。兩種物質(zhì)的吸光度有很大差別,但結(jié)構(gòu)都相對(duì)穩(wěn)定,故可用pH示差法測(cè)定花色苷的含量[15]。各取上清液1mL,分別加入氯化鉀緩沖溶液(pH1.0)和醋酸鈉緩沖溶液(pH 4.5)各9mL,混合后平衡1h,用乙醇溶液作空白,在最大吸收波長(zhǎng)λmax和700nm(校正渾濁度)處測(cè)得稀釋后樣品的吸光值。根據(jù)式(1)、(2)計(jì)算花色苷的含量。

    花色苷濃度(mg/L)=[(Aλmax-Aλ700)pH 1.0-(Aλmax-Aλ700)pH 4.5]×Mw×DF×1 000/k

    (1)

    式(1)中,Mw—相對(duì)分子質(zhì)量;DF—樣品稀釋倍數(shù);k—摩爾吸光系數(shù)。當(dāng)k未知或樣品成分未知時(shí),將矢車菊-3-葡萄糖苷作為標(biāo)準(zhǔn)物,此時(shí)Mw=449.2,k=26 900。

    花色苷含量m(mg/g,DW)=C×V/m0

    (2)

    式(2)中,DW—樣品為干重狀態(tài);V—浸提液體積;m0—樣品干重時(shí)的質(zhì)量。

    2 單因素試驗(yàn)與分析

    2.1 乙醇濃度的選擇及對(duì)花色苷提取率的影響

    由圖2可知,花色苷的提取率隨乙醇濃度的變化而改變,當(dāng)乙醇濃度為80%時(shí),花色苷提取率最高。

    表1 花色苷提取率隨乙醇含量的變化

    圖2 乙醇含量對(duì)花色苷提取量的影響

    2.2 提取時(shí)間對(duì)花色苷提取率的影響

    由圖3可知,當(dāng)提取時(shí)間為60min時(shí),花色苷的提取率達(dá)到最大,隨后花色苷的提取量下降。隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)導(dǎo)致了其他成分含量的增加,且提取率下降,同時(shí)延長(zhǎng)了試驗(yàn)的時(shí)間,因此選取60min作為提取的最佳時(shí)間。

    圖3 提取時(shí)間對(duì)花色苷提取量的影響

    表2 花色苷提取率隨時(shí)間的變化

    2.3 提取溫度對(duì)花色苷提取率的影響

    由圖4可知,當(dāng)溫度不斷升高,楊梅葉中花色苷的提取率不斷上升,當(dāng)提取溫度達(dá)到60℃時(shí)提取率達(dá)到最大,并隨溫度的升高而急劇下降,與文獻(xiàn)[16]結(jié)果一致,可能是花色苷的結(jié)構(gòu)在較高的溫度環(huán)境下受到了破壞,因此提取花色苷的溫度應(yīng)控制在60℃左右。

    表3 花色苷提取率隨提取溫暖的變化

    圖4 提取溫度對(duì)花色苷提取量的影響

    2.4 料液比對(duì)花色苷提取率的影響

    由圖5可知,隨著料液比的增加花色苷的提取率不斷上升,當(dāng)料液比為1∶70時(shí),花色苷的提取率趨于穩(wěn)定,因此選取的料液比為1∶70。

    表4 花色苷提取率隨料液比的變化

    圖5 料液比對(duì)花色苷提取量的影響

    2.5 最佳鹽酸濃度對(duì)花色苷提取率的影響

    由圖6可知,當(dāng)鹽酸濃度為0.3%時(shí),花色苷的提取率達(dá)到最大,當(dāng)酸度過高時(shí)花色苷的提取率反而下降,可能是花色苷中的糖苷鍵水解導(dǎo)致色苷提取率下降[17]。因此試驗(yàn)時(shí)選取0.3%的鹽酸濃度。

    表5 花色苷提取率隨鹽酸濃度的變化

    圖6 鹽酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)花色苷提取量的影響

    2.6 最佳提取次數(shù)對(duì)花色苷提取率的影響

    由圖7可知,當(dāng)提取次數(shù)為1時(shí),楊梅葉中花色苷的提取率最高,因此提取次數(shù)為1。

    表6 花色苷提取率隨提取次數(shù)的變化

    圖7 提取次數(shù)對(duì)花色苷提取量的影響

    3 花色苷提取的多因素正交試驗(yàn)

    按照四因素三水平進(jìn)行正交試驗(yàn)L9(34),對(duì)浸取時(shí)間、浸提溫度、乙醇含量、料液比4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選(表7、表8)。由極差(R)分析知,料液比對(duì)楊梅葉中花色苷的提取影響較大,其次是提取溫度和提取時(shí)間,影響最小的是提取劑濃度,即A>D>C>B,比較綜合各因素的 K 值,最佳提取工藝為料液比為1∶70、乙醇含量為80%、溫度為60℃、提取時(shí)間為60min,此條件下的提取率最高。

    表7 正交試驗(yàn)因素水平

    表8 正交試驗(yàn)結(jié)果

    4 結(jié)論

    楊梅葉花色苷最佳提取工藝為料液比為1∶70、乙醇含量為80%、溫度為60℃、提取時(shí)間為60min,此條件下的提取率最高。該提取方法操作簡(jiǎn)單、方便、無污染。從楊梅葉中提取的花色苷粗產(chǎn)品可進(jìn)一步純化,用于飲料、食品及醫(yī)藥中,為充分利用楊梅葉資源提供了參考依據(jù)。◇

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