外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合血清EB病毒DNA定量分析在傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒中的應(yīng)用

鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 河南省兒童醫(yī)院 鄭州市兒童醫(yī)院（450000）褚苗

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年2月～2017年12月我院疑似IM患兒274例，男158例，女116例，年齡1～9歲，平均（5.66±2.07）歲；本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 方法 外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查：以EDTA-K2抗凝管采靜脈血1ml，顛倒3～6次，混勻，血涂片2～3張，瑞氏-姬姆薩染液染色，油鏡鏡檢。由細(xì)胞學(xué)專業(yè)、技術(shù)嫻熟的專業(yè)檢測(cè)醫(yī)師閱片。陽(yáng)性：異型淋巴細(xì)胞＞10%。定量PCR技術(shù)分析：抽取靜脈血，以EDTA-K2抗凝處理，采取TaqMan熒光標(biāo)記探針基因擴(kuò)增技術(shù)測(cè)定，探針序列：FPEBV5X-CCTCGGACAGCTCCTAAGAAGGCACC-Y3’，26bp；引物序列：PQEBVF5，_AAGC-CCAACACTCCACCAC-3’，19bp；PQEBVR5’-CTGGTAGGACT-GGGCGAC-3’，18bp。PCR擴(kuò)增條件：93℃，2min，預(yù)變性；93℃，45s，55℃，60s，共10個(gè)循環(huán)。最后93℃，30s；55℃，45s，共30個(gè)循環(huán)。陽(yáng)性：EB-DNA定量＞1.0×103copy/ml。

附表 檢測(cè)結(jié)果[n(%)]

1.3 觀察指標(biāo) ①分析單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果。②比較單獨(dú)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度及特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 通過(guò)SPSS21.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料（特異度、靈敏度、準(zhǔn)確度）以n（%）表示，行χ2檢測(cè)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)情況 本研究疑似274例IM患兒經(jīng)實(shí)驗(yàn)室病理學(xué)確診98例。外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查檢出真陽(yáng)性55例，真陰性158例；定量PCR技術(shù)檢出真陽(yáng)性61例，真陰性163例；外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合定量PCR技術(shù)檢出真陽(yáng)性97例，真陰性157例。

2.2 檢測(cè)結(jié)果 聯(lián)合檢測(cè)準(zhǔn)確度92.70%、靈敏度98.98%高于外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查（77.74%、56.12%）、定量PCR技術(shù)（81.75%、62.24%）單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），聯(lián)合檢測(cè)特異度與單獨(dú)診斷對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)附表。

3 討論

IM能通過(guò)血液、唾液傳播，并長(zhǎng)期潛伏于機(jī)體淋巴組織中，正常情況下與機(jī)體相安無(wú)事，若免疫功能低下，EB病毒便活化形成感染，誘發(fā)不同程度疾病[1]。異型淋巴細(xì)胞的生成多是因?yàn)锽淋巴細(xì)胞受體與病毒結(jié)合后于持續(xù)復(fù)制及增殖的過(guò)程中被T淋巴細(xì)胞識(shí)別，誘發(fā)細(xì)胞毒性效應(yīng)。于循環(huán)血液中受刺激后增殖的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生形態(tài)變異，與正常的T淋巴細(xì)胞形態(tài)差異顯著。本研究中行外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查檢出真陽(yáng)性55例，真陰性158例，準(zhǔn)確度77.74%、靈敏度僅56.12%，漏診率較高。定量PCR技術(shù)重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單，能一步完成擴(kuò)增及產(chǎn)物的檢測(cè)，準(zhǔn)確地反映病毒感染及復(fù)制情況。本研究中采用定量PCR技術(shù)檢出真陽(yáng)性61例，真陰性163例，準(zhǔn)確度81.75%、靈敏度62.24%，雖略高于外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算無(wú)顯著差異（P＞0.05）。肖波等[2]采用外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合EBV-DNA定量分析對(duì)212例IM患兒實(shí)施檢測(cè)檢出陽(yáng)性190例，顯著高于單獨(dú)檢測(cè)。本研究中對(duì)274例疑似IM患兒采用外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查聯(lián)合定量PCR技術(shù)檢測(cè)，檢出真陽(yáng)性97例，真陰性157例，準(zhǔn)確度92.70%、靈敏度高達(dá)98.98%，遠(yuǎn)高于單獨(dú)檢測(cè)（P＜0.05），提示聯(lián)合檢測(cè)可提高檢測(cè)準(zhǔn)確度、靈敏度。