幾種新型殺菌劑對(duì)菜豆炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

戴啟星 祝忠有 張樹(shù)武 徐秉良

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，甘肅省農(nóng)作物病蟲害生物防治工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730070）

菜豆炭疽病是發(fā)生在菜豆豆莢和植株上的一種較為普遍的病害，在世界各地菜豆種植區(qū)內(nèi)均有發(fā)生，不僅為害菜豆，還為害豇豆等，造成不同程度的減產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)損失（Shao & Teri，1985）。菜豆炭疽病菌侵染豆莢后，豆莢表面產(chǎn)生大量紅褐色凹陷病斑，從而導(dǎo)致籽粒干癟產(chǎn)生畸形，嚴(yán)重影響菜豆的產(chǎn)量、商品價(jià)值以及食用價(jià)值，一般可減產(chǎn)20%～30%，重者絕產(chǎn)（許志剛，2000；董偉和張立平，2013）。目前防治菜豆炭疽病的方法主要為藥劑防治，包括種子處理和田間噴施農(nóng)藥。種子處理是通過(guò)藥劑拌種進(jìn)行防治，拌種前先通過(guò)人工選種淘汰和剔除染病種子，以提高藥劑拌種的防治效果；田間噴施化學(xué)農(nóng)藥更傾向于對(duì)病情的緩解，從而對(duì)癥下藥。Issa等（1983）、Gillard等（2012）使用福美雙、多菌靈、甲基硫菌靈和嘧菌酯對(duì)菜豆炭疽病進(jìn)行田間防治，效果顯著；李永鎬等（1995，1996）在原有的單劑防治病害的基礎(chǔ)上，將多菌靈、百菌清、甲基硫菌靈、福美雙按照不同的濃度比例制成10種混合制劑，也取得了很好的防治效果。我國(guó)的菜豆品種資源缺乏對(duì)炭疽病的抗性，且在許多菜豆種植區(qū)都不同程度地出現(xiàn)病原菌對(duì)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的現(xiàn)象，在生產(chǎn)上急需高效低毒的新型藥劑防治措施（劉曉云 等，1995）。本試驗(yàn)以咪鮮胺錳鹽、?！じｄ\、苯醚·溴菌腈、二氫蒽醌、苯醚甲環(huán)唑、多?！や寰鏋楣┰囁巹?，對(duì)菜豆炭疽病防治藥劑進(jìn)行了室內(nèi)藥效篩選，為有效防治菜豆炭疽病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2017年在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

供試菌種：菜豆炭疽病菌由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離保存。將4 ℃低溫保存于斜面的菜豆炭疽病菌接種于 PDA培養(yǎng)基進(jìn)行活化，并置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d后選擇生長(zhǎng)較好的1皿利用滅菌打孔器制取菌餅，接種于PDA培養(yǎng)基。

供試藥劑：50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（德國(guó)拜耳）、80%福·福鋅可濕性粉劑（天津施普樂(lè)農(nóng)藥技術(shù)發(fā)展有限公司）、25%苯醚·溴菌腈水分散粒劑（江蘇托球農(nóng)化有限公司）、66%二氫蒽醌水分散粒劑（江西禾益化工有限公司）、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（天津施普樂(lè)農(nóng)藥技術(shù)發(fā)展有限公司）、20%多?！や寰婵蓾裥苑蹌ㄖ袊?guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所廊坊農(nóng)藥中試廠）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 供試藥劑配制 將不同質(zhì)量的6種藥劑加入60 mL PDA培養(yǎng)基中充分搖勻，分別配制成50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑、25%苯醚·溴菌腈水分散粒劑濃度為 250、500、1 000、2 000、3 000 mg·L-1；80%福·福鋅可濕性粉劑、66%二氫蒽醌水分散粒劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、20%多?！や寰婵蓾裥苑蹌舛葹?50、500、1 000、1 500、2 000 mg·L-1。

1.2.2 室內(nèi)毒力測(cè)定 采用生長(zhǎng)速率法進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定。將不同質(zhì)量濃度藥劑分別制成含藥培養(yǎng)基平板，在無(wú)菌條件下從菜豆炭疽病菌菌落邊緣打取菌餅（Ф=0.5 cm），接種于含藥PDA培養(yǎng)基上。以含有無(wú)菌水的PDA培養(yǎng)基作為對(duì)照，接菌后置于25 ℃和16 h光照的人工氣候箱中，培養(yǎng)3 d后測(cè)量每個(gè)菌落的直徑，并計(jì)算菌落生長(zhǎng)抑制率。每個(gè)處理和對(duì)照均設(shè)3次重復(fù)。

菌落生長(zhǎng)抑制率= 〔（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-0.5）〕× 100%

將藥劑對(duì)菌落的抑制率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值（y），藥劑各濃度（mg·L-1）轉(zhuǎn)換成數(shù)值（x），然后求得毒力回歸方程（y=a+bx）和相關(guān)系數(shù)r，最后計(jì)算出供試藥劑抑制中濃度（EC50），比較各藥劑的相對(duì)抑制效果。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2003和DPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、圖表繪制和方差分析，采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行數(shù)據(jù)差異顯著性檢驗(yàn)（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 3種可濕性粉劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

從圖1～3可以看出，3種可濕性粉劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，?！じｄ\的抑菌效果最好，濃度為1 000 mg·L-1時(shí)抑菌率就達(dá)到了77.68%，平均菌落直徑1.02 cm；多?！や寰娲沃?，濃度為1 000 mg·L-1時(shí)抑菌率為59.65%，平均菌落直徑1.44 cm；而1 000 mg·L-1咪鮮胺錳鹽的抑菌率為57.94%，平均菌落直徑1.48 cm。3種可濕性粉劑的濃度與抑菌率呈正相關(guān)關(guān)系，濃度越大，抑菌效果也隨之增強(qiáng)，菜豆炭疽病菌的生長(zhǎng)量逐漸變小。從表1中毒力回歸方程和EC50也可以看出，3種殺菌劑對(duì)菜豆炭疽病菌的毒力大小為：?！じｄ\＞多?！や寰妫具漉r胺錳鹽。

圖1 50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

圖2 80%?！じｄ\可濕性粉劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

圖3 20%多福·溴菌腈可濕性粉劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

表1 不同濃度可濕性粉劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

2.2 3種水分散粒劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

從圖4～6和表2可以看出，3種水分散粒劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，苯醚甲環(huán)唑的抑菌效果最好，在濃度為1 000 mg·L-1時(shí)，抑菌率就達(dá)到了72.96%，平均菌落直徑1.13 cm；苯醚·溴菌腈次之，在濃度為1 000 mg·L-1時(shí)，抑菌率為63.52%，平均菌落直徑1.35 cm；而1 000 mg·L-1二氫蒽醌的抑菌率為57.94%，平均菌落直徑為1.48 cm。3種水分散粒劑的濃度也與抑菌率呈正相關(guān)關(guān)系；濃度增大時(shí)，抑菌效果也隨之增強(qiáng)，菜豆炭疽病菌的生長(zhǎng)量逐漸變小。從表2中毒力回歸方程和EC50可以看出，以上3種殺菌劑對(duì)菜豆炭疽病菌的毒力大小次序?yàn)椋罕矫鸭篆h(huán)唑＞苯醚·溴菌腈＞二氫蒽醌。

圖4 66%二氫蒽醌水分散粒劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

圖5 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

圖6 25%苯醚·溴菌腈水分散粒劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

表2 不同濃度水分散粒劑對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的影響

3 結(jié)論與討論

目前，使用化學(xué)藥劑防治菜豆炭疽病已有一些報(bào)道，Tu（1996）使用二嗦農(nóng)、克菌丹、甲基硫菌靈對(duì)菜豆進(jìn)行種子處理，以達(dá)到防治炭疽病的目的；李永鎬等（1995，1996）將多菌靈、百菌清、甲基硫菌靈、福美雙按照不同比例制成10種混合制劑也取得了很好的防治效果。由于近年來(lái)菜豆種植區(qū)不同程度地出現(xiàn)病原菌對(duì)傳統(tǒng)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的現(xiàn)象，本試驗(yàn)選用6種新型化學(xué)農(nóng)藥對(duì)菜豆炭疽病的防治進(jìn)行了研究，在提高作物產(chǎn)量、解決生產(chǎn)過(guò)程中存在的抗藥性問(wèn)題等方面具有一定的實(shí)踐意義。

前人對(duì)苯醚甲環(huán)唑、苯醚·溴菌腈、咪鮮胺錳鹽等農(nóng)藥的研究主要集中在蘋果、芒果、柑橘等果樹(shù)炭疽病的防治上（許文耀和林成輝，2002；蔡美蘭，2008；彭埃天 等，2008；宋曉兵 等，2009；許克權(quán) 等，2013；胡曉涵，2017），在菜豆炭疽病防治方面未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)選用6種新型化學(xué)農(nóng)藥對(duì)菜豆炭疽病進(jìn)行室內(nèi)藥效篩選和毒力測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明，6種供試殺菌劑對(duì)菜豆炭疽菌均有一定的抑制效果，并且隨著藥劑濃度的增加，對(duì)菜豆炭疽病菌菌落生長(zhǎng)的抑制作用也逐漸增強(qiáng)。其中防效較好的兩種藥劑為80%?！じｄ\可濕性粉劑、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，濃度為1 000 mg·L-1時(shí)的抑菌率分別達(dá)到了77.68%、72.96%。采用生長(zhǎng)速率法進(jìn)行殺菌劑室內(nèi)藥效篩選，僅代表藥劑直接接觸病原菌菌絲時(shí)的抑制作用，而藥劑的田間防治效果不僅與藥劑對(duì)病原菌菌絲的抑制有關(guān)，還與病原菌孢子產(chǎn)生、孢子萌發(fā)、施藥技術(shù)、施藥時(shí)間等因素有關(guān)。在后續(xù)研究中，還需與田間藥效試驗(yàn)相結(jié)合，為有效防治菜豆炭疽病提供科學(xué)依據(jù)。