3種餌料對(duì)中華絨螯蟹卵巢發(fā)育和育肥效果的影響

常國亮，葛永春，鄧 登，向朝林，成永旭,4，吳旭干

( 1.淮陰師范學(xué)院，江蘇省特色水產(chǎn)繁育工程實(shí)驗(yàn)室，江蘇 淮安 223300； 2.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)部淡水種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306； 3.淮安市澳華農(nóng)牧有限公司，江蘇 淮安 223399；4.上海海洋大學(xué)，上海市教委水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種協(xié)同創(chuàng)新中心，上海 201306 )

中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)，是我國重要的養(yǎng)殖蟹類。目前，我國中華絨螯蟹養(yǎng)殖主要投喂冰魚、玉米、小麥、黃豆及餅粕等傳統(tǒng)飼料，隨著養(yǎng)殖觀念和水平的不斷提高，已經(jīng)逐漸發(fā)展為配合飼料為主的養(yǎng)殖模式，但中華絨螯蟹成蟹養(yǎng)殖生殖蛻殼后，仍有很多養(yǎng)殖戶大量投喂冰魚和螺螄，期望促進(jìn)中華絨螯蟹性腺發(fā)育[1]。冰魚需要化凍、切魚，人工勞動(dòng)量大，且營養(yǎng)不均衡，飼料利用率低；投喂冰魚易導(dǎo)致池塘水質(zhì)惡化，造成中華絨螯蟹疾病和成蟹品質(zhì)不穩(wěn)定[2-4]，開發(fā)優(yōu)質(zhì)配合飼料來替代冰魚進(jìn)行后期育肥尤為重要[5]。

筆者在多年研究和實(shí)踐的基礎(chǔ)上，針對(duì)中華絨螯蟹性腺發(fā)育的營養(yǎng)需求和池塘養(yǎng)殖模式，開發(fā)了雌蟹專用膨化育肥飼料[6-7]。目前市場(chǎng)上中華絨螯蟹育肥飼料主要采用對(duì)設(shè)備要求不高、制造成本較低的硬顆粒飼料，這種飼料可以防止維生素和脂肪酸等氧化損失[8-9]，而投喂冰魚可以加速中華絨螯蟹卵巢發(fā)育，提前上市，肝胰腺和卵巢色澤較好，因此，在養(yǎng)殖后期均投喂冰魚進(jìn)行中華絨螯蟹強(qiáng)化育肥[1]。筆者比較了研發(fā)的膨化育肥飼料、常規(guī)硬顆粒育肥飼料和冰魚的主要營養(yǎng)成分，并分析這3種餌料對(duì)中華絨螯蟹育肥成活率、卵巢發(fā)育及色澤的影響，評(píng)價(jià)不同飼料的育肥效果，旨在為中華絨螯蟹配合飼料研發(fā)及推廣中華絨螯蟹強(qiáng)化育肥途徑提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

膨化飼料為澳華公司生產(chǎn)；硬顆粒飼料購自江蘇興化安豐飼料經(jīng)銷店；冰魚購自江蘇如東東凌漁港附近冷庫，主要為鳳鱭(Coiliamystus)和棘頭梅童魚(Collichthyslucidus)。3種餌料一次購足，冰箱中-20 ℃保存?zhèn)溆谩Ｔ囼?yàn)蟹體質(zhì)量65～90 g，取自上海海洋大學(xué)崇明中華絨螯蟹研究基地的成蟹養(yǎng)殖池塘，挑選規(guī)格整齊、體無外傷、肢體健全的生殖蛻殼后的雌蟹。試驗(yàn)蟹在循環(huán)水系統(tǒng)中暫養(yǎng)3 d后開始正式試驗(yàn)。試驗(yàn)前隨機(jī)解剖5只，測(cè)定其卵巢指數(shù)和肝胰腺指數(shù)，分別為0.62%和9.73%。

1.2 方法

試驗(yàn)于2016年9—11月在上海海洋大學(xué)崇明基地的循環(huán)水養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行(80 d)。試驗(yàn)分為膨化飼料、硬顆粒飼料和冰魚3組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。養(yǎng)殖容器為500 L的PE水槽(直徑1.08 m，高1 m)，每個(gè)水槽中放入10只蟹，養(yǎng)殖水槽為循環(huán)水系統(tǒng)，24 h充氣。試驗(yàn)期間，每日18:00投喂，配合飼料投喂量為總體質(zhì)量的1%～3%，冰魚為總體質(zhì)量的4%～5%，平均水溫高于20 ℃時(shí)，日投喂1次，平均水溫低于20 ℃，每2 d投喂1次，具體投喂量根據(jù)水溫和攝食等情況調(diào)整。投喂后于次日9:00時(shí)檢查殘餌和死亡情況，做好記錄。每日上午用虹吸法去除桶底殘餌和糞便1次，每7 d測(cè)定1次水質(zhì)指標(biāo)，根據(jù)水質(zhì)指標(biāo)少量換水。養(yǎng)殖期間，自然水溫為16～26 ℃，pH 7.0～9.0，平均溶解氧>5 mg/L，氨氮<0.5 mg/L，亞硝酸鹽<0.15 mg/L。

試驗(yàn)第40 d和第80 d，停食1 d，從每個(gè)水槽中隨機(jī)取3只蟹，解剖觀察卵巢發(fā)育。解剖前，用吸水紙擦干體表水分，用電子天平稱量體質(zhì)量(精確度0.01 g)，采用游標(biāo)卡尺測(cè)量甲殼長和甲殼寬(精確至1 μm)，取出肝胰腺和性腺，準(zhǔn)確稱量質(zhì)量后分別計(jì)算卵巢指數(shù)和肝胰腺指數(shù)，解剖后的蟹殼、肝胰腺和卵巢樣品于-40 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。試?yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)各水槽中所有存活個(gè)體數(shù)量，計(jì)算成活率。卵巢指數(shù)和肝胰腺指數(shù)按下式計(jì)算：

肝胰腺指數(shù)/%=m1/m×100%

卵巢指數(shù)/%=m2/m×100%

式中，m為體質(zhì)量，m1為肝胰腺質(zhì)量，m2為卵巢質(zhì)量。

1.3 生化分析和顏色測(cè)定

常規(guī)生化分析：取每種餌料1～2 g，粉碎過80目篩后在105 ℃下烘干測(cè)定水分含量；采用凍干機(jī)將冰魚冷凍去除水分用于其他生化指標(biāo)的測(cè)定。按AOAC[10]的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定蛋白質(zhì)(凱氏定氮法)和灰分(550 ℃灼燒至恒定質(zhì)量)含量；按Folch法[11]采用氯仿∶甲醇(2∶1，體積比)提取總脂，測(cè)定其含量。每種餌料均重復(fù)測(cè)定3個(gè)樣品。

脂肪酸組成分析：根據(jù)文獻(xiàn)[12]的方法分析脂肪酸含量，采用14%的三氟化硼—甲醇溶液對(duì)總脂進(jìn)行甲酯化處理，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至所需含量進(jìn)行脂肪酸分析，用高效氣相色譜儀6890A (G1530A美國Agiltent 公司)測(cè)定。毛細(xì)管柱型號(hào)為Omegawax320(30.0 m×0.25 mm, USA)，進(jìn)樣口溫度為200 ℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器的溫度為260 ℃，起始柱溫為140 ℃，逐步升至240 ℃，使所有組分全部出峰。脂肪酸定量用面積百分比法，每種餌料重復(fù)測(cè)定3次。

氨基酸分析：按照文獻(xiàn)[13]的方法進(jìn)行常規(guī)氨基酸和色氨酸水解及測(cè)定, 酸性水解采用6.0 mol/L的鹽酸溶液在110 ℃下水解樣品24 h，堿性水解采用5 mol/L氫氧化鈉溶液[含有5% SnCl2(m/V)]在110 ℃下水解 20 h，水解步驟和測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[13]。蛋氨酸和半胱氨酸測(cè)定采用過氧甲酸法進(jìn)行水解[14]。所有氨基酸分離和定量均在氨基酸自動(dòng)分析儀(S-433D德國賽卡姆公司)上進(jìn)行。每種餌料重復(fù)測(cè)定2次，結(jié)果用平均值表示。

顏色測(cè)定：取育肥80 d試驗(yàn)蟹的蟹殼、肝胰腺和卵巢用于色澤測(cè)定。采用色差儀(CR-400，日本柯尼卡美能達(dá)公司)在D65光源下測(cè)定各組織的L*、a*、b*值[L*代表亮度值，0(黑)～100(白)；a*代表紅綠軸的顏色飽和度，其中-a*為綠，+a*為紅；b*代表藍(lán)黃軸的顏色飽和度，其中-b*為藍(lán)，+b*為黃]。蟹殼和卵巢組織采用烘干樣品測(cè)定，測(cè)定前先將樣品在60 ℃下烘24 h。蟹殼烘干樣品直接用色差儀測(cè)定。頭胸甲有些區(qū)域不平整，且不同位置的顏色有一定差別，因此測(cè)量每只中華絨螯蟹頭胸甲上相對(duì)平整的6個(gè)測(cè)量點(diǎn)中的5個(gè)點(diǎn)，取其平均值作為該個(gè)體的測(cè)量值[15]。肝胰腺樣品脂肪含量較多，烘干后會(huì)嚴(yán)重氧化發(fā)黑，故肝胰腺樣品解凍后放入培養(yǎng)皿中，在其表面蓋一層保鮮膜后用色差儀測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用 Levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，當(dāng)數(shù)據(jù)不滿足齊性方差時(shí)，對(duì)百分比數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦或者平方根處理。用單因子方差分析對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析， Tukey s-b(K)法進(jìn)行多重比較；當(dāng)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后仍不滿足齊性方差時(shí)，采用Games-Howell非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較；以P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同餌料的生化組成

3種育肥餌料的常規(guī)生化組成見表1。冰魚的水分含量高達(dá)76.14%，硬顆粒飼料的水分含量最低，僅為9.31%；冰魚的粗蛋白含量最高，盡管硬顆粒飼料的粗蛋白含量顯著高于膨化飼料，但是兩種飼料的粗蛋白均在41%～44%之間。冰魚中粗脂肪和灰分含量最高，膨化飼料中灰分含量最低，硬顆粒飼料中粗脂肪含量最低。冰魚的總氨基酸含量、必需氨基酸和非必需氨基酸均明顯高于其他兩種飼料；硬顆粒飼料和膨化飼料的氨基酸組成接近，其中硬顆粒飼料中的半胱氨酸和甘氨酸明顯高于膨化飼料，其他氨基酸含量比較接近(表2)。3種餌料的飽和脂肪酸中以C16:0和C18:0為主，硬顆粒飼料中的總飽和脂肪酸含量最高，膨化飼料中總飽和脂肪酸的含量最低；單不飽和脂肪酸中以C16:1 、C18:1n9和C18:1n7為主，其中C18:1n9占了單不飽和脂肪酸總量的42%～70%，硬顆粒飼料中C18:1n9 、C18:1n7和C20:1n9均顯著高于膨化飼料，冰魚中C16:1含量顯著高于兩種飼料；多不飽和脂肪酸中以C18:2n6、C18:3n3、C20:5n3和C22:6n3為主，膨化飼料中C18:2n6含量最高，冰魚中C20:4n6、C20:5n3和C22:6n3含量最高，C18:2n6含量和C22：6n3/C20：5n3比值最低(表3)。冰魚中高不飽和脂肪酸總量最高，膨化飼料中高不飽和脂肪酸總量最低。

表1 不同餌料的常規(guī)生化組成 %

注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05)；水分?jǐn)?shù)據(jù)為濕質(zhì)量，其他為干質(zhì)量.

表2 3種餌料的氨基酸組成和含量(干質(zhì)量) %

2.2 成活率和性腺發(fā)育

硬顆粒組雌蟹育肥成活率最低，冰魚組和膨化飼料組無顯著差異(P>0.05)(圖1)，均超過93%。育肥40 d后，3個(gè)餌料組雌蟹的卵巢指數(shù)和肝胰腺指數(shù)均無顯著差異(P>0.05)，膨化飼料組的卵巢指數(shù)比另外兩組高出約1%，但是由于個(gè)體間誤差較大，3組間差異不顯著(P>0.05)；育肥80 d后，膨化飼料組和冰魚組的卵巢指數(shù)顯著高于硬顆粒組(P<0.05)，肝胰腺指數(shù)仍無顯著差異；育肥80 d的肝胰腺指數(shù)略低于育肥40 d(表4)。

圖1 攝食不同餌料的雌蟹的成活率柱狀圖上方不同字母表示平均值差異顯著(P<0.05).

2.3 色澤

不同餌料育肥80 d后雌體蟹殼、肝胰腺和卵巢的色澤指標(biāo)見表5。膨化飼料組蟹殼的紅度顯著高于硬顆粒飼料組(P<0.05)，冰魚組介于兩者之間，3組蟹殼的亮度和黃度均無顯著差異(P>0.05)。膨化飼料組的蟹殼紅度明顯高于硬顆粒飼料組(圖2a)。冰魚紅度顯著低于另外兩組(P<0.05)，膨化飼料組和冰魚組的黃度值顯著高于硬顆粒飼料組。膨化飼料組的卵巢最紅，冰魚組次之，硬顆粒飼料組紅度最差，這與色差儀測(cè)定結(jié)果呈現(xiàn)高度一致性。膨化飼料組卵巢紅度顯著高于另外兩組(P<0.05)，而硬顆粒飼料卵巢黃度最高，膨化飼料組黃度最低。

表3 3種餌料的脂肪酸組成 %

注：相對(duì)百分含量小于0.4%的脂肪酸表中未列出；n-3/n-6為n-3與n-6系列多不飽和脂肪酸含量的比值；同一行

數(shù)據(jù)上標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05).

表4 雌中華絨螯蟹攝食不同餌料時(shí)的卵巢指數(shù)和肝胰腺指數(shù) %

注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05).下同.

圖2 不同餌料對(duì)雌體蟹殼、肝胰腺和卵巢色澤的影響a.蟹殼，b.肝胰腺，c.卵巢；每張小圖中上行為硬顆粒飼料組，中行為膨化飼料組，下行為冰魚組.

3 討 論

3.1 不同餌料的生化組成

3種餌料中，冰魚的粗蛋白、粗脂肪、灰分及水分含量皆最高。冰魚灰分含量高與其骨骼及體內(nèi)磷含量直接相關(guān)，而水分遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于兩種配合飼料，表明以同樣質(zhì)量的冰魚作為育肥餌料真正提供的干物質(zhì)最少，不到冰魚質(zhì)量的25%。而配合飼料受飼料質(zhì)量和制粒工藝要求，其水分含量均低于冰魚。目前市場(chǎng)上冰魚價(jià)格約為3.5 元/kg，而粗蛋白含量約42%的中華絨螯蟹硬顆料飼料、膨化料價(jià)格分別約為6元/kg、9元/kg，看似以冰魚作為中華絨螯蟹育肥料比配合飼料價(jià)格便宜，但換算為干物質(zhì)后，其價(jià)格要高于配合飼料。冰魚的總氨基酸含量、必需氨基酸和非必需氨基酸均明顯高于兩種飼料，硬顆粒飼料和膨化飼料的氨基酸組成比較接近，表明同樣干物質(zhì)的冰魚可比兩種配合飼料提供更多的氨基酸，但投喂量不當(dāng)，冰魚投喂過多時(shí)，于養(yǎng)殖水體中加入過多的氨氮，使中華絨螯蟹養(yǎng)殖池塘水質(zhì)惡化[2-3]。

3.2 不同餌料對(duì)雌蟹成活率和卵巢發(fā)育的影響

3種餌料中，硬顆粒飼料組育肥的中華絨螯蟹成活率最低，不到70%，而冰魚組和膨化飼料組中華絨螯蟹成活率均超過93%；生殖蛻殼后的中華絨螯蟹經(jīng)育肥后即可上市，如果育肥階段成活率較低，造成的損失更大，由此看來，硬顆粒飼料作為雌蟹育肥飼料并無優(yōu)勢(shì)。硬顆粒飼料組育肥中華絨螯蟹成活率低，可能與硬顆粒飼料的水穩(wěn)定性、誘食性和消化吸收率不如膨化飼料和冰魚有關(guān)。

蟹黃(肝胰腺及卵巢)和蟹膏(精巢)是中華絨螯蟹的主要可食用部分，含有豐富的營養(yǎng)成分[16]，肝胰腺指數(shù)和卵巢指數(shù)是評(píng)價(jià)蟹類食用價(jià)值的重要指標(biāo)[17-18]。本試驗(yàn)中，育肥80 d時(shí)，3種餌料組蟹的卵巢指數(shù)均顯著高于育肥40 d，表明育肥40 d時(shí)尚不能達(dá)到理想的育肥效果；育肥40 d時(shí)，肝胰腺指數(shù)較高，因?yàn)楦我认偈侵腥A絨螯蟹的營養(yǎng)貯存器官和脂類代謝中心[19-20]，此時(shí)，營養(yǎng)還未向卵巢充分轉(zhuǎn)移。此時(shí)食用，肝胰腺往往具有苦味。因而育肥時(shí)間對(duì)蟹類育肥過程中肝胰腺指數(shù)、卵巢指數(shù)和蟹的營養(yǎng)成分具有顯著影響[12]。要達(dá)到蟹黃與蟹膏豐滿的理想育肥效果，中華絨螯蟹育肥時(shí)間要超過40 d。育肥80 d時(shí)，硬顆粒飼料組中華絨螯蟹卵巢指數(shù)顯著低于膨化飼料組與冰魚組，推測(cè)與硬顆粒飼料粗脂肪含量低，且多不飽和脂肪酸低于膨化飼料，而高度不飽和脂肪酸低于冰魚有關(guān)[21]。同時(shí)也表明，選擇硬顆粒飼料作為育肥飼料很難實(shí)現(xiàn)蟹黃與蟹膏豐滿的育肥效果，而膨化飼料可替代冰魚實(shí)現(xiàn)蟹黃與蟹膏豐滿的理想育肥效果。

3.3 不同餌料對(duì)雌蟹色澤的影響

在消費(fèi)市場(chǎng)中，中華絨螯蟹整體呈紅色，雌蟹卵巢也呈紅色(紅膏)、肝胰腺呈橘黃色被認(rèn)為是優(yōu)質(zhì)蟹[22]，價(jià)格也高。中華絨螯蟹體色取決于其體內(nèi)的類胡蘿卜素含量[23-24], 但中華絨螯蟹自身不能合成類胡蘿卜素，能將食物中的類胡蘿卜素直接沉積或轉(zhuǎn)化為自身所需的類胡蘿卜素[25-26]。研究表明，在中華絨螯蟹餌料中添加類胡蘿卜素源可顯著改善中華絨螯蟹體色[15,27]。本研究中，膨化飼料組蟹殼和卵巢紅度優(yōu)于另外兩組，且肝胰腺黃度與冰魚組一致，優(yōu)于硬顆料飼料組，表明用膨化飼料養(yǎng)成的雌蟹具有更好的品相。同樣條件下，相對(duì)硬顆粒飼料與冰魚，用膨化飼料養(yǎng)成的中華絨螯蟹收益更高，表明在飼料中添加天然類胡蘿卜素源優(yōu)化配方，研發(fā)的膨化飼料具有顯著改善中華絨螯蟹體色的效果。

全程投喂配合飼料可保證池塘養(yǎng)殖中華絨螯蟹的正常生長和性腺發(fā)育[28]，綜合本試驗(yàn)膨化飼料對(duì)中華絨螯蟹成活率、育肥速度、卵巢指數(shù)(膏豐滿度)和蟹體顏色的育肥效果來看，用膨化飼料替代冰魚和硬顆粒飼料在池塘養(yǎng)殖條件下進(jìn)行雌蟹育肥是可行的，相對(duì)于冰魚，還可減少投餌勞動(dòng)強(qiáng)度、降低管理難度。因不同批次的冰魚種類和新鮮度有一定差異，所以用冰魚進(jìn)行育肥很難保持育肥蟹品質(zhì)的穩(wěn)定性，而膨化飼料的原料、加工工藝均可控，其飼料品質(zhì)穩(wěn)定，育肥的中華絨螯蟹品質(zhì)也具有穩(wěn)定性。另外，不同家系中華絨螯蟹的生長性能不同，對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境的適應(yīng)力也不相同[29]，硬顆粒飼料、膨化飼料和冰魚對(duì)不同家系中華絨螯蟹生長、卵巢發(fā)育和育肥效果的影響有待進(jìn)一步研究。