miR-146、miR-147在肺結(jié)核患者中的表達(dá)及相關(guān)性分析

賀晨艷, 龔軍俠, 盧新蘭, 馬 維, 張?zhí)煜?/p>

(陜西省結(jié)核病防治院 內(nèi)科, 陜西 西安, 710061)

現(xiàn)階段臨床上肺結(jié)核的生物學(xué)指標(biāo)包括炎性指標(biāo)、趨化蛋白等，但這些指標(biāo)無(wú)法很好地區(qū)分活動(dòng)性肺結(jié)核及潛伏感染患者，影像學(xué)檢測(cè)也缺乏典型的特征，因而需要尋求一種特異性及敏感性較高的生物學(xué)指標(biāo)[1-2]。微小RNAs(miRNA)是機(jī)體代謝中的活性RNA分子，與機(jī)體的代謝、免疫、內(nèi)分泌等系統(tǒng)密切相關(guān)，且與腫瘤、心血管事件的發(fā)生也有一定關(guān)聯(lián)。本研究發(fā)現(xiàn)miR-146、miR-147在肺結(jié)核患者中呈高表達(dá)態(tài)，且與肺結(jié)核患者的病變程度存在相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年1月本院收治的51例肺結(jié)核患者為結(jié)核組，同期本院收治的49例其他肺部疾病患者為疾病對(duì)照組，以及同期本院進(jìn)行健康體檢的60例人群為健康對(duì)照組。結(jié)核組中男28例，女23例，年齡35～64歲，平均(51.08±1.56)歲; 疾病對(duì)照組中男26例，女23例，年齡33～63歲，平均(50.98±2.15)歲; 健康對(duì)照組中男33例，女27例，年齡36～59歲，平均(49.29±3.26)歲。3組性別、年齡等一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]; ② 患者意識(shí)清晰，能夠配合進(jìn)行調(diào)研; ③ 小學(xué)及以上文化; ④ 患者及其家屬對(duì)本次調(diào)研過(guò)程、方法、原理清楚明白，并簽署知情同意書; ⑤ 經(jīng)醫(yī)院倫理會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施本次調(diào)研; ⑥ 影像學(xué)檢查顯示肺部存在滲出性病變或纖維空洞。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并精神障礙者; ② 合并其他器質(zhì)性疾病，如冠心病、腎衰竭者; ③ 合并意識(shí)障礙者; ④ 合并自身免疫系統(tǒng)疾病者; ⑤ 近期接受激素類藥物或免疫抑制劑治療者。

1.2 方法

測(cè)定結(jié)核組、疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組患者入組時(shí)miR-146、miR-147的表達(dá)程度，將結(jié)核組按照結(jié)核病變程度分為初治型肺結(jié)核及難治型肺結(jié)核，比較2組miR-146、miR-147的表達(dá)程度，對(duì)結(jié)核組患者實(shí)施治療，對(duì)比不同治療時(shí)期結(jié)核組患者miR-146、miR-147的表達(dá)程度。

1.3 觀察指標(biāo)

采集結(jié)核組、疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組患者干預(yù)前空腹靜脈血5 mL，使用離心機(jī)離心后取上層清液，使用miRNA提取試劑盒提取sRNA, 而后使用核算濃度檢測(cè)儀檢測(cè)其純度與濃度，檢測(cè)完畢后置于80 ℃下保存，待樣本采集完畢后統(tǒng)一檢測(cè), miR-146、miR-147表達(dá)采用熒光定量PCR法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)3組患者miR-146、miR-147的表達(dá)程度進(jìn)行比較。

使用結(jié)核菌特異性酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)及影像學(xué)檢測(cè)結(jié)果將結(jié)核組患者分為初治型肺結(jié)核及難治型肺結(jié)核，初治型肺結(jié)核胸片無(wú)明顯異常，難治型肺結(jié)核胸片可見明顯結(jié)核病灶或肺纖維化，對(duì)比2組患者miR-146、miR-147的表達(dá)程度。

參照《中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃實(shí)施工作指南(2008年版)》對(duì)結(jié)核組患者實(shí)施治療，藥物選擇為利福平、異煙肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺，服藥均為1次/d，連續(xù)服用4個(gè)月，檢測(cè)治療前、治療1個(gè)月及治療2個(gè)月時(shí)結(jié)核組患者miR-146、miR-147表達(dá)程度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 干預(yù)前不同組別患者miR-146、miR-147的表達(dá)程度比較

治療前3組miR-146、miR-147的表達(dá)程度為結(jié)核組高于疾病對(duì)照組，疾病對(duì)照組高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

表1 3組患者干預(yù)前miR-146、miR-147表達(dá)程度對(duì)比

與健康對(duì)照組相比, *P<0.05; 與結(jié)核組相比, #P<0.05。

2.2 不同病變程度結(jié)核患者miR-146、miR-147表達(dá)程度比較

難治型肺結(jié)核患者miR-146、miR-147表達(dá)程度依次為(2.63±0.31)、(2.97±0.38), 高于初治型肺結(jié)核患者(1.68±0.51)、(1.79±0.29), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 不同治療時(shí)期結(jié)核組患者miR-146、miR-147表達(dá)程度

隨著治療時(shí)間的推進(jìn)，結(jié)核患者miR-146、miR-147表達(dá)程度呈逐漸下降趨勢(shì)，以治療前、治療1個(gè)月及治療2個(gè)月作為觀察點(diǎn)，各觀察點(diǎn)miR-146、miR-147表達(dá)程度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同治療時(shí)期結(jié)核組患者miR-146及miR-147表達(dá)程度(n=50)

與治療前相比, *P<0.05; 與治療1個(gè)月相比, #P<0.05。

2.4 ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，不同時(shí)間點(diǎn)miR-146、miR-147對(duì)肺結(jié)核具有較好的診斷意義，敏感度和特異度均較高，見表3。

表3 不同時(shí)間點(diǎn)miR-146及miR-147的ROC分析

3 討 論

結(jié)核病的主要臨床癥狀包括低熱、盜汗、乏力、消瘦等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)咯血、呼吸困難，早期的鑒別與診斷對(duì)結(jié)核病的治療具有重要的意義，能夠顯著改善患者預(yù)后，縮短其病程[4]。傳統(tǒng)肺結(jié)核診斷技術(shù)主要為炎性因子檢測(cè)、結(jié)核菌素試驗(yàn)、影像學(xué)檢查等，但上述方法均缺乏特異性，敏感性也不高。

MicroRNA是一種轉(zhuǎn)錄后有22個(gè)氨基酸的小分子物質(zhì), 2001年Ambros[5]研究發(fā)現(xiàn)miRNA能夠調(diào)控線蟲幼蟲發(fā)育時(shí)序，數(shù)年后其他學(xué)者的研究指出miRNA能夠通過(guò)影響RNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合，從而對(duì)個(gè)體活動(dòng)起到負(fù)調(diào)控作用?，F(xiàn)階段已有約1 500個(gè)人類miRNA被發(fā)現(xiàn)，其中30%以上的基因能夠通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)來(lái)參與個(gè)體的生長(zhǎng)、免疫、發(fā)育等過(guò)程，而miRNA在肺結(jié)核發(fā)病機(jī)制中的作用已得到證實(shí)。李奕平等[6]研究指出, miR-146基因包括miR-146a及miR-146b兩類亞型，在各類免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞中呈高表達(dá)態(tài)，能夠促進(jìn)Treg細(xì)胞的增殖和分化，能夠調(diào)節(jié)個(gè)體的免疫反應(yīng)。祝源[7]研究也發(fā)現(xiàn), miR-146高表達(dá)的大鼠腎臟損傷會(huì)大于低表達(dá)大鼠。Cardwell等[8]研究指出, miR-147在冠狀動(dòng)脈病變患者中呈高表達(dá)，柳家榮等[9]研究發(fā)現(xiàn), miR-147能夠靶向調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的增殖與凋亡，這些都提示miR-146、miR-147在調(diào)節(jié)個(gè)體免疫系統(tǒng)、調(diào)控細(xì)胞增殖分化中具有重要作用。

本研究結(jié)果顯示，與疾病對(duì)照組及健康對(duì)照組比較，結(jié)核組患者miR-146、miR-147呈高表達(dá)，且難治型肺結(jié)核患者個(gè)體miR-146、miR-147表達(dá)強(qiáng)度大于初治型肺結(jié)核患者，考慮原因?yàn)閙iR-146、miR-147能夠通過(guò)調(diào)控轉(zhuǎn)錄后蛋白水平來(lái)調(diào)控靶基因功能，上述miRNA廣泛參與細(xì)胞的分化、增殖、凋亡、血管生成中，與個(gè)體免疫系統(tǒng)存在密切聯(lián)系。劉守江等[10]研究也指出, miR-146、miR-147能夠通過(guò)抑制T細(xì)胞的增殖來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體的抗結(jié)核免疫反應(yīng)，因而在結(jié)核患者中miR-146、miR-147呈現(xiàn)高表達(dá)。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-146、miR-147在診斷肺結(jié)核中具有較高的特異性和敏感度，分析其原因?yàn)閙iR-146、miR-147與個(gè)體炎性反應(yīng)關(guān)系密切，能夠通過(guò)信號(hào)通路來(lái)進(jìn)行負(fù)向反饋，調(diào)節(jié)結(jié)核病患者的免疫應(yīng)答，不同病變時(shí)期的炎性反應(yīng)強(qiáng)度不同，因而檢測(cè)miR-146、miR-147表達(dá)也有顯著差異。