不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度和細(xì)菌數(shù)的影響

永榮，姜向宏

（1.內(nèi)蒙古鄂爾多斯市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000；2.內(nèi)蒙古鄂托克旗家畜改良工作站，內(nèi)蒙古 鄂托克 010018）

反芻動物的瘤胃是一個龐大的發(fā)酵罐，飼料中大部分有機(jī)物質(zhì)、纖維物質(zhì)和淀粉的消化都是依靠瘤胃微生物來完成的[1]。瘤胃微生物在反芻動物營養(yǎng)代謝方面起著舉足輕重的作用。本試驗擬通過飼喂3種不同纖維水平的日糧來研究日糧結(jié)構(gòu)對瘤胃微生物蛋白和瘤胃細(xì)菌數(shù)量的影響，并通過相關(guān)性分析來研究瘤胃細(xì)菌濃度、細(xì)菌數(shù)量與微生物蛋白濃度間的相關(guān)關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 選擇體況良好、體重50kg左右的鄂爾多斯細(xì)毛羊30只，統(tǒng)一驅(qū)蟲，安裝永久性瘤胃瘺管和十二指腸瘺管進(jìn)行試驗。試驗羊隨機(jī)均分為3組（1組、2 組和 3組），分別飼喂精粗比為 1∶9、3∶7、5∶5 的日糧。

1.2 試驗日糧 日糧配制參照中國美利奴羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)[2]，綿羊的能量維持需要為 450kJ/kg·BW0.75，蛋白質(zhì)需要為350mgN/kg·BW0.75，飼喂水平為1.3倍的維持需要。

1.3 飼養(yǎng)管理 通過控制采食量來控制各試驗組綿羊?qū)I養(yǎng)成分的攝入量。試驗羊采食的青干草從呼倫貝爾市購進(jìn)，經(jīng)打草機(jī)一次性打碎備用。試驗日糧一次備齊，分別于7：00和19：00飼喂，自由采食，自由飲水，單圈飼養(yǎng)。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 瘤胃微生物蛋白測定 進(jìn)入正式試驗后連續(xù)采樣3 d，分別在以下時間點(diǎn)上采樣：早晨飼喂后0、2、4、8、12h，每次采集瘤胃液約 50mL。瘤胃液用 2 層紗布過濾后，濾液于4000r/min離心15 min，取上清液測定瘤胃微生物蛋白含量。所有上清液樣品均在-20℃下冷凍保存，待測。

將不同采樣時間點(diǎn)的冷凍上清液樣品解凍，用移液管移取20.0mL，在高速冷凍離心機(jī)上以12000r/min離心30min，取沉淀用0.9%氯化鈉溶液沖洗2遍，每次沖洗后均以12000r/min離心30min，棄掉上清液，將沉淀小心無損地轉(zhuǎn)移到消化管中，用凱氏定氮法測定含氮量，然后折算出菌體蛋白含量。

1.4.2 瘤胃細(xì)菌計數(shù) 分別于飼喂后0、2、4、8、12 h用采樣管從瘤胃不同部位快速吸取瘤胃液50mL左右，裝入事先預(yù)熱到39℃并通入二氧化碳?xì)怏w的小瓶中，密封，39℃保溫，取回后迅速勻漿15s，用兩層紗布過濾，濾液用來進(jìn)行細(xì)菌計數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)采用SAS軟件和Excel2003軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度的影響 結(jié)果見表1。

表1 不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度的影響 mg/100mL

由表1可見，不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度的影響無顯著差異（P＞0.05），但數(shù)值上呈現(xiàn)一定趨勢，即：3組＞2組＞1組。從瘤胃微生物蛋白濃度的動態(tài)變化來看，3個組的變化趨勢相同，均是飼喂前微生物蛋白濃度最高，飼喂后4h最低。

影響瘤胃微生物蛋白濃度的因素很多，日糧中精料比例、飼喂頻率、飼喂水平、取樣時間以及動物的個體差異等都會對其產(chǎn)生影響。本試驗各組之間差異不顯著可能就是多種因素影響的結(jié)果。

2.2 不同精粗比日糧對瘤胃細(xì)菌數(shù)量的影響 結(jié)果見表2。

表2 不同精粗比日糧對瘤胃細(xì)菌數(shù)量的影響

由表2可見，隨著日糧中精料比例的增加，瘤胃細(xì)菌數(shù)量有增加的趨勢，說明日糧精料比例高能夠促進(jìn)瘤胃細(xì)菌生長。從不同處理組各時間點(diǎn)的平均值可以看出，3組的瘤胃細(xì)菌數(shù)量（11.00×109個/mL）高于1 組（8.73×109個/mL）和 2 組（9.22×109個/mL），但經(jīng)統(tǒng)計分析差異不顯著（P＞0.05）。

由圖1細(xì)菌變化趨勢圖可見，各組瘤胃細(xì)菌數(shù)量的動態(tài)變化規(guī)律基本一致。瘤胃細(xì)菌濃度在飼喂前最高，而后隨著飼喂時間的變化呈現(xiàn)一定的波動，基本上在2h或4h時最低。在飼喂后2h或4h時細(xì)菌數(shù)量最少，以后逐漸上升，8h時出現(xiàn)峰值，之后又開始下降直到第2次飼喂前。1組瘤胃細(xì)菌數(shù)量的變化較明顯，在第2次飼喂前出現(xiàn)最低值，但變化趨勢與其他各組一致。說明不同精粗比日糧對瘤胃細(xì)菌的影響有一些相似性。各組最高值和最低值出現(xiàn)的時間點(diǎn)不一致，說明不同精粗比日糧對瘤胃細(xì)菌的生長周期是有一定影響的。

結(jié)合表1和表2來看，同一試驗組的瘤胃微生物蛋白濃度和細(xì)菌數(shù)的動態(tài)變化趨勢基本一致。同一試驗組在不同精粗比日糧條件下，瘤胃微生物蛋白濃度和細(xì)菌數(shù)的動態(tài)變化呈現(xiàn)出相同的趨勢：飼喂前最高，飼喂后2h出現(xiàn)最低值，以后逐漸上升，在10h或12h出現(xiàn)第2次峰值。這跟前人報道的結(jié)果一致[3-4]。

圖1 瘤胃細(xì)菌濃度和數(shù)量間的關(guān)系

2.3 瘤胃細(xì)菌濃度和細(xì)菌數(shù)量間的相關(guān)關(guān)系 關(guān)于瘤胃細(xì)菌濃度和細(xì)菌數(shù)量間的相關(guān)性研究結(jié)果見圖1。由圖1可見，瘤胃細(xì)菌濃度與瘤胃細(xì)菌數(shù)量呈現(xiàn)很高的相關(guān)性（y=0.4209x，R2=0.9972）。說明對于同一動物來說，細(xì)菌濃度就是衡量細(xì)菌數(shù)量的一個很好的指標(biāo)，今后可以只通過測定細(xì)菌濃度即可知曉細(xì)菌數(shù)量的變化規(guī)律。

2.4 瘤胃微生物蛋白濃度與細(xì)菌濃度間的相關(guān)性 結(jié)果見圖2。由圖2可見，瘤胃微生物蛋白濃度與細(xì)菌濃度之間的相關(guān)性很低（R2=0.2271）。說明瘤胃微生物蛋白與瘤胃細(xì)菌菌群之間沒有很高的相關(guān)性。原因可能是：（1）有許多研究表明，實驗室條件下可培養(yǎng)的細(xì)菌數(shù)量只占到瘤胃細(xì)菌數(shù)量的1%～10%，這對結(jié)果的分析具有一定的影響；（2）本試驗測定的微生物蛋白是粗蛋白含量，包括了活的細(xì)菌蛋白和部分已經(jīng)死了的菌體蛋白，這對微生物蛋白濃度產(chǎn)生了一定的影響；（3）微生物分離過程中存在誤差；（4）試驗動物數(shù)量也會對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響。

圖2 瘤胃微生物蛋白濃度與細(xì)菌濃度間的關(guān)系

3 結(jié)論

不同精粗比日糧對綿羊瘤胃微生物蛋白濃度和細(xì)菌數(shù)量的影響差異不顯著（P＞0.05）；本日糧條件下，瘤胃細(xì)菌數(shù)量和瘤胃細(xì)菌濃度間存在高度正相關(guān)關(guān)系，瘤胃微生物蛋白濃度和細(xì)菌濃度間的相關(guān)性很低。