宮頸癌患者外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞數(shù)量及血清IL-10、TGF-β表達水平

孫 會 王丙娟 孫慧霞

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 南陽 473061)

宮頸癌發(fā)病率呈不斷上升趨勢，且在我國女性惡性腫瘤中位居第2位〔1,2〕。目前，對于宮頸癌具體發(fā)病機制尚不十分明確。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞參與機體的免疫耐受調(diào)節(jié)，且主要與腫瘤免疫逃逸關(guān)系緊密〔3,4〕。近年來研究表明，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞、白細(xì)胞介素(IL)-10及轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β相關(guān)〔5,6〕。本研究旨在探討宮頸癌患者外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的數(shù)量及血清IL-10、TGF-β的表達水平。

1 資料與方法

1.1一般資料 選自南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院2015年1月至2016年12月收治的宮頸癌患者83例，年齡24～75歲，平均(57.42±6.57)歲；鱗癌47例、腺癌36例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期32例，Ⅲ、Ⅳ期51例。入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)均為初治，且通過病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證實為宮頸癌；(2)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核，簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并肺癌、乳腺癌、肝癌等其他惡性腫瘤者；(2)伴自身免疫性疾病；(3)精神疾病者；(4)合并肺、腎、肝等功能嚴(yán)重異常者。同期選擇我院健康志愿者59例對照組，均為女性，年齡24～75歲，平均(56.89±6.79)歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2主要試劑和儀器 IL-10試劑盒(上海依科賽生物制品有限公司)，TGF-β試劑盒(廣州蕊特生物科技有限公司)，CD5-FITC、CD1d-PE、CD19-Percp-Cy5.5單克隆抗體(美國BD公司)。美國BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀。

1.3外周血B細(xì)胞亞群比例檢測 所有研究對象分別采集外周血2 ml。抗凝外周血淋巴細(xì)胞表面分子采用流式細(xì)胞多色熒光法標(biāo)記，具體為CD5-FITC、CD1d-PE、CD19-Percp-Cy5.5標(biāo)記外周血淋巴細(xì)胞，以BD FACS Diva軟件，CD19+設(shè)門識別B細(xì)胞，分析外周血B細(xì)胞各亞群比例，結(jié)果以其占CD19+B淋巴細(xì)胞百分比表示。

1.4血清IL-10、TGF-β檢測 所有研究對象分別采集外周血2 ml，以3 000 r/min，離心半徑15 cm離心10 min，分離血清，置于-20℃保存待測，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測。

1.5觀察指標(biāo) 觀察兩組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例；血清IL-10、TGF-β表達；宮頸癌不同分期CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例及血清IL-10、TGF-β表達。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例及血清IL-10、TGF-β水平比較 宮頸癌組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例明顯高于對照組；血清IL-10、TGF-β表達顯著高于對照組(均P<0.05)，見表1。

2.2宮頸癌不同分期外周血B細(xì)胞亞群比例及血清IL-10、TGF-β水平比較 宮頸癌Ⅰ、Ⅱ期組CD19+CD5+/CD19+B和CD19+CD5+CD1d+/CD19+B比例顯著低于Ⅲ、Ⅳ期組(P<0.05)；血清IL-10、TGF-β表達顯著高于Ⅲ、Ⅳ期組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1 兩組外周血B細(xì)胞亞群比例及血清IL-10、TGF-β水平比較

表2 宮頸癌不同分期外周血B細(xì)胞亞群比例及血清IL-10、TGF-β水平比較

3 討 論

宮頸癌是一種免疫原性腫瘤，主要與高危人乳頭狀瘤病毒亞型密切相關(guān)。近年來，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在腫瘤免疫耐受中越來越受重視〔7，8〕。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞主要通過分泌IL-10、TGF-β等抑制性細(xì)胞因子，調(diào)控樹突細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞及效應(yīng)性T細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞的功能，從而維持機體免疫功能〔9，10〕?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，在腫瘤、感染性疾病及自身免疫性等疾病中該免疫平衡通常有所失調(diào)〔11,12〕。近年來研究表明，除分泌抗體的致病性B細(xì)胞外，還存在分泌TGF-β和IL-10等細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，分別稱為產(chǎn)生TGF-β1的Br3細(xì)胞或IL-10的Br1細(xì)胞〔13〕。其中IL-10具有免疫抑制作用，TGF-β具有直接抑制CD8+CTLs激活，明顯降低腫瘤免疫效果〔14，15〕。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞通過分泌抑制性抗體或產(chǎn)生抑制性細(xì)胞因子影響其他免疫細(xì)胞功能，從而減輕炎癥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞發(fā)揮腫瘤免疫逃逸可能調(diào)節(jié)機制主要涉及以下途徑：①調(diào)節(jié)性B細(xì)胞上的CD40與腫瘤細(xì)胞上的CD40L相互作用，從而抑制CD8+T細(xì)胞的生物學(xué)活性，誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分泌IL-10，下調(diào)CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌干擾素(IFN)-γ；②調(diào)節(jié)性B細(xì)胞大量分泌的TGF-β能夠誘導(dǎo)CD4+效應(yīng)性T細(xì)胞轉(zhuǎn)化成調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，從而促進腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和增殖。有研究報道，調(diào)節(jié)性B細(xì)胞免疫表型呈多樣性，而其中CD19+CD5+CD1d+的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞最能代表B10的免疫表型，由于其表達標(biāo)記均位于細(xì)胞膜，故而樣本處理簡單、快速，適用于臨床研究。本研究結(jié)果表明，宮頸癌患者CD19+CD5+CD1d+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞增多，且隨著疾病進展而增高。此外，宮頸癌患者血清IL-10、TGF-β表達上升，且隨著疾病進展而增高。

綜上，外周血調(diào)節(jié)性B細(xì)胞及血清IL-10和TGF-β可能與宮頸癌進展相關(guān)。